血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响

背景:在体外构建组织工程材料的过程中,快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要,但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低。目的:观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成。材料:正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条,由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供。方法:采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞,以1×108L-1的密度接种于24孔培养板,设立2组,实验组加入150g/L血管内皮细胞生长因子,对照组不加入任何细胞因子。主要观察指标:观察细胞形态变化,MTT法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达。结果:接种后6h细胞开始贴壁,48h后细胞完全贴壁生长,出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞,以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长集落;原代培养1周后细胞以梭形为主;传代后24h细胞基本完成贴壁,48h细胞开始分裂增殖,5～7d可见多核的成纤维样细胞贴壁,呈长杆状、三角形、梭形等。与对照组比较,实验组细胞生长状态较好,增殖较快,单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235,P<0.05),CD166阳性细胞率显著升高(t=1.638,P<0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子可促进人脐静脉间充质干细胞贴壁,且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化。

酒精对人脐静脉间充质干细胞治疗肾虚血瘀型骨质疏松症大鼠的影响

目的:探讨酒精对人脐静脉间充质干细胞(hUV-MSCs)治疗肾虚血瘀型骨质疏松症(OP)大鼠的影响。方法:取雄性SD大鼠30只,采用酒精腹腔注射法制备肾虚血瘀型OP模型,造模成功后将SD大鼠随机分为酒精组、治疗组和对照组,每组10只。酒精组给予酒精[浓度20%,10 ml/(kg·次),1次/周]治疗,对照组在酒精组基础上给予hUVMSCs(1次/周,10^(7)个细胞/次)治疗,治疗组停止酒精注射但给予hUV-MSCs(1次/周,10^(7)个细胞/次)治疗,取SD大鼠10只腹腔注射法生理盐水作为假手术组,给予生理盐水[1次/周,10 ml/(kg·次)]治疗,均连续治疗8周。HE染色检测大鼠骨组织病理损伤(骨小梁面积),TUNEL染色检测观察骨组织细胞凋亡(TUNEL阳性细胞数),µCT检测骨体积分数(BVF)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分离距离(Tb.Sp),ELISA检测血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平。结果:酒精组、对照组、治疗组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均低于假手术组(P<0.05),骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均高于假手术组(P<0.05);治疗组与对照组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均高于酒精组(P<0.05),骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均低于酒精组(P<0.05);治疗组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均高于对照组,骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均低于对照组(P<0.05)。结论:酒精能明显降低hUV-MSCs治疗肾虚血瘀型OP大鼠的效果。

人脐静脉间充质干细胞体外诱导分化为神经元的可行性

目的：探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下层间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的可行性，分析体外分离纯化、原代及传代培养的最佳条件，为神经组织修复选择理想的种子细胞来源。方法：实验于2006—04／12在辽宁医学院解剖学实验室完成。①对象：取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条，由辽宁医学院附属第一医院提供，产妇及其家属均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：无菌条件下用1g/L Ⅰ型胶原酶消化脐静脉内皮及内皮下层，收集的细胞按5× 10^7 L^-1，1× 10^8 L^-1，5× 10^8 L^-1，1× 10^9 L^-1，3× 10^9 L^-1密度接种进行原代培养，待细胞80％融合时胰酶消化传代。取第2代细胞，诱导组经含有3μmo／L β-巯基乙醇、20％胎牛血清的DMEM预诱导液处理后，换成含10g/L二甲基亚砜、100mmol／L丁化羟基茴香醚的无血清DMEM诱导液进行诱导。未诱导组将诱导液更换为无血清DMEM。③实验评估：记录原代培养过程中不同接种密度细胞贴壁所需时间。免疫细胞化学检测诱导前细胞表面抗原血管性血友病因子、CD166的表达及诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达，倒置相差显微镜下计数阳性细胞分化率。结果：①不同接种密度细胞贴壁所需的原代培养时间比较：5× 10^7 L^-1组仅有1孔细胞贴壁呈克隆样生长，但培养至28d时仍不能传代，其余培养孔均无细胞贴壁生长。与1× 10^8 L^-1组比较，5× 10^8 L^-1，1× 10^9 L^-1，3× 10^9L^-1组细胞贴壁生长的原代培养时间均明显缩短（P〈0．05），且后3组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②贴壁细胞表面抗原检测：CD166呈阳性，血管性血友病因子呈阴性。③诱导分化：诱导组脐静脉间充质干细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达，不表达胶质纤维酸性蛋白。巢蛋白阳性细胞率为（9．5±1．23％，神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率为（15．6±2．6）％。未诱导组以上3种标志均不表达。结论：①在体外可以成功分离培养获得人脐静脉内皮及内皮下层的间充质干细胞，其原代培养细胞的种植密度以5× 10^8 L^-1～1× 10^9 L^-1为佳。②细胞传2代后性质相对均一，基本无造血细胞和内皮细胞污染，达到纯化目的，具有间充质干细胞特点。③在化学诱导剂β-巯基乙醇、二甲基亚砜、丁化羟基茴香醚联合作用下，其可以向神经元样细胞分化。

人脐静脉间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增殖生长的关系

目的:体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞,观察采用不同的换液频度与细胞增殖和生长的关系。方法:实验于2006-03/11在辽宁医学院解剖学实验室完成。①选取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带,由辽宁医学院附属第一医院提供,产妇及其家属均知情同意。②根据更换细胞培养液时间的不同,分为接种后每24h,48h,72h更换培养液组。③无菌条件下将脐带用预热的磷酸盐缓冲液充分洗涤去血渍,从脐静脉一端插入留置针,用预热的磷酸盐缓冲液冲净静脉腔血,止血钳夹闭另一端,采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮及内皮下细胞,取消化30min的细胞悬液进行贴壁培养,以1×108L-1密度接种于24孔培养板中,每孔的细胞数和培养液量相同,按实验设计分组的时间方法更换培养液。④各组自培养24h开始,每天分别取各组细胞4孔,以噻唑蓝比色法测定生长曲线。并采用免疫细胞化学方法对分离的细胞进行表面抗原鉴定。结果:①间充质干细胞的形态学观察:原代培养1周,细胞以梭形细胞为主。传代培养2h细胞开始贴壁变形,24h基本完成贴壁,48h可见部分已贴壁的细胞开始分裂增殖,细胞形态多样,呈椭圆形、梭形、三角形等。5～7d贴壁细胞可见多核的成纤维细胞样。在细胞生长增生过程中,接种后每24h更换培养液组细胞增殖明显,生长状态均最好;接种后每48h更换培养液组次之;接种后每72h更换培养液组细胞增殖较慢,细胞生长状态也较差。②生长曲线:接种后每24h更换培养液组的细胞生长增殖较快,比接种后每48h及72h更换培养液组达到的同样细胞数平均提前2～3d(P<0.05);接种后每48h及72h更换培养液组之间差异无显著性意义(P>0.05)。③间充质干细胞表面抗原特性:免疫细胞化学分析显示CD166呈阳性,vWF呈阴性。结论:胶原酶消化法体外分离获得的人脐静脉内皮及内皮下细胞数量高、活性佳。更换培养液的频度不同,细胞的增殖生长过程和形态变化时间不同,接种后每24h更换培养液更有利于间充质干细胞的增殖生长和纯化。

人脐静脉间充质干细胞的分离培养及生物学特性鉴定

为了对人脐静脉间充质干细胞(MSC)进行分离培养及其生物学特性鉴定。采用胶原酶分步消化法获得人脐静脉间充质干细胞(hUVMSC2)并对其进行体外培养、形态学观察及绘制生长曲线;利用条件培养基诱导法分析该细胞分别向成骨细胞和脂肪细胞分化能力;流式细胞术检测细胞表面标志物CD54、CD105、CD29、CD166、CD44、CD31、CD34、CD49、CD106等表达情况。结果该细胞形态为梭形或成纤维样,不表达内皮来源的vWF因子。在不同诱导条件下,该细胞可分别向成骨细胞和脂肪细胞分化。hUVMSC2细胞表面表达CD54、CD105、CD29、CD166、CD44等间质细胞黏附分子,不表达CD31、CD34、CD49、CD106等内皮或造血细胞相关标志物。该细胞指数生长期倍增时间约为26h,在添加bFGF条件下可迅速增殖,指数生长期倍增时间缩短为16h。研究证实人脐静脉内皮层下存在间充质干细胞,采用分步酶消化法可同时分别获得单根脐静脉的内皮细胞和间充质干细胞。hUVMSC2间充质干细胞具有向脂肪细胞和成骨细胞分化潜能并表达多种黏附分子。

体外诱导人脐静脉间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

探讨来源于人脐静脉内皮及内皮下分离的间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可能性,以期为脐静脉MSCs的神经移植提供理论依据。通过在无菌条件下收集正常足月剖宫产新生儿脐带并对脐静脉进行胶原酶消化,将获取的内皮及内皮下贴壁细胞进行培养。经传代培养及免疫细胞化学鉴定后,取第2代细胞用β-巯基乙醇和二甲基亚砜诱导其向神经元方向分化,并以免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果表明脐静脉经胶原酶消化后的贴壁细胞主要表现为间充质样细胞和内皮细胞;传2代后,间充质样细胞可得到纯化和扩增。免疫细胞化学染色显示诱导前细胞不表达血管性血友病因子(vWF),诱导后MSCs表达巢蛋白(nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE),而不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。以上结果提示,来源于脐静脉内皮及内皮下的MSCs在体外可以培养、扩增,并具备在诱导剂的作用下向神经元样细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源。

人脐静脉间充质干细胞向胰岛β样细胞诱导分化的实验研究

目的:探讨人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的可行性。方法:采用胶原酶消化分离人脐静脉内皮及内皮下细胞进行贴壁培养;传代培养后,用高浓度葡萄糖(25mmol/l)培养液DMEM(含10%FBS)以及bFGF(basic Fibroblast Growth Factor)和尼克酰胺诱导脐静脉间充质干细胞向胰岛β样细胞分化。倒置显微镜下观察间充质干细胞诱导后形态变化,观察是否形成细胞团;用胰岛β细胞特异双硫腙染色鉴定诱导后细胞内是否含有高浓度游离锌离子;免疫细胞化学(Envision法)鉴定诱导后细胞是否分泌胰岛素。结果:第2代脐静脉间充质干细胞经过高糖诱导大约10天后,形成细胞团;呈双硫腙染色阳性;免疫细胞化学表明诱导后细胞内的细胞胰岛素染色阳性。结论:人脐静脉内皮及内皮下分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛β样细胞,这种胰岛β样细胞具有胰岛素的分泌功能。

接种密度对人脐静脉间充质干细胞原代培养的影响

目的：探讨不同接种密度对人脐静脉间充质干细胞（hUV-MSCs）原代培养的影响,从而确定原代培养hUV-MSCs的适宜条件。方法：分离人脐静脉内皮及内皮下层细胞,按不同接种密度分组进行原代培养,记录原代培养时间,然后进行传代和成骨诱导培养,并检测细胞钙结节的表达情况。结果：hUV-MSCs原代分离培养消化30min,种植细胞密度为5×10^5×10^6/cm^2的方法较合理。经化学药物（如地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C）成骨诱导后,可形成钙结节。结论：合理hUV-MSCs原代培养方法,可以快速获得最大量的自体种子细胞,从而为组织工程化骨的体外构建创造条件。

异种脐带间充质干细胞静脉应用的安全性

背景:人脐带间充质干细胞因其来源丰富,具有较强增殖分化能力,不涉及伦理道德问题,有望成为组织修复与再生工程的首选细胞。但是,对人脐带间充质干细胞异种静脉移植的安全性研究较少。目的:观察Wistar大鼠静脉输注人脐带间充质干细胞后的安全性。方法:SPF级Wistar大鼠30只,随机分为空白对照组、阴性对照组、细胞移植组,每组10只,雌雄各半。体外分离扩增人脐带间充质干细胞,细胞移植组大鼠尾静脉一次注射5×106间充质干细胞,注射体积为1mL;阴性对照组大鼠尾静脉一次注射相同体积50g/L葡萄糖注射液。注射后每天观察大鼠一般症状,14d后解剖动物,进行血常规、血生化和脏器病理学检查及脏器质量测定。结果与结论:细胞移植组大鼠血常规、血生化与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。细胞移植组大鼠脏器组织病理学观察与对照组大鼠无明显光镜下形态学差别。结果提示Wistar大鼠一次性静脉移植人脐带间充质干细胞是安全可行的,人脐带间充质干细胞异种移植对受者无不良影响。

人脐血间充质干细胞尾静脉移植治疗扩张型心肌病

背景:体外研究表明人脐血间充质干细胞可分化为自律性跳动的心肌细胞,而经静脉移植人脐血间充质干细胞治疗扩张型心肌病心力衰竭的报道较少。目的:探讨经尾静脉移植人脐血间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠心肌结构、心功能的影响。方法:Wistar大鼠通过腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病模型,扩张型心肌病实验组于造模后8周经尾静脉移植人脐血间充质干细胞,扩张型心肌病对照组注射等量DMEM培养基。健康对照组不造模,于相同时间点注射等体积的生理盐水。结果与结论:与健康对照组相比,扩张型心肌病组心功能明显受损,且扩张型心肌病实验组受损较扩张型心肌病对照组轻;移植的细胞有肌钙蛋白T的表达。结果提示人脐血间充质干细胞移植能促进扩张型心肌病大鼠心功能恢复,使心肌组织病变减轻。

脐静脉和骨髓来源的间充质干细胞的比较研究

间充质干细胞(MSCs)的来源有限,成人骨髓是MSCs的主要来源,这极大地限制了其在实验和临床中的应用。为拓宽MSCs来源,从细胞形态、生长特性、免疫表型和多向分化能力等四个方面对人脐静脉来源和成人骨髓来源的间充质干细胞进行了比较研究。结果表明,人脐静脉来源和成人骨髓来源的MSCs具有相似的生物学特征,成纤维细胞样形态生长,并具有强大的体外扩增和多向分化能力。人脐静脉来源的MSCs可替代成人骨髓MSCs,作为满足实验和临床需要的重要来源。

间充质干细胞条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附的影响

本研究探索间充质干细胞(MSC)条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附能力的影响及其可能的机制。采用经典全骨髓贴壁法培养MSC,用流式细胞术鉴定MSC表面标志特征。收集MSC条件培养液(MSC-CM),过表达基质细胞细胞衍生因子1(SDF-1)的MSC条件培养液(Ad-SDF-1-MSC-CM),以2%FBS-DMEM、15%FBS-DMEM培养液为对照,将MSC-CM、Ad-SDF-1-MSC-CM等条件培养液加入人脐静脉内皮细胞株(CRL1730)作用24 h后,用MTT法检测CRL1730细胞的增殖情况,利用划痕法和黏附模型评价MSC-CM对CRL1730细胞迁移能力和黏附能力的影响。结果表明,与MSC-CM相比,Ad-SDF-1-MSC-CM处理的CRL1730细胞表现出更强的增殖能力,加入阻断剂AMD3100后,MSC-CM所介导的促增殖效应明显降低。MSC-CM、Ad-SDF-1-MSC-CM促进CRL1730细胞的迁移,AMD3100明显抑制其所介导的CRL1730细胞迁移。与MSC-CM相比,Ad-SDF-1-MSC-CM处理的CRL1730细胞黏附能力明显增强,AMD3100能显著降低其增强CRL1730黏附能力的作用。结论:MSC-CM对CRL1730细胞的促增殖、迁移和黏附能力与其分泌的细胞因子SDF-1密切相关。

脑缺血再灌注损伤大鼠尾静脉移植脐带间充质干细胞的安全性

背景:尾静脉移植干细胞穿过血脑屏障到达宿主脑损伤区域内的具体机制尚不明确。目的:观察尾静脉移植人脐带间充质干细胞治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的效果及安全性,并探讨其作用机制。方法:通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法获取人脐带间充质干细胞并以BrdU标记。Sprague-Dawley大鼠以改良线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,移植A组在造模后第7天、移植B组在造模后第14天通过尾静脉移植人脐带间充质干细胞,模型组不做处理。结果与结论:①移植后7,14,28,35,42,49,56d,2个移植组mNSS评分低于模型组(P<0.05)。移植后7,14,28,35,42,49d,移植A组mNSS评分低于B组(P<0.05)。模型组在造模后第35天、移植A组在第42天、移植B组在第49天时mNSS评分进入平台期。②2个移植组大鼠脑组织未见到CD11b、MPO单染阳性细胞,可见Brdu+Nestin、Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+FⅧ,Brdu+VEGF双染阳性细胞。结果表明人脐带间充质干细胞经尾静脉途径移植可以在宿主脑内存活,通过生成神经元样和神经胶质样细胞、促进新生血管形成并分泌神经营养因子等因素促进大鼠神经功能恢复,且未发现明显免疫排斥反应及异常分化细胞,具有较高的安全性。

高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢

背景:趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子,加速血管新生的重要作用。目的:观察高糖环境下,趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响,并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法:(1)细胞体外实验:在细胞高糖环境模型下,将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组,预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min,再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组,高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞,其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwell细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响;(2)动物体内实验:建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型,分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理,验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论:(1)体外实验结果:与高糖对照条件培养基相比,高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率,并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01),高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01);与高糖CXCL-8组相比,高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01);(2)体内实验结果:与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比,CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01);(3)结果提示,在高糖环境下,CXCL-8能够通过Shh通路,刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子,提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。

人脐带源间充质干细胞静脉移植治疗大鼠肝纤维化

背景:近来国内外研究证明,来自其他组织的干细胞能够归巢到肝脏,并可能参与肝组织的再生,这为发展干细胞治疗肝脏疾病提供了新的希望。目的:探究人脐带源间充质干细胞的分离、培养方法,观察脐带间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化模型的修复作用,为脐带间充质干细胞的临床应用提供可靠的理论依据。方法:自然贴壁法分离、纯化人脐带间充质干细胞并进行体外培养和扩增,用皮下多点注射CCl4制备肝纤维化大鼠模型。将22只模型大鼠随机分为模型损伤组(n=11)和细胞移植组(n=11)。细胞移植组在模型制备成功后的第1,2,3周经尾静脉给予1×106脐带间充质干细胞治疗,4周后将大鼠处死,收集各组大鼠血液检测肝功能;摘取肝脏行苏木精-伊红染色,观察病理变化;免疫组化法观察库普弗细胞的数量及分布;免疫组化法观察治疗组脐带间充质干细胞的定位情况。结果与结论:脐带间充质干细胞经尾静脉移植入肝硬化大鼠后,大鼠的肝功能均明显改善,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05);肝组织苏木精-伊红染色提示,肝纤维化程度明显改善;免疫组化法观察库普弗细胞的数量提示,库普弗细胞数量明显减少;免疫组化方法利用抗BrdU抗体在治疗组大鼠肝脏观察到BrdU标记的脐带间充质干细胞。说明脐带间充质干细胞移植可以改善大鼠外周血液的血生化特性和肝的组织学结构。

表达PEDF的人胎盘间充质干细胞抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移

目的探讨携带色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)基因的腺病毒转染胎盘间充质干细胞(PMSCs)后对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的抑制作用。方法取足月产胎儿的胎盘组织,分离、培养PMSCs,用流式细胞术鉴定其表面标记。用携带PEDF基因的腺病毒(Ad-PEDF)转染PMSCs,并用Western blot和ELISA检测转染了Ad-PEDF的PMSCs细胞(PMSCs-PEDF)培养上清中PEDF的表达。MTT测定PMSCs-PEDF表达的PEDF对HUVECs增殖的影响。Transwell实验检测PMSCs-PEDF所表达的PEDF蛋白对HUVECs迁移的抑制作用。结果用流式细胞术对分离的PMSCs进行免疫表型分析,结果显示,CD44、CD73、CD90、CD105表达呈阳性,而CD34、CD45表达呈阴性。Western blot结果显示,重组腺病毒成功将PEDF基因传送至PMSCs细胞内并产生分泌性的PEDF蛋白。ELISA结果显示PMSCs-PEDF可并分泌高水平的PEDF至培养基中[(65.2±4.9)ng/ml]。MTT结果显示,PMSCs-PEDF培养基上清在稀释比例为1∶2时对HUVECs抑制率为56.3%±8.7%,随着稀释比例的增加抑制率逐渐降低。而PMSCs及PMSCs-null的培养基上清则对HUVECs抑制作用很弱。Transwell实验结果显示,与PMSCs组(208.8±14.7)及PMSCs-null组(199.0±20.7)相比,PMSCs-PEDF组(79.4±14.5)可显著抑制HUVECs迁移(均P<0.05)。结论 PMSCs-PEDF可在体外高效表达PEDF蛋白,并抑制HUVECs细胞的增殖和迁移。

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组,每组16只,雌雄各半,细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞,一次5×106/只,每周注射一次,连续注射4周;阴性对照组每次注射相同容积的PBS。注射后后观察小鼠的一般症状,末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异(P>0.05),脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别,以及免疫结果测定(T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的,对受者无明显免疫反应和毒副作用。

静脉移植人脐血间充质干细胞心肌梗死小鼠心内、外单核巨噬细胞M1/M2亚型的转化

背景:研究表明人脐血间充质干细胞移植可能对炎症有调控作用,参与心肌梗死后缺血心肌保护和改善心功能等,但其对炎症影响的效果仍不明确。目的:探讨经静脉移植人脐血间充质干细胞对急性心肌梗死小鼠心内、心外单核细胞/巨噬细胞M1/M2亚型转化效应及心脏保护作用。方法:七八周龄雄性Balb/C小鼠随机分为实验组(7只)和对照组(8只)。心肌梗死造模1周后实验组尾静脉注射含1×106人脐血间充质干细胞的生理盐水0.2 mL,对照组注射等量生理盐水。治疗4周后,流式细胞仪检测外周血及脾脏单核细胞M1/M2比值,超声心动图检测心功能,苏木精-伊红染色观察心肌病理变化、Masson染色观察胶原沉积情况,TUNEL染色检测心肌凋亡及免疫荧光检测心肌组织巨噬细胞M1/M2比值。结果与结论:(1)与对照组相比,实验组外周血、脾脏及梗死心肌周边单核细胞/巨噬细胞M1/M2比值较低(P <0.05);(2)实验组左心室收缩末期内径、左心室舒张末期内径低于对照组,左室射血分数显著高于对照组(P <0.05);(3)实验组心肌梗死区域及周边心肌组织炎症细胞计数低于对照组(P <0.05);(4)实验组心肌胶原组织沉积低于对照组(P <0.05);(5)实验组凋亡指数低于对照组,但差异无显著性意义(P> 0.05);(6)实验证实静脉移植人脐血间充质干细胞可通过调控小鼠心肌梗死局灶及全身系统炎症反应从而改善心功能,是人脐血间充质干细胞移植治疗心肌梗死产生心脏保护效应机制之一。

人脐静脉来源间充质干细胞向神经样细胞分化的体外分离扩增实验

目的:探讨人脐静脉来源的间充质干细胞的体外分离、纯化、扩增及向神经元样细胞的定向分化,为间充质干细胞治疗神经系统疾病提供实验依据。方法:实验于2004-06/2005-03在华中科技大学同济医学院附属协和医院血研所完成。无菌条件下取正常人脐静脉,10g/L胶原酶Ⅱ消化脐静脉内皮细胞,以IM DM作为培养基进行培养和纯化细胞,检测其生物学特点;用全反式维甲酸诱导,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞的形态;免疫组织化学、免疫荧光化学和W estern blot方法检测分化前后细胞上的神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:脐静脉来源的细胞呈纤维样贴壁生长,具有骨髓间充质干细胞的生物学特征;诱导分化后,大部分间充质干细胞呈现典型神经样细胞形态,出现神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达。结论:人脐静脉可以分离培养出间充质干细胞,并可以在体外定向分化为神经样细胞,为神经系统疾病的治疗提供细胞来源。

脐血间充质干细胞静脉移植治疗缺氧缺血性脑损伤的时效性(英文)

背景：研究证实，使用间充质干细胞移植治疗成年动物缺氧缺血性脑损伤已取得了一定的疗效，但新生动物模型较少见。治疗所使用的间充质干细胞基本上都来源于骨髓，使用脐血间充质干细胞的研究报道较少。目的：将脐血间充质干细胞从尾静脉注入新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型，探讨脐血间充质干细胞移植治疗的可行性及时效性。设计、时间和地点：完全随机对照的动物实验，于2004—10／2005—07在南昌大学第一附属医院神经内科实验室完成。材料：选用健康新生7d龄SD大鼠38只制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型，死亡3只。方法：采集23～35岁健康孕妇足月顺产儿的脐带血体外培养脐血间充质干细胞。移植前应用4’，6二脒基-2-苯吲哚盐酸体外标记间充质干细胞。造模成功的35只大鼠随机分为3组：早期移植组12只造模后第2天经鼠尾静脉注入脐血间充质干细胞；晚期移植组12只造模后1周进行移植；对照组11只注射等量的生理盐水。早期移植组和晚期移植组于移植后第2天以及造模后2周分别随机取6只大鼠，对照组于造模后2d，1和2周分别取3，4，4只大鼠麻醉后处死。取脑和海马回区的缺血脑组织制作冰冻切片。主要观察指标：苏木精-伊红染色观察脑组织病理形态学改变。荧光显微镜观察脑组织4’,6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性细胞。结果：对照组缺血区脑水肿，神经细胞肿胀，细胞数减少；早期移植组于移植后病灶侧脑内很少见到4’，6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性脐血间充质干细胞分布，其脑组织水肿程度及细胞外间隙的改善和细胞数目的增加也不明显；晚期移植组，造模后1周缺血脑组织细胞外间隙缩小，细胞数明显增加，脑组织水肿已明显减轻，在大鼠病灶侧脑内，可见大量的4’，6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性细胞向病灶区及周围迁移和扩散，没有明显的界限。结论：脐血间充质干细胞能有效透过血脑屏障，在病灶脑组织周围迁移、扩散、整合；选择缺氧缺血性脑损伤后1周时进行移植效果较好。