汉黄芩素对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制及能量代谢的影响

目的探讨汉黄芩素(Wogonin)对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制及能量代谢的影响及机制。方法采用MTT法和生长曲线法检测汉黄芩素对2种细胞的增殖抑制活性;HE染色法观察细胞形态变化;检测己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的活力及三磷酸腺苷(ATP)含量;Western Blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和单羧基转运体4(MCT4)蛋白表达水平。结果15μg·mL-1汉黄芩素对SGC-7901、ECV304的细胞增殖抑制率较好,且作用相近(P>0.05),故选择该浓度作为后续实验浓度。与对照组比较,汉黄芩素对2种细胞均有明显的持续增殖抑制作用,实验组细胞浓度在第6天下降最为明显(P<0.01);汉黄芩素干预后2种细胞均出现数量变少、胞质凝集等形态变化,SGC-7901细胞改变更为明显;SGC-7901汉黄芩素组的LDH、SDH活力及ATP含量显著降低(P<0.05,P<0.01),ECV304汉黄芩素组的HK活力及ATP含量显著下降(P<0.01);SGC-7901、ECV304细胞在汉黄芩素干预后HIF-1α及MCT4蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论汉黄芩素可能通过下调SGC-7901、ECV304细胞的HIF-1α及MCT4表达,抑制2种细胞不同能量代谢酶活力,减少ATP生成,改善细胞酸性微环境,抑制胃癌细胞增殖和肿瘤血管生成,其对不同细胞能量代谢的影响具有差异性。

川芎嗪对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响

川芎为活血化瘀代表性中药,临床应用甚广.川芎嗪(Tranethylpyrazine,TMP)为川芎主要有效成分之一.前期研究表明,川芎嗪注射液能抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生长和肺转移,可降低肿瘤组织微血管密度和抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.本试验旨在进一步探讨川芎嗪含药血清对人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和对VEGF诱导的ECV304的增殖是否具有抑制作用,为深入研究川芎嗪抗血管生成的机制,应用川芎嗪治疗血管新生性疾病(肿瘤、类风湿性关节炎、增殖性视网膜病变等)[1]提供实验依据.

硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 观察硒对人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)表达的影响。方法 分别用高葡萄糖、糖基化终末产物 ,高胰岛素和过氧化氢孵育人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 ;在先加入 10 0 nmol/L硒后 ,再给予以上 4种因素 ,分别检测人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA的表达并比较。结果 4种因素均可作为独立因素 ,导致人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA表达量增加 ;硒能抑制 4种因素所致的MCP- 1m RNA表达。结论 硒抑制 MCP- 1m RNA在人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4中的表达。

彩色多普勒超声辐照对人脐静脉内皮细胞ECV304生物学特征的影响

目的探讨不同辐照时间的彩色多普勒超声(CDUS)对人脐静脉内皮细胞ECV304(ECV304)生物学特性的影响。方法收集对数生长期ECV304细胞,分别给予CDUS辐照1、5、10、20、30 min。未辐照细胞作为对照。MTT法观察细胞生长,流式细胞术测定细胞生长周期及凋亡率,Matrix试剂检测细胞管形形成能力,transwell法检测细胞迁移率。结果 CDUS辐照5、10 min时能促进ECV304细胞生长,辐照20、30 min时抑制ECV304细胞生长,抑制率明显高于辐照1 min时(P均<0.05)。CDUS辐照30 min时,ECV304细胞G2/M期比例和凋亡率(分别为22.14%和11.91%)均明显高于对照组(16.32%、0.11%),P均<0.05;细胞管状结构形成明显低于对照组,小管间距离减小;迁移率亦显著低于对照组(P均<0.05)。结论 CDUS辐照可能影响脐静脉内皮细胞ECV304周期分布、增殖、凋亡、迁移和管状结构的形成;对胎儿行彩色多普勒超声检查应严格控制在10 min内,最长不超过20 min。

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧张素转换酶 (ACE)等指标 ,观察 5 %、10 %、2 0 %、4 0 %、60 %和 80 %家兔血清对人脐静脉内皮细胞 (VEC) 30 4的影响。结果 :5 %和 10 %两浓度组各指标均无变化 ,对VEC 30 4没有损伤作用。 4 0 %、60 %和 80 % 3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤 ,而且随着浓度的增加 ,呈现出损伤加重的趋势 ,而 2 0 %的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用 ,只有LDH含量差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下 ,其对细胞的作用浓度是有一定限制的 ,当达到 4 0 %或更高浓度时有较为明显的损伤。所以 ,在中药血清药理学研究中 ,应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验 。

腺病毒介导的TSP1_f基因转移对脐静脉内皮细胞株EC V304增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1(TSP1)抗血管新生衍生物(TSP1f)基因转移对人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1fcDNA序列构建TSP1f重组腺病毒(ADV-TSP1f);Western blot方法检测ADV-TSP1f介导TSP1f在K562细胞中的表达;台盼蓝拒染检测经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基对ECV304细胞增殖的抑制作用。结果K562细胞经ADV-TSP1f感染可高效表达/分泌TSP1f多肽;经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基可显著抑制ECV304细胞增殖,以ADV-LacZ及PBS作对照,抑制率分别为51.6%和53.8%。结论ADV-TSP1f可显著抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖,可望成为有效的恶性肿瘤血管新生抑制剂。

硫氧还蛋白对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的探讨硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)对缺氧/复氧损伤内皮细胞(ECV)的保护作用。方法对体外培养的内皮细胞株ECV304(缺氧/复氧组)及TRX修饰的ECV304(TRX组)进行缺氧/复氧实验,另一组ECV304细胞不作缺氧/复氧作为正常对照组,检测复氧不同时间点细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的含量变化。结果正常对照(ECV304组),细胞内的MDA、ET-1及NO含量在24 h内变化不大;转染空载体的ECV304细胞在缺氧3 h时,MDA、ET-1含量显著增加,复氧12 h时,MDA、ET-1含量达到最高,然后缓慢下降;ECV304/Trx组与转染空载体组相比,在3 h及12时,MDA含量极显著下降(P<0.01),而在24 h MDA水平显著下降(P<0.05)。ET-1水平在复氧的各时间点均比有下降,在复氧24 h下降最明显(P<0.01);转染空载体的ECV304细胞在缺氧3h时,NO含量显著下降,复氧12 h时,NO含量下降到最低,然后缓慢上升;ECV304/Trx组与转染空载体组相比,在3 h及12时,NO含量极显著上升(P<0.01),在12 h NO水平最高。ECV304/TRX组与正常对照组相比,在12 h时,有显著差异。结论 TRX能抑制缺氧/复氧对ECV的损伤,对缺氧/复氧环境下的ECV起保护作用。

苦参碱、氧化苦参碱联合应用对ECV304活性及能量代谢影响

为探讨苦参碱和氧化苦参碱联合应用对人脐静脉内皮ECV304细胞活性及能量代谢影响,采用排列组合法确定苦参碱和氧化苦参碱联合用药的浓度配比,生长曲线法检测细胞增殖抑制作用,HE染色、透射电镜观察细胞形态变化,试剂盒测定糖代谢中相关酶活力和代谢产物含量。结果显示,氧化苦参碱1200μg/m L和苦参碱600μg/m L联合作用效果较好,联合应用对ECV304增殖抑制和形态改变较氧化苦参碱、苦参碱明显增强,可明显降低有氧氧化中的琥珀酸脱氢酶活力及ATP含量,对糖酵解的己糖激酶、丙酮酸激酶及乳酸影响较小。研究表明氧化苦参碱、苦参碱联合应用明显干扰ECV304细胞氧化磷酸化有关酶活性,减少ATP生成,抑制ECV304细胞增殖,实现抗肿瘤血管生成的间接抗肿瘤作用。

苦参碱对人HepG2细胞与人ECV304细胞的增殖抑制活性比较研究

目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响。方法:购买纯度高达99%的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响。结果:MTT实验和生长曲线实验显示在不同浓度苦参碱作用不同时间后,人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为487.86μg/ml和1815.34μg/ml,且呈剂量、时间依赖性。HE染色后人肝癌HepG2细胞实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显。结论:苦参碱可抑制人肝癌HepG2细胞生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用较弱。

高糖对人脐静脉内皮细胞GSH-PX活力、NOS及ICAM-1表达的影响

目的:探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV3 0 4,分为对照组和高糖组,用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH PX)活力,RT- PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM- 1)mRNA水平,免疫细胞化学法观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达。结果:高糖组GSH- PX活力明显下降,eNOS、iNOS蛋白表达明显增高,ICAM- 1mRNA水平也显著上升。结论:在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞GSH PX活力下降,ICAM -1mRNA、eNOS和iNOS蛋白表达增高,对糖尿病血管病变早期进展起一定的作用。

LPS对人脐静脉内皮细胞增殖和ESM-1表达的影响

目的探讨LPS对人脐静脉内皮细胞(ECV304)的生长和内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,ESM-1)表达的影响.方法在体外,用1 ml/L和5 ml/L的LPS在不同时间作用于ECV304,观察细胞形态的变化,用MTT法和免疫细胞化学方法对细胞增殖和ESM-1、ERK、p-ERK在细胞中的表达.结果 LPS作用于ECV304 24 h后,细胞形态发生变化,梭形明显,排列紊乱.短时间内(0.5、1 h)LPS对ECV304有增殖作用.LPS可快速促进ESM-1的表达,在0.5、1 h时表达量较高.LPS作用后,ERK的表达无明显变化,但在一段时间(0.5～4 h)内ERK的磷酸化明显增加.结论 LPS对ECV304中ESM-1的表达有促进作用.推测ESM-1可能作为一种细胞因子与LPS在炎症反应中发挥着作用.

HSV-2感染ECV304的形态学变化

目的观察人脐静脉内皮细胞(ECV304)受到单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种 HSV-2后,ECV304于1 d逐渐出现细胞肿胀、变圆、胞浆颗粒增多粗大;2 d逐渐出现细胞融合,细胞核着色变浅。结论 HSV-2接种后在ECV304出现的形态学变化,造成细胞死亡的主要形式是细胞坏死,未见明显的细胞凋亡现象。

ECV304细胞株用于体外血管新生的实验研究

血管新生与肿瘤的生长、组织损伤修复等病理生理过程密切相关而备受关注.体外血管新生模型有助于研究某种因素对血管形成的影响而成为常用的研究手段.体外血管新生研究中,由于原代培养的人脐静脉内皮细胞增殖活性低、传代次数少,因而多采用细胞株作为内皮材料.ECV304细胞是自发转化的人脐静脉内皮细胞株,但是Ⅷ因子相关抗原为阴性,因此部分学者对ECV304的应用产生质疑[1,2].本研究采用ECV304细胞构建体外血管新生二维、三维模型,对其可行性进行探讨.

二烯丙基二硫对人脐静脉内皮细胞生长的影响

目的观察二烯丙基二硫(diauvldisulfide，DADS)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(vascularendothelialcellsECV304)生长的影响，初步探讨其相关发生机制。方法体外细胞培养，采用生长曲线分析、细胞活力检测、MTT法和免疫组化方法分析DADS对人脐静脉内皮细胞生长的影响。结果生长曲线结果显示，DADS从8mg／L时出现对内皮细胞的生长促进作用，8—16mg／L时，随时间的延长，细胞生长促进率增加。DADS在32mg／L时，随培养时间的延长，细胞生长抑制作用随之增加。45mg／L的DADS对内皮细胞生长抑制效应，72h后进入平台期，与时间无关(P<0．05)；台盼蓝计数检测细胞活力结果显示，8—16mg／LDADS处理后细胞存活率比对照组有一定上升，32—45mg／LDADS处理后细胞活力明显下降(P<0．05)。M'IT法结果表明，8—16mg／LDADS促进ECV304细胞的增殖，增殖率从116．4％增至127．3％(P<0．05)；32～45mg／L的DADS抑制ECV304细胞增殖，抑制率由54．6％增至67．1％(P<0．01)。免疫组化结果PCNA和D53在对照组中表达呈阳性，16mg／LDADS处理后呈强阳性，32ms／LDADS处理后则为阴性。结论较低浓度的DADS可以促进内皮细胞增殖，保护血管内皮细胞，避免血管内皮细胞的损伤。其机制可能与较低浓度的DADS促进PCNA和p53的表达有关。

巴戟天糖链对ECV304细胞增殖中细胞周期和BKCa通道的影响

目的：观察巴戟天糖链（MOO）促进人脐静脉内皮细胞（ECV304）增殖中对细胞周期和大电导钙激活钾通道（B民）影响的作用，以探讨MOO促进血管内皮细胞增殖的药理学机制。方法：对正常传代生长3～8代的ECV304细胞进行缺氧1h、复氧2h处理，

间断性高浓度胰岛素对HUECV304细胞NO分泌的影响

目的研究在持续性高浓度胰岛素与间断性高浓度胰岛素不同浓度胰岛素的条件培养液的作用下,体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUECV304)分泌一氧化氮(NO)的相应变化,从而进一步探究间断性高浓度胰岛素血症导致动脉粥样硬化的原因及致病机制。方法本研究用体外培养的HUECV304细胞作为试验对象,研究间断性高浓度胰岛素对HUECV304细胞NO分泌的影响。试验共分为4组,即含100nmol/L胰岛素条件培养液与1nmol/L胰岛素细胞培养液轮换培养的间断性高浓度胰岛素组,含1nmol/L胰岛素细胞培养液的正常浓度胰岛素组,含100nmol/L胰岛素细胞培养液的持续性高浓度胰岛素组、不含胰岛素细胞培养液的阴性对照组,各组每间隔8小时均更换新鲜条件培养液1次,总共作用72小时。内皮细胞培养液上清中NO的含量用硝酸还原酶法检测。结果含不同浓度的胰岛素条件培养液作用内皮细胞72小时后,正常浓度组、间断性高浓度胰岛素组与持续性胰岛素组细胞分泌NO均出现不同程度的增加,分别为对照组的2.21倍(P<0.05),7.13倍(P<0.001)和4.50倍(P<0.001);其中间断性高浓度胰岛素组内皮细胞分泌NO增加尤为明显,明显高于持续性高浓度胰岛素组内皮细胞分泌NO(P<0.05)。结论间断性高浓度胰岛素相对于持续性高浓度胰岛素能增强人脐静脉内皮细胞NO的分泌。提示血管内皮细胞NO的过度合成可能是间断性高浓度胰岛素损伤血管内皮的功能、促进糖尿病的慢性血管并发症的产生及其发展的重要原因。

低频率彩色多普勒超声辐照对ECV304细胞作用研究

近年来，随着超声诊断新技术的不断开发，彩色多普勒超声（CDUS）诊断技术的临床应用越来越广泛。在进行彩色多普勒超声检查时，通常根据患者需检测部位或器官的组织结构及深度而选用高、中和低频率的超声波长。任何频率的超声幅照都会产生不同程度的空化作用、热化作用及生物效应造成的组织损伤。前期研究发现，高和低频CD U S辐照对人脐静脉内皮细胞功能有明显的影响，并随辐照时间延长作用更为明显［1，2］。低频率CDUS探测波长（2．5～3．5）MHz，主要用于深部组织和器官的探测［3］，常用于腹主动脉和其他深部组织器官等的检查。本研究以人脐静脉内皮细胞ECV‐304为模型，探讨低频率 CD U S 对脐静脉内皮细胞EC V‐304生长和功能的影响，为临床具有敏感血管的组织进行超声探查的安全时限提供实验依据。