反义miR-21抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖的体外研究

目的探讨敲低miR-21表达抑制U251人脑胶质瘤细胞株增殖能力的效果和机制。方法脂质体介导转染反义寡聚核苷酸（AS—miR-21）下调U251人脑胶质瘤细胞株miR-21的表达。使用实时定量PCR和原位杂交法鉴定转染后U251细胞miR-21表达水平下调；MTF法评价AS—miR-21抑制U251细胞生长效果；流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布和凋亡；采用细胞免疫荧光技术（PCNA、CyclinDl、Bcl-2、PTEN和Septin-7）评价转染后U251细胞肿瘤生物学性状改变。结果MTY结果显示AS—miR-21转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组与无义寡核苷酸（F=78．926，P=0．000）组；实时定量PCR法：AS—miR-21转染组miR-21表达下调为对照组0．0424-0．012；LNA—miR-21原位杂交显示AS—miR-21转染组miR-21表达水平较对照组与无义寡核苷酸组下调；流式细胞术检测可见AS—miR-21转染组细胞周期存在G0／G1期阻滞（Х^2=14．160，P=0．007）且凋亡比例高于对照组与无义寡核苷酸组（F=23341．25，P=0．000）；细胞免疫荧光法表明AS—miR-21治疗后U251细胞PCNA、CyclinDl、Bcl-2表达下调，PTEN、Septin-7表达上调。结论以miR-21作为靶点抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长结果肯定，miR-21可以作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。

共刺激分子4-1BBL和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达

背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1BBL的表达与耐药性的相关性。结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1BBL,但均不表达B7-1。其中T98G和MGR1细胞表面的4-1BBL表达>30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1BBL表达<10%,对VCR敏感。结论:本研究所检测的胶质瘤细胞均不表达共刺激分子B7-1,但有不同程度的表达4-1BBL,并且4-1BBL高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差。

miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究

目的 探讨miR-21调控人脑胶质瘤细胞侵袭能力的体外机制。方法脂质体介导反义miR-21（AS-miR-211转染体外常规培养的U251细胞，同时设无义寡脱氧核苷酸（ODN）组和对照组。测定荧光素酶活性验证3组细胞中miR-21的表达，Matrigel基质生长实验检测U251细胞的生长情况，Transwell细胞体外迁移实验检测U251细胞的迁移能力，Westernblotting检测细胞侵袭相关蛋白局部粘着斑激酶（FAK）、基质金属蛋白酶9／2（MMP-9／21、人基质金属蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）、微管蛋白α（Tubulin-α的表达，免疫荧光检测细胞Tubulin-a蛋白的形态。结果与对照组和无义ODN组比较，转染AS—miR-21组U251细胞miR-21表达水平降低，Matrigel基质生长实验显示转染AS—miR-21组U251细胞体外培养克隆平均直径较小，Transwell细胞体外迁移实验显示转染AS—miR-21组穿膜细胞数较少．Westernblotting结果显示转染AS-miR-21组U251细胞FAK、MMP-9／2表达较低，TIMP-1表达较高，差异均有统计学意义俨〈O．05）。Tubulin-ct的表达无明显变化，免疫荧光染色显示转染AS-miR-21组Tubulin-α蛋白形态扭曲。结论miR-21高表达可以促进U251胶质瘤细胞侵袭生长，提示miR-21可以作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。

LRIG1体外对U251细胞的放疗增敏作用

目的研究亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)体外对U251细胞的放疗增敏作用及其机制。方法将pLenti-TO-LRIG1-V5及空质粒pLenti-TO-V5采用慢病毒法感染U251细胞,筛选出稳定感染细胞株后给予2Gy辐照。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测U251细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,γ-H2AX免疫荧光法检测双链DNA损伤情况,Western blot检测相关蛋白的表达。结果U251-LRIG1组细胞接受辐照后较U251-Vector组细胞增殖、侵袭、克隆形成能力降低,细胞凋亡增加,γ-H2AX荧光染色焦点数增多(P<0.05)。U251细胞感染LRIG1慢病毒后,EGFR、N-Cadherin、Vimentin、DNA-PKcs、Beclin-1和LC3II/I表达水平下降,E-Cadherin表达水平增高(P<0.05)。结论在U251细胞中过表达LRIG1可以通过下调EGFR逆转上皮间充质转化,抑制DNA-PKcs及细胞自噬等多种途径抑制U251细胞的恶性生物学行为,增加放疗敏感性。