复方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的探究复方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响。方法将24只雄性SD大鼠分为对照组和低、中、高剂量组[复方藤梨汤6、12、24g/(kg·d)],每组6只,制备含药血清处理人脑胶质瘤U251细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期分布与细胞凋亡,定量聚合酶链反应检测原癌基因C-myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)基因表达,Western blot法检测细胞凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8]以及β-连环蛋白(β-catenin)、上皮性黏附蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达。结果选取体积分数10%的含药血清为最终剂量。与对照组比较,低、中、高剂量组细胞活力、克隆形成数、C-myc mRNA、CyclinD1 mRNA、Vimentin表达水平降低,处于S期细胞比例、Bax/Bcl-2比值、Caspase-3表达水平升高(P<0.05);低、高剂量组G1期细胞比例降低(P<0.05);中、高剂量组G2期细胞比例、β-catenin表达水平降低,Caspase-8和E-cadherin表达水平升高(P<0.05);高剂量组细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论复方藤梨汤含药血清可促使人脑胶质瘤U251细胞阻滞于S期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,通过调节β-catenin、E-cadherin和Vimentin表达抑制上皮间质转化。

姜黄素通过改变FAK表达和激活caspase诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究姜黄素诱导U251细胞凋亡机制。方法20～100μmol·L^-1姜黄素分别处理U251细胞24h后，MTT法测定姜黄素对U251细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；用免疫细胞化学分析姜黄素对FAK（focal adhesion kinase，粘着斑激酶）蛋白质表达的影响；荧光分光光度法检测caspase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制U251细胞的增殖；诱导U251细胞凋亡；FAK蛋白表达减少；easpase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的U251细胞凋亡。结论姜黄素通过抑制FAK蛋白的表达和激活caspase途径可诱导U251细胞凋亡。

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。

太白银莲花皂甙-1抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质瘤U251细胞生长的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测太白银莲花皂甙-1对U251细胞增殖的影响;应用倒置显微镜和Hochest33342荧光染色、透射电子显微镜观察细胞形态的变化;通过逆转录酶多聚酶链反应(RTPCR)检测与凋亡相关基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA水平的表达变化,Western blot分析Bcl-2和Bax在胶质瘤U251细胞中蛋白的表达情况。结果 U251细胞经太白银莲花皂甙-1诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在太白银莲花皂甙-1作用下明显呈低表达而Bax mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示太白银莲花皂甙-1作用后,下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达并激活了促凋亡蛋白Bax的表达。结论太白银莲花皂甙-1明显抑制U251细胞的生长活性,且能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。

蟾毒灵对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响

目的:探讨蟾毒灵(Bufalin)对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法检测Bufalin对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响;倒置显微镜观察各组细胞数目、形态及活性的变化;膜联蛋白(Annexin V)碘化丙啶(PI)标记法检测其对细胞凋亡的影响。结果:不同浓度Bufalin对U251细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在0.001~10μmol·L^(-1)浓度范围内呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,Bufalin给药组对U251细胞的凋亡率均显著增高(P<0.01)。结论:Bufalin可显著抑制U251细胞的生长增殖,并在一定范围内呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡。

RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响。方法分别构建3种靶向c-Met基因的短发卡RNA(sh RNA)序列,以脂质体转染的方式导入人脑胶质瘤U251细胞,并筛选出稳定表达的细胞株。采用PCR和Western blot检测c-Met-sh RNA转染后U251细胞c-Met的表达情况,以筛选出可有效沉默c-Met基因的sh RNA。c-Met基因沉默后,采用MTT法和流式细胞术检测U521细胞增殖情况,采用Transwell法和细胞划痕实验检测U251细胞侵袭和迁移情况,采用裸鼠荷瘤实验研究U251细胞体内成瘤性。结果成功构建可有效沉默c-Met基因的c-Met-sh RNA1。沉默c-Met后,c-Met m RNA以及蛋白的表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);而且可明显抑制U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力。

RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默c-Met基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生长活力及体外侵袭能力的影响。方法将设计好的c-Met基因干扰载体转染至U251细胞中,根据转染质粒不同分为空白对照组(不转染任何质粒)、空载体组(转染空载体)和干扰组(转染重组质粒)。采用四唑盐比色法(MTT)检测细胞的生长活力的变化;采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 MTT检测结果显示干扰组光密度值(0.156±0.164)显著低于空白对照组(0.21±0.146;P<0.05)和空质粒组(0.191±0.138;P<0.05),而空质粒组和空白对照组无显著差异(P>0.05)。细胞体外侵袭能力检测结果显示,干扰组穿膜细胞数[(13.60±3.34)个]显著低于空白对照组[(32.90±6.49)个;P<0.05]和空质粒组[(23.10±2.77)个;P<0.05],而空质粒组和空白对照组无统计学差异(P>0.05)。结论沉默c-Met基因表达能明显抑制U251细胞的生长活力及其侵袭能力。

马来酸桂哌齐特对不同条件下体外培养的人脑胶质瘤U251细胞腺苷激酶的影响

目的观察马来酸桂哌齐特(CM)对不同条件下体外培养的人脑胶质瘤U251细胞腺苷激酶(ADK)表达水平的影响,探讨CM是否可通过影响细胞内ADK表达水平而实现其神经保护作用。方法 2013年2月—2014年6月,将人脑胶质瘤U251细胞铺到6孔板,1孔为1组,分别为胎牛血清(FBS)+0.9%氯化钠溶液对照组(C组)、FBS+CM 0.5 mg/ml组(C+0.5组)、FBS+CM 1.5 mg/ml组(C+1.5组)、血清剥夺(SD)+0.9%氯化钠溶液对照组(SD组)、SD+CM 0.5 mg/ml组(SD+0.5组)、SD+CM 1.5 mg/ml组(SD+1.5组),进行正常体外细胞培养或SD体外缺血模式培养。提取细胞蛋白、RNA,采用Western blotting法检测人脑胶质瘤U251细胞ADK表达水平,RT-PCR法检测人脑胶质瘤U251细胞ADK mRNA表达水平。结果 6组ADK表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SD+0.5组ADK表达水平低于C组(P<0.05)。6组ADK mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SD+0.5组ADK mRNA表达水平低于C组、SD+1.5组(P<0.05)。结论 SD体外缺血模式培养下,CM在一定浓度范围内可能通过增强人脑胶质瘤U251细胞的ADK表达抑制作用来实现其神经保护作用。

腺病毒介导PTEN过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长

目的:研究含第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homologue deleted on chromo-some 10,PTEN)基因的重组腺病毒(Ad-PTEN-GFP)对人胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:于裸鼠背部注射人脑胶质瘤U251细胞,建立胶质瘤裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为3组进行治疗:Ad-PTEN-GFP组,Ad-GFP组(空载体组)及PBS组(空白组),观察3组裸鼠移植瘤的生长,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,并观察荷瘤裸鼠的生存时间。采用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡的情况,采用免疫组化法检测移植瘤组织中PTEN及P65蛋白的表达。结果:与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组移植瘤的生长受到抑制,肿瘤体积抑制率显著升高[(82.5±12.7)%vs(7.2±1.3)%,P<0.05],荷瘤裸鼠生存时间延长[(103±10)vs(58±8)d,P<0.01];TUNEL结果表明,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤细胞凋亡率明显增加[(46.4±8.3)%vs(4.6±1.0)%,P<0.01];免疫组化结果显示,Ad-PTEN-GFP组与Ad-GFP组相比,移植瘤组织中PTEN蛋白的阳性表达率增高(83.3%vs 0,P<0.01),P65蛋白阳性表达率下降(16.7%vs 66.7%,P<0.01)。结论:感染Ad-PTEN-GFP后人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制,其机制可能与P65蛋白表达的下调有关。

PTEN-Long对人脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探索PTEN-Long对U251细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及相关机制。方法将携带PTEN-Long基因的重组慢病毒载体转染U251细胞。未感染慢病毒的细胞为对照组(U251),感染LV-EGFP的细胞为空载组(U251-EGFP),感染LV-PTEN-Long-EGFP的细胞为过表达组(U251-PTEN-Long-EGFP)。通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,并应用RT-PCR、Western blot法检测LV-PTEN-Long-EGFP转染效率。通过RT-PCR、Western blot法检测各组细胞PI3K-AKT-NF-κB信号通路表达情况;CCK8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞分析术检测各组细胞周期变化;划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell小室法检测各组细胞侵袭能力。结果 LV-PTEN-Long-EGFP转染U251细胞后,经荧光显微镜、RT-PCR和Western blot证实转染成功(P <0.01)。与对照组及空载组比较,RT-PCR显示过表达组NF-κB p65、bcl-xl表达水平降低,IκBα表达水平增加(P <0.01);Western blot显示过表达组p-Akt、NF-κB p65、p-NF-κB p65、bcl-xl表达水平降低,IκBα表达水平增加,差异有统计学意义(P <0.01)。PTEN-Long下调PI3K-AKT-NF-κB信号通路。过表达组增殖、迁移、侵袭能力受抑制(P <0.01),细胞周期被阻滞在G0/G1期(P <0.01)。结论 PTENLong可能通过抑制PI3K-AKT-NF-κB信号通路,抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。

慢病毒介导PTEN-Long过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤的生长

背景:第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosohataseandtensinhomolguedeletedon chromosome10,PTEN)的翻译变体(PTEN-Long)是新发现的一种肿瘤抑制基因,与多种肿瘤的发展密切相关。目的:探讨PTEN-Long对人脑胶质瘤U251细胞裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用及相关分子机制。方法:(1)人脑胶质瘤细胞U251购自国家实验细胞资源共享服务平台北京总部,实验将未感染慢病毒的U251为对照组,感染LV-EGFP的U251为空载组,感染LV-PTEN-Long-EGFP的U251为过表达组,用荧光显微镜、Western blot检测转染效率;(2)实验将购自北京华阜康生物科技股份有限公司的BALB/c-nu雄性裸鼠随机分为3组,将3组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察裸鼠一般状况及肿瘤生长趋势,分析各组裸鼠皮下肿瘤的体积及质量变化,免疫组织化学染色法检测肿瘤中PTEN-Long,p-Akt及NF-κB p65蛋白表达变化情况。结果与结论:(1)一般状况:PTEN-Long过表达后可抑制裸鼠皮下胶质瘤细胞的增殖,与对照组及空载组相比,过表达组裸鼠肿瘤体积及质量减少(P <0.01);(2)免疫组织化学染色显示:与对照组及空载组相比,过表达组PTEN-Long表达量增加(P<0.05),p-Akt及NF-κBp65表达量降低(P<0.05);(3)结果显示:PTEN-Long可抑制人脑胶质瘤U251细胞裸鼠异体移植瘤的生长,机制可能与下调PI3K-AKT-NF-κB信号通路有关。

长链非编码RNA PVT1对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响

目的探讨长链非编码RNA PVT1(lnc RNA-PVT1)对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法体外培养胶质瘤细胞系U251细胞,分别转染PVT1 si RNA(PVT1组)和negative control si RNA(对照组)。PCR法检测lnc RNA-PVT1及C-MYCm RNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot检测C-MYC蛋白表达水平。结果 PVT1组lnc RNA-PVT1 m RNA表达水平(0.27±0.08)较对照组(1.0±0.30)明显降低(P<0.05);PVT1组C-MYC m RNA表达水平(0.87±0.19)与对照组(1.0±0.15)无明显差异(P>0.05)。转染si RNA后1、2、3 d,PVT1组U251细胞活力较对照组均明显降低(P<0.05)。PTV1组C-MYC蛋白表达水平(0.29±0.12)较对照组(0.85±0.27)明显降低(P<0.05)。结论降低lnc RNA-PVT1表达水平能够抑制U251细胞增殖,其机制可能与lnc RNA-PVT1够影响C-MYC蛋白的表达水平有关。

白花丹醌通过E-cadherin增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的探讨白花丹醌增强替莫唑胺对人脑胶质瘤U251细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制。方法CCK-8法检测白花丹醌、替莫唑胺、白花丹醌+替莫唑胺组对U251细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测对照组(DMSO)、白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组U251细胞48 h的迁移能力;Transwell实验检测白花丹醌增强替莫唑胺对U251细胞侵袭的影响;蛋白质印迹法检测白花丹醌、替莫唑胺和白花丹醌+替莫唑胺组细胞中E-cadherin的相对表达量。结果CCK-8结果显示白花丹醌(1.25μmol/L)联合替莫唑胺(200μmol/L)处理48 h后,U251细胞增殖抑制率为75.69%,明显高于单独应用白花丹醌(P=0.012)或替莫唑胺组(P=0.034)。细胞划痕实验显示白花丹醌联合替莫唑胺可以明显增强替莫唑胺抑制胶质瘤细胞迁移的能力(P=0.023)。Transwell实验结果显示联合用药后U251细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。联合用药组E-cadherin蛋白表达含量明显高于单独用药组(P<0.05)。结论白花丹醌联合替莫唑胺可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭、增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感度,且是通过E-cadherin蛋白表达实现的。

五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨五味子多糖对人脑胶质瘤U251细胞体外生长的抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法实验分为4组,对照组常规培养(不加任何药物)人脑胶质瘤U251细胞,五味子多糖250μg/mL、500μg/mL、800μg/mL组分别加入相应浓度的五味子多糖培养人脑胶质瘤U251细胞。采用MTT法检测各组细胞培养12,24,48 h后生长抑制率;Transwell细胞体外侵袭实验法使细胞穿过小室透膜数量,检测各组细胞迁移能力;流式细胞实验结合AnnexinV-FITC/PI双染色法检测各组细胞培养12,24,48 h后早期凋亡百分比。RT-PCR技术检测500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后bcl-2、bax、caspase-3基因表达水平。结果与对照组比较,不同浓度五味子多糖对U251细胞有显著增殖抑制作用(P均<0.05),且抑制作用呈现剂量与时间效应关系;与对照组比较,五味子多糖各组细胞迁移抑制率、细胞早期凋亡率、细胞晚期凋亡率均明显增高(P均<0.05),且细胞迁移抑制率和细胞凋亡率随五味子多糖浓度增高而增高(P均<0.05)。500μg/mL五味子多糖作用U251细胞12,24,48 h后,Bax、Caspase-3基因表达水平及Bax/Bcl-2比值逐渐增高,Bcl-2基因表达水平逐渐降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论五味子多糖能显著抑制人脑胶质瘤U251细胞生长,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,其促进凋亡作用机制可能与上调Bax、Caspase-3基因表达水平,下调Bcl-2基因表达水平相关。

冬凌草甲素促进人脑胶质瘤U251细胞放疗敏感性的研究

目的探讨冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞放疗敏感性的影响。方法人脑胶质瘤U251细胞随机分为对照组(脑胶质瘤U251细胞常规培养)、冬凌草甲素组(冬凌草甲素10μmol/L培养24 h)、X线照射组(21EX型双光子高能直线加速器照射)、联合放疗组(X线照射+冬凌草甲素)。观察4组人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制率,检测其凋亡率,分析Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平变化。结果与对照组比较,冬凌草甲素组、X线照射组及联合放疗组人脑胶质瘤U251细胞增殖率降低,且联合放疗组低于冬凌草甲素组及X线照射组(P<0.05);与对照组比较,冬凌草甲素组、X线照射组及联合放疗组人脑胶质瘤U251细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达量均显著增高,且联合放疗组高于冬凌草甲素组及X线照射组(P<0.05)。结论冬凌草甲素可显著提高人脑胶质瘤U251细胞的放疗敏感性,为冬凌草甲素应用于胶质瘤的放疗提供了理论依据。

FAM92A1-289对人脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移能力的影响及其与Galectin-1的关系

目的探讨FAM92A1-289对人脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移能力的影响及其与半乳糖凝集素1(Galectin-1)的关系。方法将CMV-SP6-TALEN-GFP-289质粒转染至U251细胞中,通过嘌呤霉素筛选得到稳定过表达FAM92A1-289基因的脑胶质瘤U251/289++细胞株。取脑胶质瘤U251/289++细胞作为观察组,未转染质粒的野生型U251细胞作为对照组,采用实时无标记动态细胞分析技术检测两组培养24、48、72、96、120 h的细胞增殖能力(以光密度值表示),采用Transwell小室试验检测两组细胞迁移能力(以穿膜细胞数表示)。构建PCS2-3Flag-Galectin-1质粒,将人脑胶质瘤U251细胞随机分为FAM92A1-289组、Galectin-1组、共转染组及空白对照组,FAM92A1-289组、Galectin-1组均采用Lipofactamine 3000转染法分别转染CMV-SP6-TALEN-GFP-289质粒、PCS2-3Flag-Galectin-1质粒,共转染组同时转染上述两种质粒,空白对照组仅加入Lipofactamine 3000转染试剂。采用免疫共沉淀实验验证FAM92A1-289与Galectin-1是否存在相互作用。结果两组培养24 h光密度值比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组培养48、72、96、120 h光密度值均高于对照组(P<0.05或<0.01)。观察组与对照组穿膜细胞数分别为(242.0±11.41)、(65.40±7.92)个,两组比较P<0.01。共转染组抗GFP蛋白相对表达量明显高于FAM92A1-289组、Galectin-1组及空白对照组(P均<0.01)。结论过表达FAM92A1-289可提高人脑胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力;FAM92A1-289与Galectin-1之间的相互作用可能为FAM92A1-289调控人脑胶质瘤U251细胞恶性行为的作用机制。

槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制研究

探讨槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖和侵袭及机制。方法 根据实验方式进行分组,分为对照组、槐定碱组、氯喹+槐定碱组。对槐定碱抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭能力、迁移能力及活性氧蛋白水平激发情况进行分析,其中细胞增殖的抑制作用利用MTT法检测、侵袭能力利用Transwell小室法检测、细胞的迁移能力利用细胞划痕试验检、活性氧蛋白水平利用Western-blot法检测。结果 与对照组中的超微结构结构相比,U251恶性胶质瘤细胞株在经过槐定碱处理后,其胞质中出现大小不等的自噬体,而这部分自噬体中含有溶酶体、胞质等未消化的细胞器。MTT法检测发现在使用槐定碱试剂进行干预后,槐定碱组中槐定碱对U251恶性胶质瘤细胞生长的半数抑制浓度为(16.45±2.41),高于氯喹+槐定碱组的(2.67±0.56)及对照组的(1.01±0.03);通过Transwell小室检测细胞迁移率发现槐定碱组低于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);LC3Ⅱ/Ⅰ、活性氧水平分析中槐定碱组高于氯喹+槐定碱组及对照组(P<0.05);同时Person相关性分析提示活性氧与细胞中呈正相关性(r=0.431,P<0.05)。结论 通过分析发现,槐定碱能够通过调节、诱导自噬来抑制U251恶性胶质瘤细胞株增殖、侵袭、迁移,并涉及细胞中活性氧水平的改变。

溶瘤新城疫病毒抑制IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞的迁移和侵袭

目的:探讨溶瘤新城疫病毒(NDV)对IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的机制。方法:将U87MG细胞分为对照组、IL-6组、NDV组、NDV+IL-6组,其中IL-6组与NDV+IL-6组用75 ng/mL IL-6预处理1 h,其余组用DMEM预处理1 h,后分别用DMEM、75 ng/mL IL-6、1 HU NDV、1 HU NDV+75 ng/mL IL-6处理24 h。MTT法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测IL-6、NDV对U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB法检测各组细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3和MMP2蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,IL-6组细胞迁移率显著升高(P<0.05),侵袭细胞数目显著增多(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组U87MG细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移率和侵袭细胞数目均显著降低(均P<0.01)。WB实验结果显示,与对照组相比,IL-6组p-STAT3/STAT3比值显著升高(P<0.01),NDV组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-2蛋白表达量显著降低(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组p-STAT3/STAT3比值、MMP-2蛋白表达量均显著降低(均P<0.05)。结论:NDV能抑制IL-6对人脑胶质瘤U87MG细胞迁移和侵袭的诱导作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路的参与调控有关。

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl-2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用(P<0.05),呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显(P均<0.05)。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱(P均<0.05)。结论冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase-3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。

海参皂苷抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞生长实验研究

目的研究一种新型海参皂苷fuscocineroside A对人脑胶质母细胞瘤U251细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;用Hoechst33342荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测分析U251细胞凋亡;并通过Western blot检测细胞内survivin蛋白表达情况。结果Fuscocineroside A能显著抑制U251细胞的生长,诱导其凋亡,下调survivin的表达,呈浓度及时间依赖性,而对正常胶质细胞并没有明显抑制作用。结论Fuscocineroside A能诱导U251细胞凋亡,这种作用可能与survivin的表达下调有关。