人脑胶质细胞瘤不同亚型的放射敏感性测定

目的 测定人脑胶质细胞瘤不同亚型的内在放射敏感性。方法 应用体外克隆形成技术观察人脑胶质细胞瘤DEFTA的4个亚型α_1、α_2、α_3,及α_4受小剂量0,0.1,0.5,1.0和2.0GY及大剂量0、4、8、10和12GY4MV直线加速器X射线照射后的种植系数,存活比例及剂量存活曲线。结果 α_1细胞的D_0值是4.55GY、α_2细胞的D_0值为4.42GY,α_3细胞的D_0值为3.52GY及α_4细胞的D_0值为4.62GY。结论 人脑胶质细胞瘤DEF7A具有不同的内在放射敏感性。

大鼠交泰丸含药血清预处理对人脑胶质细胞氧化损伤的改善作用及其分子机制

目的观察大鼠交泰丸含药血清预处理对人脑胶质细胞(HEB)氧化损伤的改善作用并探讨其分子机制。方法SD大鼠随机分为两部分,分别通过肉桂及黄连水提物灌胃、同体积蒸馏水灌胃制备交泰丸含药血清及空白血清,将DMEM培养基与血清配制成10%完全培养基。将HEB分为对照组、模型组及交泰丸组,对照组及模型组加入空白血清培养基、交泰丸组加入含药血清培养基。培养24 h后,交泰丸组及模型组使用过氧化氢处理建立HEB氧化损伤模型,对照组使用等体积PBS处理。采用β-半乳糖苷酶染色法观察各组细胞氧化损伤比例,CCK-8法观察细胞活力,流式细胞术观察细胞凋亡率,活性氧荧光染色法观察细胞氧化应激水平,qRT-PCR法检测细胞衰老相关基因沉默信息调节因子1(SIRT1)、趋化因子联接因子1(CXCL1)、叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)、P16、白细胞介素1α(IL-1α)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、IL-6 mRNA表达。结果细胞氧化损伤比例模型组>交泰丸组>对照组,细胞活力对照组>交泰丸组>模型组,细胞凋亡率模型组>交泰丸组>对照组(P均<0.05)。对照组细胞核膜边界清晰,ROS荧光强度低;模型组细胞核膜发生部分裂解,ROS荧光强度增强;交泰丸组细胞膜及核膜结构较模型组更加完整,ROS荧光强度降低。与对照组比较,模型组SIRT1、FOXO1 mRNA表达下降,CXCL1 mRNA表达上升;与模型组比较,交泰丸组SIRT1、FOXO1 mRNA表达下降(P均<0.05),三组其他基因比较差异均无统计学意义。结论大鼠交泰丸含药血清预处理可抑制过氧化氢诱导的HEB氧化损伤,其机制可能与增强细胞活力、抗细胞凋亡、减少细胞氧化应激水平以及抗炎症有关。

TGF-β1在人脑星形胶质细胞瘤中的表达

目的检测转换生长因子1蛋白(TGF-β1)在人脑胶质细胞瘤组织中的表达,探讨其作用。方法选择人脑胶质细胞瘤组织,采用免疫组化检测TGF-β1的表达水平。结果 TGF-β1在人脑胶质细胞瘤组织中的阳性表达率比正常脑组织明显增高,TGF-β1的表达量随着胶质细胞的恶变有所增加。结论 TGF-β1的阳性表达率与瘤细胞含量有关,与临床病理特征无关。

姜黄素通过改变FAK表达和激活caspase诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究姜黄素诱导U251细胞凋亡机制。方法20～100μmol·L^-1姜黄素分别处理U251细胞24h后，MTT法测定姜黄素对U251细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；用免疫细胞化学分析姜黄素对FAK（focal adhesion kinase，粘着斑激酶）蛋白质表达的影响；荧光分光光度法检测caspase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制U251细胞的增殖；诱导U251细胞凋亡；FAK蛋白表达减少；easpase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的U251细胞凋亡。结论姜黄素通过抑制FAK蛋白的表达和激活caspase途径可诱导U251细胞凋亡。

CpG ODN107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究

目的探讨CpG ODN107增加人脑胶质瘤细胞(CHG-5)放射敏感性的作用及可能机制。方法用不同浓度CpG ODN107处理CHG-5细胞,然后经放射线照射,MTT法检测细胞的增殖情况,体外培养集落形成率与细胞划痕法观察细胞的集落形成和迁移能力,ELISA法检测细胞TNF-α的分泌水平。结果CpG ODN107抑制CHG-5细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN107(10μg/mL)联合放射线照射,抑制CHG-5细胞的增殖作用最强(0.52±0.76)。CpG ODN107(10μg/mL)同样能抑制CHG-5细胞增殖和迁移,并且增加了TNF-α的分泌,在联合照射后作用更加显著(193±0.58)pg/mL。结论CpG ODN107对CHG-5有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN107增强肿瘤细胞TNF-α的分泌有关。

共刺激分子4-1BBL和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达

背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1BBL的表达与耐药性的相关性。结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1BBL,但均不表达B7-1。其中T98G和MGR1细胞表面的4-1BBL表达>30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1BBL表达<10%,对VCR敏感。结论:本研究所检测的胶质瘤细胞均不表达共刺激分子B7-1,但有不同程度的表达4-1BBL,并且4-1BBL高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差。

亲细胞非均质分子脂质对人脑胶质瘤细胞系的抑制作用

目的 :研究不同浓度亲细胞非均质分子脂质 (CHML)对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法 :将指数生长期的SHG 4 4胶质瘤细胞分 6组 ,在 1～ 5组分别加入浓度为 5 0 0、2 0 0、10 0、5 0、2 0 μg/ml的CHML 6 .0和CHML 6 1复合液 ,第 6组加培养液作对照。于 2 4、48、72小时进行MTT检测 ,测定A值。结果 :各药物组与对照组的A值之间差别均有极显著的意义 ,其中两两比较检验表明 5 0 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml组的A值与其他组比较差异有显著性。结论 :CHML对人脑胶质瘤细胞有显著抑制作用 ,并有一定剂量 效应关系 ,尤其是 5 0 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml的药物组作用更为突出。

异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响

目的 探讨异甘草素联合替莫唑胺对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖的影响。方法 采用含无血清达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基（DMEM/F12）（含表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、B27）的悬浮细胞培养板培养、纯化胶质瘤干细胞，并通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定；实验分为对照组／[含二甲基亚砜（DMSO）／]、异甘草素（5~160 μmol/L）组、替莫唑胺（12.5～200 μmol/L）组、异甘草素＋替莫唑胺组（160 μmol/L＋12.5~200 μmol/L），通过细胞增殖毒性检测（CCK-8）法、流式细胞术、免疫荧光染色法分别检测细胞抑制率、细胞周期及干细胞表面相关分化蛋白表达情况。结果异甘草素随着浓度增加细胞抑制作用越强，且160 μmol/L时抑制率达32%，替莫唑胺随着浓度增加抑制作用越强，且200 μmol/L时抑制率达40%；异甘草素联合替莫唑胺组随着浓度增加抑制作用越强，且160 μmol/L＋200 μmol/L时抑制率达72%；随着异甘草素浓度增加G0/G1期细胞比例增加，细胞周期阻滞于G0/G1期；随着异甘草素浓度增加干细胞分化越多，且分化细胞的死亡越多。结论异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化，且能抑制增殖，同时增强替莫唑胺化疗敏感性。

不同浓度七氟醚对人脑胶质瘤细胞U251替莫唑胺抵抗的影响及机制初探

目的探究不同浓度七氟醚对人脑胶质瘤细胞U251替莫唑胺(TMZ)抵抗的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养对数生长期的人脑胶质瘤细胞U251,传代后将细胞分为3组:对照组、低七氟醚组及高七氟醚组。对照组在5%CO_2气体条件下培养,低七氟醚组在5%CO_2+1%七氟醚气体条件下培养,高七氟醚组在5%CO_2+2.5%七氟醚气体条件下培养,总气流量为2 L/min。MTT法检测3组细胞TMZ半抑制浓度(IC_(50))的变化,荧光定量链式聚合酶反应(qPCR)检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达水平的变化,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测HIF-1α蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示对照组细胞TMZ IC_(50)值显著高于高七氟醚组IC_(50)值(P<0.05),而与低七氟醚组IC_(50)值差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示对照组HIF-1αmRNA相对表达水平显著高于低七氟醚组及高七氟醚组(P<0.05),且低七氟醚组HIF-1αmRNA相对表达水平显著高于高七氟醚组(P<0.05),Western blotting结果显示对照组HIF-1α蛋白表达水平明显高于低七氟醚组及高七氟醚组,且低七氟醚组HIF-1α蛋白表达水平明显高于高七氟醚组。结论七氟醚促进人脑胶质瘤细胞U251对TMZ的敏感性,可能与下调HIF-1α有关。

CRISPR/Cas9敲除pyk2基因对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

为了探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶(proline rich tyrosine kinase2,Pyk2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响,设计了2对以pyk2为靶基因的sgRNA片段,以px335质粒为载体,构建CRISPR/Cas9重组质粒,转染至人脑胶质瘤U251细胞中,同时设置野生型U251细胞作为对照组。通过酶切鉴定及Western blot分析筛选阳性单克隆细胞,并测序揭示突变位点。筛选出的阳性单克隆细胞作为实验组,经RTCA法比较后,发现实验组细胞的增殖能力较对照组明显下降,且具有统计学意义(P<0.05);Transwell小室法及划痕实验的结果均证实,较对照组,实验组细胞的体外侵袭及迁移能力受到明显的抑制,差异显著(P<0.05)。作为验证侵袭能力的代表,基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)在Western blot实验中表达量较对照组也明显下降。通过上述方法成功得到目的基因敲除的稳定细胞株,并证实敲除pyk2基因能明显的抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

蟾毒灵对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响

目的:探讨蟾毒灵(Bufalin)对人脑胶质瘤U251细胞生长增殖的影响。方法:采用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法检测Bufalin对人脑胶质瘤U251细胞增殖的影响;倒置显微镜观察各组细胞数目、形态及活性的变化;膜联蛋白(Annexin V)碘化丙啶(PI)标记法检测其对细胞凋亡的影响。结果:不同浓度Bufalin对U251细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在0.001~10μmol·L^(-1)浓度范围内呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,Bufalin给药组对U251细胞的凋亡率均显著增高(P<0.01)。结论:Bufalin可显著抑制U251细胞的生长增殖,并在一定范围内呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡。

替莫唑胺对人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察替莫唑胺对人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法取对数生长期U251细胞,分别加入0.02、0.06、0.1 g/L替莫唑胺,空白对照组不加替莫唑胺,分别培养24、48、72 h,MTT实验观察细胞增殖情况;取对数生长期U251细胞,加入0.06 g/L替莫唑胺(0.06 g/L替莫唑胺组),细胞培养48 h后,用流式细胞技术测算细胞凋亡率,RT-PCR法、Western blotting法检测存活素(Survivin)mRNA、蛋白。结果随着替莫唑胺浓度增加及作用时间延长,U251细胞增殖抑制率越高。0.06 g/L替莫唑胺组细胞凋亡率为22.6%±2.3%,对照组为3.3%±1.1%,两组比较,P<0.05;0.06 g/L替莫唑胺组Survivin mRNA相对表达量为0.65±0.11,对照组为0.96±0.15,两组比较,P<0.05;0.06 g/L替莫唑胺组Survivin蛋白相对表达量为0.25±0.03,对照组为0.49±0.04,两组比较,P<0.05。结论替莫唑胺能有效抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin表达有关。

电离辐射和三氧化二砷联合对人脑胶质瘤SHG44细胞的杀灭作用

目的 研究电离辐射联合三氧化二砷(As2O3)对人脑胶质瘤SHG44细胞的杀灭作用。方法 以SHG44细胞为实验对象,用四氮唑盐(MTT)比色法观察不同剂量的电离辐射、单独As2O3及不同剂量的电离辐射和As2O3联合对SHG44细胞的杀灭作用;用激光共聚焦显微镜观察细胞的形态学变化。结果 (1)照射与As2O3联合组SHG44细胞存活率低于单独相应剂量照射组(P<0.01)和单独As2O3组(P<0.01);(2)2Gy剂量照射+4μmol／L As2O3组对SHG44细胞杀灭作用强于6Gy剂量单独照射组(P<0.01),相当于8Gy单独照射组(P>0.05);(3)激光共聚焦显微镜下观察到As2O3处理组细胞出现明显的凋亡形态学变化。结论 电离辐射和As2O3联合对SHG44细胞的杀灭作用分别强于电离辐射和As2O3单独作用;

^(60)Coγ射线照射联合三氧化二砷对人脑胶质瘤SHG44细胞DNA损伤的研究

目的研究60Coγ射线照射联合As2O3对SHG44细胞的生长抑制作用。方法以SHG44细胞为实验对象,3H-TdR掺入法研究As2O3和照射对SHG44细胞DNA合成率的影响;用单细胞凝胶电泳法,以DNA彗星尾长及尾部DNA百分含量来比较As2O3、照射分别单独作用及它们联合作用对细胞DNA的损伤。结果联合组SHG44细胞存活率低于As2O3(P<0.01);3组均诱导DNA损伤,联合作用组对细胞DNA的损伤程度明显高于照射及As2O3单独作用组。结论电离辐射和As2O3联合应用对SHG44细胞的杀灭作用均强于电离辐射和As2O3单独作用。

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明。

替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的体外试验研究

现今化疗药物种类繁多，但有效率均不理想，本实验应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法比较替莫唑胺（TMZ）联合分子靶向药物西妥昔单抗（C225）对人脑胶质瘤细胞的抑制作用，旨在探索一种有效、新型的化疗方案。

人脑星型胶质母细胞瘤裸小鼠术后转移模型的建立

目的建立人脑星型胶质母细胞瘤裸小鼠术后转移模型,为脑胶质瘤的基础和临床研究提供理想的实验动物模型。方法首先建立27只裸小鼠人脑星型胶质母细胞瘤U87MG皮下移植瘤模型,待肿瘤长至20 mm左右时18只裸小鼠手术切除皮下肿瘤建立术后转移动物模型,其余9只作为对照组,动物处于濒死状态时进行大体解剖观察远处脏器转移,并观察组织病理学改变。结果成功建立了人脑星型胶质母细胞瘤术后转移模型,动物的平均寿命约67.3 d,肺表面可见若干个大小不等的透明结节,平均肺重为0.83±0.30 g,肺转移率达100%(18/18),胸腔淋巴结转移率达66.67%(12/18),1只动物出现心内转移。对照组动物的平均荷瘤寿命为56 d,1只动物出现肺转移,肺转移率为11.11%(1/9),平均肺重为0.41±0.12 g。结论本模型较好地模拟了临床肿瘤根除术后发生自发远处转移的过程,为脑胶质瘤的转移机理及抗转移治疗等相关实验研究提供了理想的动物模型。

小檗碱联合松果菊苷抗人脑胶质细胞衰老的实验研究

目的:探究小檗碱联合松果菊苷抗人脑胶质细胞衰老的作用及其分子机制。方法:采用依托泊苷诱导人脑胶质细胞衰老,使用小檗碱与松果菊苷联合干预,采用β-半乳糖苷酶染色法色观察衰老阳性细胞比例,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot法检测细胞中衰老相关蛋白FoxO1、CAT、SOD2、Bcl-2的表达水平。结果:小檗碱联合松果菊苷可显著减少依托泊苷诱导的衰老阳性细胞比例,显著增强细胞活力,显著降低G2/M期细胞比例,显著提高FoxO1、CAT、SOD2、Bcl-2的蛋白水平。结论:小檗碱联合松果菊苷可显著抑制依托泊苷诱导的人脑胶质细胞衰老,可能与增强细胞活力、推进细胞周期进程、降低胞内氧化应激水平、抗凋亡等途径有关。

Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中的作用及机制探讨

目的观察Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖和凋亡中的作用,并探讨其机制。方法将U87细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h。用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot法分别检测U87细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白。结果培养24、48、72、96 h,A组细胞A值分别为0.185±0.007、0.398±0.012、0.735±0.015、1.083±0.031,B组分别为0.102±0.003、0.130±0.004、0.161±0.006、0.194±0.003,C组分别为0.167±0.005、0.265±0.008、0.496±0.011、0.737±0.016,A、B组与C组比较,P均<0.05。A、B、C组细胞凋亡率分为0.96%±0.17%、26.51%±3.74%、8.76%±1.40%,A、B组与C组比较,P均<0.05。与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均<0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均<0.05)。结论 Notch1信号通路在人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hes1、抗凋亡蛋白Bcl-2表达有关。

Yes相关蛋白对人脑胶质瘤干细胞增殖的促进作用

目的探讨Hippo信号传导通路下游转录共激活子Yes相关蛋白(YAP)在人脑胶质瘤干细胞中调控作用。方法利用FACS分选得到CD133-和CD133+细胞,利用PCR和Western blot法检测2组细胞间YAP表达的差异;利用小发夹RNA干扰CD133+细胞中YAP的表达,通过MTT法分析YAP干扰表达后人脑胶质瘤干细胞增殖情况。结果 YAP m RNA和蛋白在CD133+细胞中表达明显高于CD133-细胞;YAP干扰表达后CD133+细胞增殖能力减弱。结论 YAP参与人脑胶质瘤干细胞的功能调控,对人脑胶质瘤干细胞的增殖起到促进作用。