重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的研究

将 Eco R1和 Sal I酶切的人脑髓鞘碱性蛋白 ( MBP)基因 c DNA克隆片段与表达载体 p GEX- 5 T重组后转化大肠杆菌 ,经筛选 ,增殖和 IPTG诱导 ,阳性克隆 SDS- PAGE结果证实表达一条特异 42 KDa区带 ,Western印记杂交证实该区带具 MBP抗原特异性 ,免疫斑点杂交和 EL ISA检测表达产量占菌体可溶性蛋白含量 6% ,达414.6m g/ L 菌液。将含可溶性 MBP蛋白的菌液行 SDS- PAGE分离纯化得重组 MBP抗原 ,对新西兰兔进行背部皮下多点注射 ,5次免疫后以琼脂板免疫双扩法检测抗体效价达 1∶ 16,并通过免疫斑点杂交和 Western印迹杂交证实该抗体具抗

重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的制备与研究(英文)

背景:中枢神经系统髓鞘中蛋白部分的1/3为髓鞘碱性蛋白。作为一个蛋白质家族在人脑中有4种分子形式。目的:探讨重组人脑脊髓碱性蛋白表达及其免疫学的功能。设计:单一样本研究。单位:四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2003-08/2004-03在四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室完成。人脑hMBP相对分子质量为21500,T4DNALigase,小牛肠碱性磷酸酶,RNase,PEG8000等,硝酸纤维滤膜,抗人脑髓鞘碱性蛋白ELISA试剂盒。干预:①采用EcoR1和BamH1酶切人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA克隆片段。②重组表达载体p5TMP的构建及转化。③重组表达载体转化菌的生长及其诱导表达。④重组hMBP抗体制备主要观察指标:①蛋白表达产物的检测与鉴定。②人脑hMBP抗体检测与鉴定。结果:①分别有4999bppGEX-5TDNA和557bp人脑髓鞘碱性蛋白插入片段。②原对照质粒一条浓区带消失,而重组体有特异蛋白质区带出现。相对分子量为42000。③5次注射人脑髓鞘碱性蛋白后抗体效价达到1/16。并证实其hMBP抗原特异性。结论:本文构建了含相对分子质量为21500人脑髓鞘碱性蛋白外显子Ⅰ-Ⅶ编码序列的表达载体,还成功制备了重组人脑髓鞘碱性蛋白抗体。

颅脑外伤术后血清神经生化标志物及其脑脊液中P73、P38蛋白表达的意义

目的探讨颅脑外伤术后血清神经生化标志物及其脑脊液中肿瘤蛋白P73(P73)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)蛋白表达的意义。方法选取2017年5月至2019年7月郑州大学附属郑州中心医院收治的101例颅脑外伤术后病人作为观察组,选取同期体检中心101例健康体检者作为对照组。比较两组、不同预后病人血清中枢神经特异性蛋白(S100β)、人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平及脑脊液中P73、P38蛋白表达情况。采用Pearson分析各指标与格拉斯哥预后评分(GOS)的相关性,采用接收者操作特征(ROC)曲线分析血清神经生化标志物、脑脊液中P73、P38蛋白预测不良预后的价值。比较不同认知功能病人血清神经生化标志物水平及脑脊液中P73、P38蛋白表达情况,分析各指标与MMSE评分相关性。结果观察组血清S100β[(0.91±0.36)μg/L]、MBP[(5.76±2.43)mg/L]、NSE[(9.74±5.02)μg/L]较对照组[(0.58±0.24)μg/L、(2.93±0.71)mg/L、(6.03±1.85)μg/L]高(P<0.05);预后良好、重残、不良病人血清S100β[(0.62±0.35)μg/L、(1.02±0.36)μg/L、(1.55±0.39)μg/L]、MBP[(3.81±2.15)mg/L、(6.44±2.64)mg/L、(10.20±2.82)mg/L]、NSE[(7.17±4.54)μg/L、(10.78±5.08)μg/L、(15.24±6.81)μg/L]表达依次递增,脑脊液中P73[(0.33±0.06)、(0.29±0.07)、(0.24±0.05)]、P38蛋白[(0.30±0.03)、(0.25±0.05)、(0.19±0.04)]表达依次递减(P<0.05);术后第3 d血清S100β、NSE与术后1个月GOS评分呈负相关,脑脊液中P73、P38蛋白与GOS评分呈正相关(P<0.05);各指标预测不良预后的AUC由大到小依次为S100β、P38蛋白、P73蛋白、NSE、MBP,最佳截断值分别为1.48μg/L、0.25、0.21、14.18μg/L、7.72 mg/L;认知功能损害为轻度、中度、重度的病人血清S100β、NSE依次升高,脑脊液中P73、P38蛋白依次降低(P<0.05);术后第3 d血清S100β、NSE与术后1个月MMSE评分呈负相关,脑脊液中P73、P38蛋白与MMSE评分呈正相关(P<0.001)。结论检测颅脑外伤病人血清S100β、NSE及脑脊液中P73、P38蛋白表达可在术后早期预测病人预后与认知功能,为临床干预提供重要参考。