目的:研究釉质基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated dediduous teeth,SHED)体外增殖分化能力的影响。方法:利用酶消化法联合组织块法获得脱落乳牙牙髓干细胞,并进行形态学...目的:研究釉质基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated dediduous teeth,SHED)体外增殖分化能力的影响。方法:利用酶消化法联合组织块法获得脱落乳牙牙髓干细胞,并进行形态学观察。三氯乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs对SHED进行诱导,利用四唑盐比色法(MTT)检测并分析诱导后的SHED增殖活性的变化,检测经诱导后的培养液中碱性磷酸酶(ALP)。RTPCR检测牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)及牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP-1)的mRNA表达。结果:人脱落乳牙牙髓干细胞呈集落生长,并且在体外具有一定的自我增殖能力。EMPs对乳牙牙髓干细胞的增殖无明显影响,而能够显著提高ALP的活性,并呈现一定的剂量依赖性。经EMPs诱导后,细胞相对高表达DSPP、DMP-1mRNA。结论:EMPs对于SHED向成牙本质样分化具有积极作用。展开更多
目的:通过间接共培养的方法初步探讨人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)在体外对破骨前体细胞分化的影响。方法:建立SHED与破骨前体细胞(外周血单个核细胞,peripheral blood mononuclear cel...目的:通过间接共培养的方法初步探讨人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)在体外对破骨前体细胞分化的影响。方法:建立SHED与破骨前体细胞(外周血单个核细胞,peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的间接共培养模型,利用TRAP染色观察PBMCs向破骨细胞样细胞分化后的细胞数目与形态,利用qPCR技术和Western Blot技术检测破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6的表达,以评估PBMCs向破骨细胞样细胞分化的情况。结果:与对照组相比,SHED与PBMCs间接共培养模型中,TRAP染色阳性、具有多个核的破骨细胞样细胞数量显著增多,破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6在PBMCs中的表达水平显著上调。结论:SHED能够以细胞非接触的方式促进破骨前体细胞向破骨细胞样细胞分化。展开更多
目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)骨分化能力的影响,分析ERK1/2-Runx2信号通路在该调控过程中的变化。方法:从6~8岁健康儿童...目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)骨分化能力的影响,分析ERK1/2-Runx2信号通路在该调控过程中的变化。方法:从6~8岁健康儿童正常乳恒牙替换即将脱落的乳切牙中分离和培养SHED,取第三代细胞,分为对照组(成骨诱导剂培养)、观察组(成骨诱导剂和TNF-α共培养)和激动剂组(成骨诱导剂、TNF-α和ERK通路激动剂共培养)。采用茜素红染色评价成骨分化功能,采用Western印迹检测SHED细胞中Osterix、OPN、ERK1/2、pERK1/2和Runx2的蛋白表达水平,应用qRT-PCR检测Osterix、OPN、ERK1/2、pERK1/2和Runx2 mRNA的表达。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:3组细胞成骨分化能力比较结果显示,3组细胞中均可见红棕色矿化结节。3组组间相比,对照组矿化结节最多,激动剂组次之,观察组最少。与对照组相比,观察组和激动剂组的Osterix、OPN蛋白和mRNA表达水平显著下降,而激动剂组Osterix、OPN蛋白和mRNA表达水平显著高于观察组;3组细胞的ERK1/2蛋白和mRNA表达水平无显著差异,而观察组和激动剂组pERK1/2和Runx2的蛋白和mRNA表达水平显著高于对照组,激动剂组的蛋白及mRNA表达水平显著高于观察组。结论:TNF-α对SHED成骨分化具有抑制作用,该作用可能与抑制ERK1/2-Runx2信号通路有关。展开更多
目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用。方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周...目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用。方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)与SHED的间接共培养模型,在破骨诱导液中加入核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082,通过实时定量PCR和Western Blot检测破骨相关基因及NF-κB信号通路相关因子表达的差异。结果:SHED共培养组的破骨相关基因CTSK、TRAP的表达水平较PBMCs单独培养组显著上调,而加入BAY11-7082刺激的SHED共培养组中破骨相关基因CTSK、TRAP和RANKL/OPG比值的表达水平显著低于SHED共培养组。结论:NF-κB信号通路通过调控RANK/RANKL/OPG受体配体系统介导SHED促进破骨细胞形成。展开更多
目的:利用RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术研究人脱落乳牙干细胞(stem cells derived from human exfoliated deciduous teeth,SHED)体外长时期扩增至20代(P20)后基因表达的差异,初步探讨其体外扩增衰老相关的信号通路。方法:从健...目的:利用RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术研究人脱落乳牙干细胞(stem cells derived from human exfoliated deciduous teeth,SHED)体外长时期扩增至20代(P20)后基因表达的差异,初步探讨其体外扩增衰老相关的信号通路。方法:从健康儿童脱落的乳牙中分离牙髓干细胞,在常规条件下将其扩增培养至20代,利用RNA-seq筛选出差异表达的基因,并对其进行相关生物学信息分析,寻找SHED体外连续扩增衰老相关的信号通路。结果:RNA-seq结果显示,SHED第4代(P4)和P20代差异表达的基因共有1884个,其中上调表达的基因有575个,下调表达基因1309个,这些差异表达的基因分布在生物过程(biological progress,BP)、细胞组成(cellular component,CC)和分子功能(molecular function,MF)等生物学过程中。早、晚期代次的SHED差异基因及相关蛋白之间的作用主要富集在剪接体、核糖体、细胞周期、p53通路相关的信号通路上。结论:本研究揭示了SHED体外连续扩增培养至第20代后基因表达谱的改变,为后续进一步研究其细胞体外衰老机制指明了方向。展开更多
文摘目的:研究釉质基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated dediduous teeth,SHED)体外增殖分化能力的影响。方法:利用酶消化法联合组织块法获得脱落乳牙牙髓干细胞,并进行形态学观察。三氯乙酸法制备EMPs,用不同浓度的EMPs对SHED进行诱导,利用四唑盐比色法(MTT)检测并分析诱导后的SHED增殖活性的变化,检测经诱导后的培养液中碱性磷酸酶(ALP)。RTPCR检测牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)及牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP-1)的mRNA表达。结果:人脱落乳牙牙髓干细胞呈集落生长,并且在体外具有一定的自我增殖能力。EMPs对乳牙牙髓干细胞的增殖无明显影响,而能够显著提高ALP的活性,并呈现一定的剂量依赖性。经EMPs诱导后,细胞相对高表达DSPP、DMP-1mRNA。结论:EMPs对于SHED向成牙本质样分化具有积极作用。
