P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒对人膀胱癌细胞T24生长的影响

目的 探讨P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒对人膀胱癌细胞T24增殖及凋亡的作用。方法 将可在真核细胞表达P53蛋白的质粒pCEP4P53和表达反义c-myc基因的质粒pGEP4ASCMHC以染试剂Fu-GENE6为介导,同时转染到入膀胱癌细胞T24中,经MTT检测、软琼脂集落生长、琼脂糖电泳等方法分析实验结果。结果P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒较单一基因质粒能更显著地抑制癌细胞的增长,并能引起癌细胞的凋亡;FuGENE6有助于提高质粒DNA的转染效率。结论 pCEP4P53基因质粒和反义c-myc基因质粒pCEP4AS-CMH的协同作用,大大地促进了肿瘤细胞的凋亡,为人膀胱癌的基因治疗提供了新途径。

VX-680诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响及意义。方法:体外培养T24细胞,分别给予不同浓度及作用时间的VX-680,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学改变;RT-PCR和Western blot检测细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果:Annexin V/PI显示,凋亡率分别随着浓度增高和时间增长而增加,呈浓度及时间依赖性;Hoechst染色发现细胞在处理72 h后,其凋亡增多程度及Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调水平均随浓度增高而增加,呈浓度依赖性。结论:Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调Bcl-2表达显著诱导人膀胱癌T24细胞凋亡,且具有浓度依赖性。

氧化苦参碱通过PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨氧化苦参碱能否通过第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶向基因(Phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten/phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PTEN/PI3K/Akt/mTOR)通路对人膀胱癌T24细胞的增殖、凋亡产生影响。方法:T24细胞复苏传代后与不同剂量氧化苦参碱共培养,MTT法检测不同剂量氧化苦参碱对T24细胞增殖的影响,流式细胞仪检测氧化苦参碱对T24细胞凋亡的影响,Hoechst光镜观察氧化苦参碱对T24细胞核形态的影响,Western blot检测氧化苦参碱对T24细胞PI3K、Akt、mTOR、PTEN蛋白表达的影响。结果:与0μmol/L组比较,氧化苦参碱各剂量组T24细胞的增殖率下降,凋亡率升高,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降,PTEN蛋白表达上升,且在一定范围内存在剂量依赖性(P<0.05)。结论:氧化苦参碱可能通过PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路抑制T24细胞的增殖,促进其凋亡。

丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞Mta-1 mRNA、Mta-1蛋白表达的影响及意义

目的研究人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达,及丝裂霉素C(MMC)对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mat-1蛋白表达的影响。方法人膀胱癌T24细胞株培养,MMC干预,用原位杂交和免疫组化检测Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达。结果人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA阳性细胞表达率MMC组(35.1±9.0)%明显低于对照组组(61.9±12.8)%;Mta-1蛋白阳性细胞表达率MMC组(36.0±8.03)%亦明显低于对照组(57.7±10.1)%,P<0.01。结论人膀胱癌T24细胞株中存在Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的高表达,MMC对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达具有抑制作用。

SEA诱导人膀胱癌T24细胞周期进程及凋亡

目的体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人膀胱癌T24细胞株的增殖抑制作用。方法应用MTT比色法检测不同浓度的SEA对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测T24细胞周期进程的变化,电子显微镜观察T24细胞亚细胞水平改变。结果不同浓度的SEA对T24细胞的增殖抑制率分别为24.2%、34.5%和43.3%,与对照组相比差异显著(P<0.01),且具有明显的剂量依赖性。流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多。电子显微镜下可见T24细胞线粒体肿胀,有空泡形成,可见凋亡小体。结论 SEA能显著抑制T24细胞增殖,抑制T24细胞G1期向S期细胞转化进程,诱导T24细胞凋亡及亚细胞结构改变。

黄芩素联合U0126促进人膀胱癌T24细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨黄芩素联合U0126促进人膀胱癌细胞系T24凋亡的分子机制。方法用黄芩素和U0126处理人膀胱癌T24细胞株,（1）CCK8检测细胞增殖;（2）流式细胞仪检测T24细胞周期的变化;（3）显微镜观察细胞凋亡;（4）流式细胞仪检测早期细胞凋亡和晚期细胞凋亡;（5）Real Time PCR检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平;（6）Western blot检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果黄芩素或U0126浓度越高,T24细胞增殖能力逐渐下降（P〈0.05）;不同浓度的黄芩素刺激人膀胱癌细胞株T24,T24细胞数量随浓度上升而逐渐减少（P〈0.05）;黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株S期的细胞数量显著低于黄芩素、U0126单独处理组（P〈0.05）;黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株早期凋亡和晚期凋亡均显著高于黄芩素、U0126单独处理组（P〈0.05）;黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株ERK1/2、Bcl-2和P38的m RNA表达水平显著低于黄芩素或U0126单独处理组（P〈0.05）;黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞ERK1/2、P38的磷酸化水平以及Bcl-2的蛋白表达量均显著低于黄芩素或U0126单独处理组（P〈0.05）。结论黄芩素和U0126均可显著抑制人膀胱癌细胞增殖,诱导T24早期凋亡和晚期凋亡且具有浓度依赖性,且两者具有协同效应。因此,黄芩素和U0126可用于治疗膀胱癌。

二烯丙基二硫化物对膀胱癌细胞p-ERK表达的影响研究

目的观察大蒜提取物二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK表达的影响,以探讨二烯丙基二硫化物抗膀胱癌的作用,为应用于临床肿瘤的治疗提供部分理论基础。方法用培养的人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因转录的影响;并裂解人膀胱癌T24细胞株提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹检测p-ERK蛋白的表达情况。结果人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后,p-ERK基因表达mRNA的水平明显降低(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05);人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后即可检测出p-ERK蛋白的表达减少(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05)。结论二烯丙基二硫化物可下调人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因的转录与p-ERK蛋白的表达,这可能是二烯丙基二硫化物抗癌的机制之一。

β-胡萝卜素对人膀胱癌T24细胞凋亡和细胞间隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素抑制人膀胱癌T24细胞的分子生物学机制。方法不同浓度的β-胡萝卜素作用于T24细胞,利用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测其凋亡指数,半定量RT-PCR检测Cx43、Bcl-2、Bax mRNA的变化,Western blot检测Cx43、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 10和20μmol/L组β-胡萝卜素均能明显抑制T24细胞的生长和诱导细胞凋亡,其抑制率分别为28.83%、63.02%,并且呈明显的剂量-效应关系(P<0.05),凋亡率分别为0.126±0.022和0.190±0.024(P≤0.01),随β-胡萝卜素浓度增加,细胞凋亡率增大,呈剂量依赖性关系(P=0.002)。与对照组相比,10和20μmol/L组β-胡萝卜素上调Cx43 mRNA及其蛋白的表达,增强细胞间的细胞间隙连接通讯(GJIC)功能(P<0.05),并且呈剂量依赖关系(P≤0.01);下调Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达,并且呈剂量依赖关系(P≤0.01);Bax mRNA及其蛋白的表达有上调趋势,但与对照组比较,差异无显著性。结论β-胡萝卜素(10,20μmol/L)能通过有效下调Bcl-2 mRNA及其蛋白在T24细胞的表达,上调T24细胞Cx43转录水平的表达、增强细胞间隙连接所介导的GJIC功能,从而诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,抑制其生长。

飞燕草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨飞燕草素对人膀胱癌细胞株T24的增殖抑制作用、诱导凋亡作用及其相关的分子机制。方法体外培养T24细胞,利用CCK-8试验检测飞燕草素对人膀胱癌T24细胞的杀伤作用;利用流式细胞术试验检测细胞凋亡情况、活性氧水平变化;利用Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白和信号通路相关蛋白的表达。结果飞燕草素能够有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,IC50为(42.37±2.82)μmol·L^(−1);飞燕草素能够通过线粒体依赖性途径诱导T24细胞发生凋亡,使Cyt-c、cleaved-Caspase-3、PARP和Bax蛋白表达量升高,Bcl-2表达量降低;飞燕草素能够降低T24细胞中的活性氧水平,并激活JNK/STAT3信号通路。结论飞燕草素对人膀胱癌T24细胞具有良好的杀伤作用,并能够通过降低T24细胞内活性氧水平,进而调控JNK/STAT3信号通路来诱导T24细胞发生线粒体依赖性凋亡。

Ad-ING4对人膀胱癌移植瘤的生长抑制作用

目的:探讨Ad-ING4人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制。方法:1Ad空载体腺病毒(Ad-GFP)、Ad-ING4单基因腺病毒(Ad-ING4)分别经QBI-293A细胞感染多轮扩增后获得高效价重组病毒;2将浓度为4×107个/ml的T24膀胱癌细胞悬液在裸鼠右前肢腋下皮下注射,建立T24人膀胱癌裸鼠移植瘤模型;3将15只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(PBS组)、Ad-GFP组、Ad-ING4组,3组均使用瘤体内注射干预用药,隔日1次,共6次。观测瘤体生长情况,测量肿瘤长径和短径,用公式:肿瘤体积=ab2/2(a为长径,b为短径),计算肿瘤体积,治疗3周后将裸鼠脱颈处死,摘瘤称重,用10%甲醛溶液固定标本,石蜡包埋,进行HE染色和免疫组织化学检测,并按Weidner的方法检测微血管密度(MVD)。结果:治疗后Ad-ING4组肿瘤重量为(0.93±0.06)g,分别与PBS组(1.73±0.05)g及Ad-GFP组(1.69±0.06)g相比,差异有统计学意义(P<0.05)。AdING4的抑瘤率达45%。Ad-ING4组肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Bax和caspase-3的表达明显上调,Bcl-2的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子CD34表达下调,MVD降低(P<0.05)。结论:1Ad-ING4可以显著抑制膀胱癌移植瘤生长。2Ad-ING4的抑瘤机制可能和激活细胞凋亡及抑制血管形成有关。

内源性抗生素肽HMGN2抗细菌内化作用及机制初探

目的探讨HMGN2抗细菌内化作用及其机制。方法利用生物学在线软件对人及常见医学模式生物HMGN2进行生物信息学分析;用免疫打点杂交技术检测临床标本HMGN2表达;设置以HMGN2预处理Klebsiella pneumoniae细菌后感染细胞组(简称共孵育组)和HMGN2预刺激细胞后再感染KP组(简称预刺激细胞组),平板菌落计数法检测两种状态下胞内活菌数;用荧光显微镜、流式细胞术观测各组细胞微丝形态和构成变化,用光镜观测HMGN2处理菌及未处理菌细胞骨架表型变化。结果不同属种生物HMGN2具有很高同源性,带阳离子电荷,具有α螺旋结构,分子量小于10kD;在炎性和非炎性标本中均可见HMGN2阳性信号,而在炎性标本中信号强度更大。HMGN2共孵育组和HMGN2预刺激细胞组胞内活细菌数与对照组相比较都明显减少,但共孵育组比预刺激细胞组胞内活菌数减少更为明显;荧光显微镜观察显示,两组微丝均有解聚成颗粒状向核周聚集现象,流式细胞术检测发两组细胞骨架微丝蛋白的平均荧光量减少,而油镜下HMGN2处理菌与未处理菌比较,其菌体长短径无明显的变化。结论 HMGN2属于内源性抗菌肽家族分子,可能通过促进细胞内微丝蛋白解聚成单体,减弱了KP内化入膀胱上皮细胞。