CUG连接蛋白1在膀胱癌中的表达及其对BIU-87细胞株增殖及侵袭能力的影响

目的:探讨CUG连接蛋白1(CUG-binding protein 1,CUGBP1)在膀胱癌组织中的表达及其表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖及迁移能力的影响。方法:采用免疫组化及Western blot检测65例膀胱癌及相应的癌旁正常组织中CUGBP1的表达,并探讨CUGBP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系。同时,采用siR NA特性干扰片段下调CUGBP1在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达,探讨CUGBP1下调对细胞增殖及侵袭能力的影响。结果:免疫组化结果显示CUGBP1在膀胱癌组织中的阳性表达率为58.5%,高于癌旁正常组织(9.2%),差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot结果也显示CUGBP1在膀胱癌组织中的表达高于癌旁正常组织。同时,CUGBP1在膀胱癌组织中的表达与淋巴结转移、TNM分期及分化程度有关(P<0.05)。此外,BIU-87细胞株中CUGBP1表达明显下调后,细胞的增殖及侵袭能力均明显下降(P<0.05)。结论:CUGBP1表达与膀胱癌的形成相关,其表达下调可明显抑制细胞增殖及侵袭。

联合化疗对膀胱癌细胞株BIU-87及其耐药亚株联合抑制作用的体外实验研究

实验采用微量细胞培养噻唑蓝显色法观察阿霉素 (ADM)、足叶乙甙 (VP- 16 )、丝裂霉素 C(MMC)和羟基喜树碱 (HCPT)等药物联合应用于膀胱癌细胞株 BIU- 87及其耐药亚株 BIU- 87/ A、BIU- 87/ V,结果显示 :HCPT与MMC、 ADM联合应用对亲本及耐药细胞株都能取得较好抑制作用。联合用药能增强化疗药物对 BIU- 87细胞的毒性作用 。

光动力作用对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡发生率的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用流式细胞仪检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率。结果 :光动力实验组人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率达 2 6.11± 2 .5 9% ,与对照组相比 ,差异非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用能有效诱导人膀胱癌细胞株BIU -87的凋亡发生。这可能是其抑癌作用机制之一。

坎地沙坦对膀胱癌细胞株BIU-87侵袭力和黏附力的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)拮抗剂坎地沙坦对膀胱癌BIU-87细胞株的侵袭力和黏附力的影响。方法采用免疫组化SABC法检测膀胱癌BIU-87细胞株AT1R的表达,用Transwell法检测细胞侵袭力,用细胞同质黏附实验检测细胞黏附力。结果 AT1R拮抗剂坎地沙坦能降低BIU-87细胞株的侵袭能力和黏附能力。结论 AT1R拮抗剂有可能通过降低肿瘤细胞的侵袭、黏附能力和抑制血管生成而达到抗癌作用,AT1R拮抗剂将来可能会成为一种抗癌治疗的新方法。

光动力作用对人膀胱癌细胞株BIU-87增殖代谢活性的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用MTT法检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87增殖代谢活性。结果 :光动力实验组吸光密度值 (0 .1683± 0 .0 3 3 7)显著低于实验对照组 (0 .5 12 8± 0 .0 3 82、0 .7775± 0 .0 93 2、0 .72 2 3± 0 .0 3 5 5、0 .72 10± 0 .0 3 69) (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用降低了人膀胱癌细胞株BIU -87的增殖代谢活性 ,这可能是其抑癌作用机制之一。

激光激活BPD-MA光动力作用对人膀胱癌细胞株BIU-87DNA合成的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用3H -TdR掺入法检测激光光敏化BPD -MA后人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成。结果 :实验前对照组的CPM值为 482 3 .5± 5 4.2 6,激光激活BPD -MA光动力显著抑制人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成 (12 63 .7± 2 0 6.84VS 482 3 .5± 5 4.2 6,P <0 .0 5 )。而单纯光敏剂BPD -MA和假照射处理对人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA合成无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 :激光激活BPD -MA光动力抑制人膀胱癌细胞株BIU -87细胞DNA的合成可能是其抑癌作用机制之一。

As_2O_3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的 观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法 采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果 As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论 As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 。

白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬影响的实验研究

目的:探讨白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬的影响。方法:分别建立浓度为12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L与100μmol/L的白藜芦醇制备品,并以未加药人膀胱癌BIU-87/ADM细胞作为对照。通过CCK-8法检测对照组及不同浓度梯度白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM增殖的影响,应用RT-PCR法测定白藜芦醇处理前后膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM LC-3和Beclin 1 mRNA的表达水平,并以Wester blot检测白藜芦醇作用后LC-3Ⅱ蛋白的表达水平。结果:加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞24h与48h生长抑制率均明显高于对照组,其48h生长抑制率明显高于24h生长抑制率,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞生长抑制率越高。加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞的细胞凋亡率明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞凋亡率越高。白藜芦醇干预后LC3-Ⅱ与Beclin 1 mRNA表达明显减弱,而白藜芦醇浓度越高其表达减弱程度越明显。结论:白藜芦醇能够明显减少耐药细胞株BIU-87/ADM保护性自噬,抑制膀胱癌耐药细胞增殖,促进耐药细胞凋亡。

苦参碱对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的：研究苦参碱对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：以0（阴性对照）、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml苦参碱分别作用于人膀胱癌BIU-87细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞活性并计算细胞增殖抑制率;以0（阴性对照）、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml苦参碱作用于细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western blot法检测细胞中生存素、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3及Caspase-7蛋白的表达。结果：与阴性对照比较,1.0-4.0 mg/ml苦参碱作用24、48、72 h后均对BIU-87细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）,增殖抑制率呈浓度和时间依赖性升高;作用48 h后,G0/G1期细胞比例升高、S期及G2/M期细胞比例降低、凋亡率升高（P〈0.05或P〈0.01）。0.5-4.0 mg/ml苦参碱作用48 h后,细胞中生存素蛋白表达减弱、Caspase-3及Caspase-7蛋白表达增强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：苦参碱可抑制人膀胱癌BIU-87细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,其机制可能与调控细胞中生存素及Caspase-3、Caspase-7的表达有关。

表阿霉素-羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒协同外磁场对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究表阿霉素-羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒pirubicin-carboxymethlydextranmagneticnanoparticles,EPI-CDMN)的制备及其协同恒定外磁场体外对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用氧化还原法制备EPI-CDMN,并检测其理化性质。采用MTT法、流式细胞术分别观察EPI-CDMN及联合恒定外磁场体外对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡效应的影响,并探讨其机制。结果:EPI-CDMN直径为8～10nm,比饱和磁化强度为0.22emu/g。含相同EPI浓度的EPI-CDMN和单纯EPI对BIU-87细胞的生长抑制率及凋亡率均无显著性差异(P>0.05)。EPI-CDMN和恒定外磁场(10mT)均可以抑制BIU-87细胞增殖、诱导细胞凋亡,且EPI-CDMN协同外磁场对细胞的生长抑制作用和诱导肿瘤细胞凋亡的效应均显著增强(P<0.01)。结论:EPI-CDMN联合恒定外磁场可以有效的杀灭人膀胱癌BIU-87细胞,为肿瘤的磁导向靶向治疗提供了实验基础。

三氧化二砷诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )诱导膀胱癌BIU 87细胞凋亡作用。方法 应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、自动酶标仪、细胞免疫组化法 ,分别对不同浓度加药组及对照组BIU 87细胞的形态学改变 ,细胞的存活及Bcl 2、Bax蛋白的表达进行观察和测定。结果 生长曲线显示 ,18.8μg ml,37.6 μg ml和 94.0 μg mlAs2 O3 均能抑制膀胱癌BIU 87细胞的生长增殖。透射电镜观察 ,膀胱癌细胞表面的突起减少或脱失 ;部分细胞核染色质聚集 ,边移 ;线粒体膜结构模糊不清。细胞免疫组化法测定Bcl 2、Bax蛋白的表达均有变化 ,与对照组细胞相比 ,18.8μg ml,37.6 μg mlAs2 O3 组Bcl 2和Bax蛋白表达率均升高。结论 三氧化二砷不仅抑制膀胱癌BIU 87细胞增殖 ,而且诱导细胞凋亡。

中国人膀胱癌BIU-87细胞导向肽的体外筛选与特异性鉴定

目的:体外差减筛选噬菌体展示环七肽库,获得与中国人膀胱癌BIU-87细胞系高度结合的小分子多肽并鉴定其结合特异性。方法:以中国人膀胱癌BIU-87细胞作为靶细胞,正常人膀胱上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体展示环七肽库进行3轮体外差减筛选。ELISA法鉴定与BIU-87细胞呈强阳性结合的噬菌体克隆,对其编码的DNA进行序列测定和同源性分析。化学合成与BIU-87细胞强阳性结合的肽段并制备成FITC标记的荧光探针,流式细胞术、荧光显微镜下鉴定其与BIU-87细胞、正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞以及人结肠癌HCT116细胞的特异结合能力。结果:经3轮差减筛选将噬菌体展示环七肽库富集了25倍,阳性率达76%。共获得10个强阳性克隆,DNA共有序列为SISSLTH、MARYMSA、TVRTSAD。BIU-87细胞与小分子荧光探针FITC-SISSLTH的结合率为(80.06±8.78)%,显著高于FITC-MARYMSA的(52.93±7.28)%、FITC-TVRTSAD的(38.04±7.47%)、FITC-EDRKETA的(1.91±1.37)%和FITC的(9.85±2.9)%(均P<0.01)。FITC-SISSLTH与BIU-87细胞的结合率显著高于与正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和结肠癌HCT116细胞的结合率[(80.06±8.78)%vs(13.89±1.97)%,(8.13±2.85)%,(27.00±2.87)%,(2.33±1.75)%;均P<0.01]。结论:噬菌体展示环七肽库经3轮体外差减筛选获得高效结合BIU-87细胞的导向肽SISSLTH,具有良好的结合特异性。

热疗对膀胱癌细胞BIU-87/HCPT耐药相关基因的影响

目的观察热疗对耐羟基喜树碱膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法不同温度条件下热疗、化疗、热疗联合化疗处理耐药膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽硫-转移酶π(GST-π)和survivin表达的变化。结果热疗对BIU-87/HCPT细胞具有抑制作用,呈温度依赖性且在43℃时最强。热疗可显著增加羟基喜树碱对BIU-87/HCPT细胞的抑制率,作用呈温度依赖性,热疗明显增加化疗的作用。热疗联合化疗明显减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达并呈温度依赖性。结论热疗可促进膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT凋亡,增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达。

三氧化二砷抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外生长的实验研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3)对人膀胱癌细胞的生长抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :采用 MTT法检测不同浓度的 As2 O3对人膀胱癌细胞株 BIU- 87的生长抑制率 ,原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡 ,SABC免疫组织化分析 BIU- 87细胞中 bcl- 2的表达。结果 :As2 O3可有效地抑制 BIU- 87细胞生长 ,具有时间、浓度依赖性特点 ;经药物作用后 ,膀胱癌凋亡细胞明显增多 ,凋亡率随作用时间的延长而增高 ,BIU- 87细胞中的bcl- 2表达显著降低。结论 :As2 O3可显著抑制膀胱癌细胞生长 ;通过下调 bcl- 2基因表达诱导细胞凋亡是其作用机制之一。

大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究

【目的】探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响。【方法】MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化。【结果】大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5mg/L大蒜素作用5d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高。【结论】诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关。

新建人膀胱癌细胞系BIU-87的染色体分析

新建的人膀胱癌细胞系命名为BIU-87,本文研究其染色体及其G带的变化及临床意义。BIU-87细胞有明显的超4倍体特点,分析100个中期细胞得出染色体众数平均为101条。染色体形态结构与正常细胞相比有很大不同,可检出12个异常的标记染色体。其中最为明显的M_1和M_2标记染色体都与1号染色体有关。这将有助于临床辅助诊断膀胱癌。双小体的存在提示了细胞癌变和癌基因变化之间的关系。

温热与冬凌草液对人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响

目的:探讨温热和冬凌草液对体外培养的人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响。方法:通过对体外培养的BIU-87细胞进行加温(37℃、41.5℃、43.5℃)和冬凌草液(0g/L、0.15g/L、0.3g/L、0.6g/L、1.2g/L、2.4g/L)处理,采用形态学和流式细胞术观察温热和冬凌草液诱导的细胞凋亡效应,采用MTT法检测冬凌草作用后细胞的生长抑制率。结果:冬凌草液对BIU-87细胞具有明显的抑制生长作用。形态学观察到实验组中大量具有凋亡特征的细胞。流式细胞仪定量分析显示,随着冬凌草液浓度的增加和温度的升高,BIU-87细胞凋亡率亦呈升高趋势(P<0.05)。结论:温热和冬凌草液具有协同诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的作用。

三氧化二砷对膀胱癌细胞BIU-87耐药相关基因的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对耐羟基喜树碱的膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT耐药性逆转的机制。方法:用As2O3与羟基喜树碱联合处理BIU-87/HCPT细胞后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、MRP1、GST-π和生存素(survivin)表达的变化。结果:As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87/HCPT细胞后,细胞生长受到明显抑制。单独应用As2O3的凋亡率为11.07%,As2O3联合羟基喜树碱后的凋亡率为18.23%,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,As2O3明显增加羟基喜树碱的作用(P<0.05)。As2O3使P-gp、MRP 1、GST-π和sur-vivin的表达明显减少,且均具有浓度依赖性(P<0.05)。结论:As2 O3可减少耐药相关基因的表达,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,促进凋亡,且呈现浓度依赖性。

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶(PDZ-binding kinase/T-LAK cell-originated protein kinase,PBK/TOPK)在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR及免疫印迹试验检测40例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达,随后,分别干扰及过表达PBK/TOPK在BIU-87细胞中的表达,检测PBK/TOPK表达对细胞增殖及迁移能力的影响。结果实时定量PCR及免疫印迹试验检测结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0. 05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显下降(P<0. 05);而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显增强(P<0. 05)。结论 PBK/TOPK在膀胱癌组织中,其表达有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法:用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素(Survivin)表达的变化。结果:三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论:As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。