乳杆菌代谢产物诱导人舌鳞癌细胞的凋亡作用

目的:考察植物乳杆菌代谢产物对人舌鳞癌细胞系CAL-27细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用。方法:植物乳杆菌23201分别经复原乳清培养基和复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物1(LPM1)和代谢产物2(LPM2);用MTT法检测细胞增殖抑制作用;通过吖啶橙染色法检测凋亡细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞DNA片段。结果:不同浓度LPM1和LPM2分别作用CAL-27细胞24 h,最大抑制率分别达到(44.2±3.3)%和(41±4.1)%;荧光显微镜下观察,凋亡细胞的细胞核不规则,凝聚呈新月形或马蹄形;琼脂糖凝胶电泳显示出典型的"梯"状DNA条带。结论:植物乳杆菌代谢产物可以抑制CAL-27细胞的增殖,呈剂量依赖性关系,并诱导CAL-27细胞凋亡。

重离子诱导人舌鳞癌细胞凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表达的变化

探讨重离子辐照对人舌鳞癌Tb细胞的凋亡及Bax/Bcl-2蛋白表达的影响。采用0、0.5、1.0、2.0、4.0Gy重离子束辐照人舌鳞癌Tb细胞,应用MTT法检测细胞存活,流式细胞技术检测细胞周期变化,Hoechst 33258/PI复染法观察Tb细胞凋亡形态,并采用Western-blot法检测Bax/Bcl-2蛋白表达情况。结果发现,Tb细胞经12C6+离子束辐照后存活率显著下降,呈剂量依赖性的生长抑制;Tb细胞呈现蓝色荧光浓集成团的凋亡形态,且凋亡比例随辐照剂量增加;G2/M期细胞百分数随照射剂量增加而增加(P<0.05)。Western-blot结果显示Bax蛋白表达水平随辐照剂量逐渐上升,但在4Gy组其表达不再增高,Bcl-2蛋白在1.0、2.0、4.0Gy组随剂量增大呈下降趋势。以上结果提示重离子束辐照对Tb细胞有抑制作用,Bax/Bcl-2蛋白表达是重离子治癌的机制之一。

激光共焦显微拉曼光谱技术在人舌鳞癌细胞检测中的应用

目的:采用激光共焦显微拉曼光谱技术对人舌鳞癌细胞CAL-27进行检测,并将其与正常人体口腔黏膜上皮细胞(NHOK)进行对比和分析,从而从分子层面区分CAL-27和NHOK。方法:培养CAL-27和NHOK,并用激光共焦显微拉曼光谱对其进行检测,以及采用主成分分析法和线性判别技术对其进行分析。结果:对比CAL-27和NHOK光谱差谱,发现谱宽于735、959、1 334、1 575 cm-1处,CAL-27的峰值比NHOK强,但在1 033 cm-1处,则相对要弱。结合主成分分析和线性判别技术的灵敏度为96.8%,特异性为90.3%,诊断率为93.5%。受试者操作特性曲线下面积为0.971。结论:采用激光共焦显微拉曼技术可区分CAL-27和NHOK。

不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

重离子束与X射线辐照对人舌鳞癌细胞周期影响的比较

[目的]研究重离子和X射线辐照对人舌鳞癌Tb细胞周期影响的规律。[方法]采用X射线和离子束分别辐照人舌鳞癌Tb细胞,X射线照射剂量为0、2、4、6、8Gy;重离子照射剂量为0、0.5、1、2.0、4.0Gy。PI荧光探针标记,流式细胞仪检测不同剂量组受照后在6h、12h、24h的细胞周期变化。[结果]人舌鳞癌Tb细胞在X射线照射后,2.0Gy组激活G1期检测点,而4.0、6.0、8.0Gy组激活G2期检测点。重离子照射后,Tb细胞G2/M期阻滞明显增加,阻滞程度具有剂量和时间依赖性,并且0.5、1Gy组细胞在12～24h时间点出现"崩溃"现象,细胞阻滞解除;2Gy和4Gy组细胞表现为明显的G2/M阻滞,未出现"崩溃"现象。在2Gy辐照时对细胞G2期阻滞率达到70%,相当于6GyX射线辐照。[结论]重离子和X射线对人舌鳞癌细胞周期影响不同,小剂量重离子束具有较高的生物学效应。

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达的影响。结果三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。

乳杆菌A2代谢产物对人舌鳞癌细胞系Cal-27凋亡的诱导

目的：观察乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2对人口腔舌鳞癌细胞系Cal-27细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：将乳杆菌A2经复原乳清培养基培养制备相应的代谢产物1（LM1）,除去代谢产物中的钙离子得到产物2（LM2）;用MTT法和流式细胞仪检测口腔舌鳞状细胞癌的细胞凋亡的情况;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的变化。结果：乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2作用Cal-27细胞48 h时,最大抑制率分别为（39.9±1.56）%和（30.5±6.85）%;Annexinv-FITC/PI染色法检测LM2（8 mg/mL）培养40、44 h时,细胞早期凋亡率分别为19.93%和21.42%;琼脂糖凝胶电泳LM2（8 mg/mL）培养54 h时,在250~750 bp之间显现出典型的＂梯＂状DNA条带。结论：LM1和LM2能抑制口腔舌鳞癌细胞Cal-27的增殖,呈剂量依赖性关系,LM2能够诱导细胞凋亡。

肝细胞生长因子拮抗剂NK4对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响

目的:研究不同浓度NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响。方法:采用基底膜侵袭实验观察不同浓度NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响。结果:在浓度为10μg/ml时,NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭重组基底膜的抑制率为56.4%。结论:NK4因子具有抑制肿瘤细胞人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭的能力。

中频交变磁场抑制人舌鳞癌细胞的增生

目的探讨不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞(TCa8113)增生的影响。方法不同强度的交变磁场(5mT、8mT、11mT)对人舌鳞癌细胞进行连续3天的辐照刺激,每天1h,通过MTT法和流式细胞术检测细胞的增生、凋亡和细胞周期的变化。对照组(假实验组)采用相同的实验条件和作用时间但不加磁场辐照。结果MTT法检测实验组与对照组辐照后24h、48h、72h的OD值,通过SPSS软件分析显示实验组比对照组的OD值显著降低(P<0.01)。流式细胞术检测电磁场组与对照组细胞凋亡率无差异。但细胞周期有显著改变(0.5mT)。结论不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞增生有明显抑制作用,并可阻滞细胞周期,但对舌鳞癌细胞的凋亡未发现明显影响。

携载姜黄素纳米粒和新吲哚菁绿的透明质酸微针能抑制人舌鳞癌细胞增殖

目的:制备并研究携载药物姜黄素纳米粒和光热触发剂新吲哚菁绿(IR820)的透明质酸微针(以下简称微针)给药系统对人舌鳞癌细胞(Cal-27)的抑制作用。方法:通过模板法分别制备对照微针、姜黄素纳米粒微针、IR820微针、姜黄素纳米粒+IR820微针,并分别进行形貌表征、力学强度测试、体外皮肤刺入试验及体外光热效应测试。将各组微针与Cal-27细胞共培养,其中IR820微针组及姜黄素纳米粒+IR820微针组用808 nm近红外光1 W/cm^(2)照射5 min,并通过活死细胞染色结果对各组细胞存活率进行统计。结果:制备的微针针体形貌均一,具有良好的力学强度及皮肤刺入能力,其中搭载IR820的微针具有较好的光热性能。与各组微针共培养后,Cal-27细胞存活率分别为空白对照组100.00%、对照微针组99.92%、姜黄素纳米粒微针组94.08%、IR820微针组0.41%、姜黄素纳米粒+IR820微针组0.04%。其中,姜黄素纳米粒+IR820微针组对肿瘤细胞杀伤效果最好,IR820微针组次之(均P<0.05)。结论:相比单一的药物治疗,姜黄素纳米粒+IR820微针对Cal-27细胞增殖具有更好的抑制作用。

基于Wnt/β-catenin通路探讨五味子素B对人舌鳞癌细胞化疗敏感性的作用

目的:探讨五味子素B对人舌鳞癌细胞纳武单抗化疗敏感性的作用及对分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:将对数生长期的人舌鳞癌SCC15细胞随机分为对照组、纳武单抗组、纳武单抗+五味子素B组、纳武单抗+激动剂组、纳武单抗+激动剂+五味子素B组。各组细胞给予相应药物处理后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测划痕愈合面积百分比,Transwell实验检测侵袭细胞数,蛋白印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、原癌基因(c-myc)、β-catenin蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,纳武单抗组细胞存活率降低,划痕愈合面积百分比减小,侵袭细胞数减少,cyclin D1、c-myc、β-catenin蛋白相对表达量降低(P<0.05);与纳武单抗组比较,纳武单抗+五味子素B组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,划痕愈合面积百分比减小,侵袭细胞数减少,cyclin D1、c-myc、β-catenin蛋白相对表达量降低(P<0.05),而纳武单抗+激动剂组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,划痕愈合面积百分比增加,侵袭细胞数增多,cyclin D1、c-myc、β-catenin蛋白相对表达量升高(P<0.05);与纳武单抗+五味子素B组比较,纳武单抗+激动剂+五味子素B组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,划痕愈合面积百分比增加,侵袭细胞数增多,cyclin D1、c-myc、β-catenin蛋白相对表达量升高(P<0.05);与纳武单抗+激动剂组比较,纳武单抗+激动剂+五味子素B组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,划痕愈合面积百分比减小,侵袭细胞数减少,cyclin D1、c-myc、β-catenin蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:五味子素B能增强舌鳞癌细胞纳武单抗化疗敏感性,其可能机制是抑制Wnt/β-catenin信号通路。

125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对人舌鳞癌细胞的抑制作用

近距离放疗具有在局部的高剂量及边缘剂量的迅速衰减优势.鉴于头颈部复杂的解剖结构和重要的生理功能,在控制原发肿瘤的同时要尽量保留器官的生理功能,放射粒子植入近距离放疗则不失为一个理想的选择.持续低剂量照射在治疗头颈部鳞癌方面已经积累了很多的经验[1].近距离放疗不但能提高肿瘤局部的照射剂量,而且本实验还证明了在相同的照射剂量下,对于舌鳞癌Tca8113细胞,125Ⅰ粒子持续低剂量率照射比单次高剂量率照射、分次高剂量率照射具有更强的抗肿瘤效应.

VEGF-C在人舌鳞癌细胞株TCa8113的表达及过表达细胞株的建立

目的 研究VEGF -C在人舌癌发生发展中的作用 ,检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌鳞癌细胞株TCa8113中的表达 ,建立高表达VEGF -C的细胞株TCa8113 /VEGF -C。方法 运用RT -PCR和免疫组化法分别检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌癌细胞株中的表达 ,通过脂质体转基因的方法筛选建立过表达VEGF-C的细胞株。结果 TCa8113中检测到VEGF -C的表达 ,筛选建立的细胞株高表达VEGF -C。结论 TCa8113能转录VEGF -CmRNA ,并在胞浆中翻译表达VEGF -C蛋白 ,但是表达较弱 ;

三苯氧胺对人舌鳞癌细胞Tca8113的增殖抑制作用研究

目的:探讨三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)对人舌鳞癌细胞系Tca8113的增殖抑制作用。方法:不同浓度TAM处理体外培养的人舌鳞癌细胞Tca8113,MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果:在浓度为1、2、5、10μmol/L时,TAM呈现出剂量依赖性抑制人舌鳞癌细胞Tca8113的增殖作用。通过对三个不同浓度(2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)TAM实验组的抑制率进行比较,差异有统计学意义(P<0.05),细胞抑制率与药物浓度呈正相关。细胞超微结构显示,药物浓度与细胞结构呈剂量依赖关系。结论:TAM可显著抑制人舌鳞癌细胞Tca8113的增殖,其作用呈剂量依赖关系。

舌鳞癌细胞中肿瘤特异性MAGE-A3基因的克隆

目的从人舌鳞癌细胞株Tca8113中扩增出编码MAGE-A3全长抗原蛋白的基因序列，并对其进行测序及鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从人舌鳞癌细胞株Tca8113中获取MAGE-A3蛋白编码基因，通过TA克隆后的酶切鉴定以及基因测序鉴定MAGE-A3的正确性。结果（1）RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果示，GeneRuler 100bp DNA Ladder的1031bp和900bp之间出现一条明显的目的条带，大小与附加了酶切位点的MAGE-A3目的片段大小相符。（2）双酶切可见大小约3000bp和1000bp的目的条带；单酶切可见大小约4000bp的目的条带，结果与预期相符。（3）经DNA SIS MAX分析软件比对分析，测序结果与Pubmed基因库中查询获得的人MAGE-A3序列一致，MAGE-A3提取成功。结论MAGE-A3的成功提取为进一步研究MAGE-A3抗原蛋白的表达及表达产物诱导特异性抗肿瘤免疫应答提供了实验基础，为抗肿瘤疫苗的研究提供了实验依据。

热疗联合紫杉醇对人舌鳞癌细胞系CAL-27增殖、凋亡和周期影响

目的观察热疗联合紫杉醇对人舌鳞癌细胞系CAL-27增殖、凋亡和周期的影响并探讨其机制。方法CCK-8法确定紫杉醇工作浓度,将体外培养CAL-27细胞分为对照组、紫杉醇组、42℃热疗组和联合治疗组。克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白印迹法检测AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果紫杉醇组、热疗组及联合治疗组相比对照组均可抑制细胞增殖及促进凋亡(P<0.05),且联合治疗组优于热疗组、紫杉醇组(P<0.05)。蛋白印迹法实验结果显示联合治疗组上调Bax蛋白表达水平,同时下调P-AKT、Bcl-2表达(P<0.05)。结论42℃热疗与紫杉醇联合应用可抑制CAL-27细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与抑制AKT活化及激活Bax/Bcl-2凋亡通路有关。

Stat3抑制剂Stattic抑制人舌鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:观察Stat3小分子抑制剂Stattic对人舌鳞癌细胞的增殖抑制作用。方法:用不同浓度Stattic处理人舌鳞癌细胞SCC-4与SCC-25,采用CCK-8试剂盒检测Stattic对两株细胞增殖的影响。采用Western Blot方法检测Stat3 Ser727,Stat3 Tyr705磷酸化水平以及Rictor蛋白表达水平;凋亡调控分子Bcl-2,Mcl-1,Bax,Survivin表达水平。结果:Stattic呈浓度依赖性抑制人舌鳞癌细胞的增殖(P<0.05),经Stattic干预的人舌鳞癌细胞中Stat3 Ser727、Stat3 Tyr705磷酸化水平降低,Rictor表达降低。Stattic诱导人舌鳞癌细胞Caspase3和PARP剪切体表达上调,诱导抗凋亡蛋白Survivin表达降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1表达水平无明显变化,促凋亡蛋白Bax表达水平无明显变化。结论:Stattic对人舌鳞癌细胞增殖的抑制作用,可能与降低Stat3 Ser727和Stat3 Tyr705磷酸化水平、降低Rictor及Survivin蛋白表达有关。

干扰PTP4A1表达对人舌鳞癌细胞CAL27的影响

目的:探讨PTP4A1基因干扰对人舌鳞癌CAL27细胞增殖、凋亡及体外迁移的影响。方法:采用PTP4A1干扰慢病毒转染人舌鳞癌CAL27细胞,实时定量PCR和Western blotting验证PTP4A1干扰效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:PTP4A1干扰慢病毒转染后,干扰组中CAL27细胞PTP4A1基因mRNA和蛋白表达均明显减少。与对照组比较,PTP4A1干扰后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);PTP4A1干扰后CAL27细胞凋亡率相比对照组显著增大(P<0.05),PTP4A1干扰促进CAL27细胞凋亡与上调caspase-3、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。结论:PTP4A1基因干扰可抑制人舌鳞癌CAL27细胞增殖活性和体外迁移能力,且促进舌鳞癌细胞凋亡。

牡蛎活性肽对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨牡蛎活性肽BPO G50-Ⅱ对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度BPOG50-Ⅱ作用于体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,作用24、48、72 h时计数拒染活细胞数,计算生长抑制率(IR)和IC50。采用光镜、电镜观察48 h后细胞形态及超微结构变化;荧光染色法观察BPO G50-Ⅱ作用后的凋亡情况。结果BPO G50-Ⅱ作用后IR明显降低,呈剂量与时间依赖性;24、48、72 h的IC50分别为1.50、0.57、0.20 g/L;电镜观察细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下见细胞出现凋亡改变。结论牡蛎活性肽对人舌鳞癌细胞株Tca8113体外增殖具有抑制作用,可引起细胞形态学改变并能诱导其发生凋亡。