miR-21靶向PDCD4对舌鳞癌细胞上皮间质转化及侵袭能力的影响

目的:探究微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)对舌鳞癌细胞(tonguel squamous cell carcinoma,TSCC)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测人口腔上皮细胞(human oral epithelial cell,HOEC)与舌鳞癌细胞系CAL-27中miR-21和PDCD4的表达水平。将miR-21 inhibitor阴性对照(NC inhibitor)、miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor)转染至CAL-27细胞中,qRT-PCR实验检测miR-21的表达水平;采用CCK-8实验检测细胞增殖情况;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用免疫印迹法(Western blot)和qRT-PCR实验评估PDCD4、EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)在蛋白和mRNA水平的表达情况。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PDCD4的靶向关系。结果:CAL-27细胞中miR-21的表达明显高于HOEC细胞(P<0.001),而PDCD4表达低于HOEC细胞(P<0.001)。与对照组相比,抑制miR-21后miR-21的表达水平明显降低(P<0.001),并能显著抑制细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05);抑制miR-21能上调CAL-27细胞中PDCD4(P<0.05)和E-cadherin(P<0.05)的表达,而下调N-cadherin(P<0.05)、Vimentin(P<0.01)、MMP-2(P<0.01)、MMP-9(P<0.01)蛋白和mRNA水平。双荧光素酶报告基因实验证明miR-21与PDCD4的靶向关系。结论:抑制舌鳞癌细胞中miR-21的表达能抑制其增殖、侵袭和上皮间充质转化,这可能与靶向激活和促进PDCD4的表达有关。

野黄芩苷对人舌鳞癌细胞的增殖抑制和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨野黄芩苷对人舌鳞癌细胞的增殖抑制作用及Bcl-2蛋白表达的影响。方法:用不同浓度的野黄芩苷处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,用MTT法检测细胞增殖情况,Western-blot法检测Bcl-2蛋白表达情况。结果:野黄芩苷对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定的时间和浓度范围内呈时间、浓度依赖性。Westerm-blot结果显示Bcl-2蛋白表达水平随野黄芩苷浓度的增大而逐渐下降。结论:野黄芩苷对人舌鳞癌细胞增殖具有明显的抑制作用,下调Bcl-2蛋白表达可能是野黄芩苷治癌的机制之一。

不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

乳杆菌代谢产物诱导人舌鳞癌细胞的凋亡作用

目的:考察植物乳杆菌代谢产物对人舌鳞癌细胞系CAL-27细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用。方法:植物乳杆菌23201分别经复原乳清培养基和复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物1(LPM1)和代谢产物2(LPM2);用MTT法检测细胞增殖抑制作用;通过吖啶橙染色法检测凋亡细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞DNA片段。结果:不同浓度LPM1和LPM2分别作用CAL-27细胞24 h,最大抑制率分别达到(44.2±3.3)%和(41±4.1)%;荧光显微镜下观察,凋亡细胞的细胞核不规则,凝聚呈新月形或马蹄形;琼脂糖凝胶电泳显示出典型的"梯"状DNA条带。结论:植物乳杆菌代谢产物可以抑制CAL-27细胞的增殖,呈剂量依赖性关系,并诱导CAL-27细胞凋亡。

FasL反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

目的探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞。荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ASO在转染后不同时间对Tca8113细胞增殖的影响;FCM测定转染前后诱导Tca8113细胞的凋亡情况。结果通过荧光倒置显微镜观察及FCM检测发现在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO的浓度越高,转染效率越高。MTT结果显示ASO对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05)。结论 FasL ASO对Tca8113细胞的增殖有一定的抑制作用,能够促进其凋亡,因此FasL ASO有望成为舌鳞癌的潜在的基因治疗方法。

上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的构建上皮膜蛋白1(EMP1)基因真核表达载体p EGFP-N1-EMP1,探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应(PCR)扩增EMP1基因,双酶切法连接至真核表达载体p EGFP-N1双酶切产物大片段,构建p EGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导法将p EGFP-N1-EMP1重组质粒和p EGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞,荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功克隆EMP1全长基因,经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体p EGFP-N1,转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示,p EGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组,Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于p EGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示,EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论成功构建了EMP1真核表达载体,并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。

三氧化二砷对舌鳞癌细胞凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)的作用,并初步探讨三氧化二砷的作用机制。方法以舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)、Annexin V/碘化丙锭(PI)染色法检测细胞生长抑制率和细胞凋亡率;采用Western blot检测细胞hTERT蛋白的表达;采用RT_PCR法检测细胞hTERT mRNA的表达情况。结果As2O3能够明显抑制Tca8113细胞增殖,诱导细胞凋亡,并有浓度、时间依赖性。5μmol/L As2O3组72 h细胞生长抑制率为83.40%±7.31%,细胞凋亡率为26.40%±3.42%。As2O3能抑制hTERT mRNA的表达和翻译,随As2O3作用时间、浓度增加,细胞hTERT mRNA和蛋白表达减弱,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论As2O3可以明显抑制Tca8113细胞增殖,诱导舌癌细胞凋亡,并抑制端粒酶催化亚基基因的表达,诱导细胞凋亡和抑制hTERT转录和翻译可能是其作用机制之一。

重离子诱导人舌鳞癌细胞凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表达的变化

探讨重离子辐照对人舌鳞癌Tb细胞的凋亡及Bax/Bcl-2蛋白表达的影响。采用0、0.5、1.0、2.0、4.0Gy重离子束辐照人舌鳞癌Tb细胞,应用MTT法检测细胞存活,流式细胞技术检测细胞周期变化,Hoechst 33258/PI复染法观察Tb细胞凋亡形态,并采用Western-blot法检测Bax/Bcl-2蛋白表达情况。结果发现,Tb细胞经12C6+离子束辐照后存活率显著下降,呈剂量依赖性的生长抑制;Tb细胞呈现蓝色荧光浓集成团的凋亡形态,且凋亡比例随辐照剂量增加;G2/M期细胞百分数随照射剂量增加而增加(P<0.05)。Western-blot结果显示Bax蛋白表达水平随辐照剂量逐渐上升,但在4Gy组其表达不再增高,Bcl-2蛋白在1.0、2.0、4.0Gy组随剂量增大呈下降趋势。以上结果提示重离子束辐照对Tb细胞有抑制作用,Bax/Bcl-2蛋白表达是重离子治癌的机制之一。

X线对舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度影响的动态观察

【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h至3h间,不同照射剂量的细胞RTL值均有一定程度上升;5h时,除2Gy组外,其它各照射剂量组的RTL值均下降。【结论】经X线照射后,Tca8113细胞端粒明显缩短。端粒缩短可能是放射损伤的机制之一。

EGF和TGF-α对舌鳞癌细胞周期调控的信号通路研究

目的:研究EGF和TGF-α调控舌鳞癌细胞周期分布的信号通路。方法:不同浓度EGF和TGF-α作用体外培养的舌鳞癌细胞株TCA-8113,流式细胞仪检测细胞周期分布,细胞免疫组化法研究p38-MAP kinase、c-myc、c-fos和NF-κB在舌鳞癌细胞中的表达水平。结果:EGF和TGF-α效应类似,与对照组相比,G1/G0期细胞比例下降,S期细胞比例增加,p38-MAP kinase、c-myc和c-fos表达水平下调,NF-κBp65表达水平上调,但量效关系不同。EGF和TGF-α分别上调和下调NF-κBp50表达。结论:EGF和TGF-α对舌鳞癌细胞周期分布的影响差异与NF-κB相关,NF-κB可能与舌鳞癌发生关系密切。

激光共焦显微拉曼光谱技术在人舌鳞癌细胞检测中的应用

目的:采用激光共焦显微拉曼光谱技术对人舌鳞癌细胞CAL-27进行检测,并将其与正常人体口腔黏膜上皮细胞(NHOK)进行对比和分析,从而从分子层面区分CAL-27和NHOK。方法:培养CAL-27和NHOK,并用激光共焦显微拉曼光谱对其进行检测,以及采用主成分分析法和线性判别技术对其进行分析。结果:对比CAL-27和NHOK光谱差谱,发现谱宽于735、959、1 334、1 575 cm-1处,CAL-27的峰值比NHOK强,但在1 033 cm-1处,则相对要弱。结合主成分分析和线性判别技术的灵敏度为96.8%,特异性为90.3%,诊断率为93.5%。受试者操作特性曲线下面积为0.971。结论:采用激光共焦显微拉曼技术可区分CAL-27和NHOK。

威灵仙多糖对舌鳞癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113的体外生长抑制作用。方法:提取分离纯化威灵仙多糖,用噻唑蓝(MTT)法测定在不同浓度威灵仙多糖作用下人舌鳞癌细胞Tca-8113的活力,观察药物对癌细胞的生长抑制作用。结果:威灵仙多糖对Tca-8113的生长具有明显的抑制作用,随着威灵仙多糖浓度的增大或作用时间延长,抑制作用逐渐增强,呈一定的剂量和时间依赖关系。结论:在体外实验中,威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113具有明显的杀伤和抑制作用,可进一步研究其作为抗肿瘤药物应用于临床的潜力。

FAK基因沉默对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖与迁移能力的影响

目的探讨运用RNA干扰技术沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖与迁移能力的影响。方法使用si RNA干扰技术瞬时转染构建FAK si RNA。将实验细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。运用q PCR和Western blotting法检测FAK m RNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞的增殖情况,Transwell小室法研究细胞的迁移能力。结果 q PCR和Western blotting实验结果显示,实验组细胞FAK m RNA和蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组(Pm RNA<0.01,P蛋白<0.05);MTT实验结果显示在48和72 h时,空白对照组和阴性对照组的吸光度值均明显高于实验组(P<0.01);Transwell实验结果显示实验组穿膜迁移细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可有效抑制人舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和迁移能力。

中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。

重离子束与X射线辐照对人舌鳞癌细胞周期影响的比较

[目的]研究重离子和X射线辐照对人舌鳞癌Tb细胞周期影响的规律。[方法]采用X射线和离子束分别辐照人舌鳞癌Tb细胞,X射线照射剂量为0、2、4、6、8Gy;重离子照射剂量为0、0.5、1、2.0、4.0Gy。PI荧光探针标记,流式细胞仪检测不同剂量组受照后在6h、12h、24h的细胞周期变化。[结果]人舌鳞癌Tb细胞在X射线照射后,2.0Gy组激活G1期检测点,而4.0、6.0、8.0Gy组激活G2期检测点。重离子照射后,Tb细胞G2/M期阻滞明显增加,阻滞程度具有剂量和时间依赖性,并且0.5、1Gy组细胞在12～24h时间点出现"崩溃"现象,细胞阻滞解除;2Gy和4Gy组细胞表现为明显的G2/M阻滞,未出现"崩溃"现象。在2Gy辐照时对细胞G2期阻滞率达到70%,相当于6GyX射线辐照。[结论]重离子和X射线对人舌鳞癌细胞周期影响不同,小剂量重离子束具有较高的生物学效应。

X线对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞周期的影响

目的:探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞周期变化的影响。方法:采用流式细胞仪检测不同剂量X线照射后不同时间点的细胞周期变化。结果:人舌鳞癌细胞系Tca8113与未照射细胞相比,经X线处理后,S期减少,G2/M期阻滞程度具有剂量和依赖性,G2/M期阻滞在12 h与24 h时与照射剂量呈正相关。在12 h或24 h达到阻滞高峰后,48 h的结果显示最大峰值回落。结论:人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞X线照射后存活后代生长延缓,放射敏感性增高,呈S细胞减少和G2期阻滞。

过表达miR-218对舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9的增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-218在舌鳞癌细胞中的表达,以及对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:在人舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9中分别转染negative control、miR-218模拟物和抑制剂,然后利用MTT法检测细胞增殖活性;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;通过Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用GraphPad 7.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,转染miR-218抑制剂的SCC-4和SCC-9细胞,细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力无显著改变;而转染miR-218模拟物的细胞,增殖能力变弱,凋亡数增加,侵袭能力显著降低。结论:miR-218在口腔癌中的表达量和细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力相关,提示miR-218与口腔癌的发生、发展有一定关系。

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达的影响。结果三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。

TET对舌鳞癌细胞SCC9生长、运动和裸鼠体内成瘤的影响及机制研究

目的探究汉防己甲素(TET)对舌鳞癌细胞SCC9生长、运动和裸鼠体内成瘤的影响及机制。方法体外培养人舌鳞癌细胞SCC9,分为空白对照组、低剂量TET组(TET 2.5μmol/L)、中剂量TET组(TET 5μmol/L)、高剂量TET组(TET 10μmol/L),分别使用对应剂量的TET预处理。使用克隆形成实验检测细胞生长;使用流式细胞术检测细胞凋亡情况;使用Transwell检测细胞侵袭情况;使用Western blot检测Ki67、CaspasE-3、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。选取裸鼠60只,采用0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物自然饮水喂养36周诱发建立舌鳞癌动物模型,分别使用低剂量TET 12.5 mg/(kg·d)、中剂量TET 25 mg/(kg·d)和高剂量TET 50 mg/(kg·d)灌胃处理,29 d后检测瘤子重量,免疫组化染色检测舌鳞癌组织Ki67、Caspase-3和VEGF的表达。结果与空白对照组比较,使用TET处理后舌鳞癌细胞克隆形成率、单位面积内侵袭细胞数目,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达降低,且高剂量TET组低于中剂量TET组,中剂量TET组低于低剂量TET组;与空白对照组比较,其他各组PI3K、AKT及mTOR蛋白表达水平差异无统计学意义;与空白对照组比较,使用TET处理后Caspase-3蛋白表达水平升高,且高剂量TET组高于中剂量TET组,中剂量TET组高于低剂量TET组。小鼠体内实验可以看出,与空白对照组相比,使用TET灌胃处理的裸鼠肿瘤质量、Ki67蛋白表达水平及阳性率、VEGF蛋白表达水平及阳性率降低(P<0.05),且灌胃浓度越高上述指标越低;与空白对照组比较,使用TET灌胃处理的裸鼠Caspase-3蛋白表达水平及阳性率升高(P<0.05),且灌胃浓度越高上述指标越高。结论 TET可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制舌鳞癌细胞的生长、运动,促进舌鳞癌细胞的凋亡,在一定浓度范围内呈浓度依赖性。

白花蛇舌草注射液对食管癌细胞放疗增敏的作用及机制探讨

目的探讨白花蛇舌草注射液(HDI)对食管癌ECA-109和TE-10细胞放疗增敏的作用及其机制。方法采用CCK-8法检测ECA-109和TE-10细胞经不同浓度HDI处理24 h和48 h后的存活率。采用克隆形成实验评估HCI对ECA-109和TE-10细胞克隆形成能力的影响。将ECA-109和TE-10细胞分为不同组别,检测细胞凋亡及MAPK通路相关蛋白表达的变化。结果HDI可时间剂量依赖性地抑制ECA-109和TE-10细胞的存活率,ECA-109细胞和TE-10细胞的24 h半数抑制最大浓度(IC_(50))分别为66.56 ml/L和56.52 ml/L。HDI抑制ECA-109和TE-10细胞的克隆形成,并呈现剂量依赖关系。与单纯射线处理相比,HDI联合射线处理后ECA-109细胞和TE-10细胞的凋亡率显著增加(P<0.05),并具有剂量依赖性。与单纯射线或HDI处理相比,HDI联合放射处理后细胞中ERK、JNK、P38蛋白表达及其磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论HDI能有效提高食管癌细胞的放疗敏感性,这可能与降低MAPK通路中相关蛋白ERK、JNK、P38的磷酸化水平有关。