人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.

姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖抑制机制的研究

目的探讨姜黄素（curcumin）对人舌癌Tca8113细胞株体外增殖及凋亡的调控作用。方法选用人舌鳞癌Tca8113细胞系进行体外培养，以5—40μmol／L的姜黄素分别处理Tca8113细胞24～72h后，倒置显微镜观察细胞形态，MTT法检测细胞增殖，SABC免疫组化海检测细胞内核增殖抗原ki-67、癌基因蛋白P-21、细胞凋亡相关基因蛋白Bax表达水平。结果eurcumin对Tca8113细胞增殖有抑制作用，并随药物浓度升高和时间延长而增强，倒置显微镜观察可见细胞发生凋亡形态学改变的程度和浓度与时间呈正相关，免疫组织化学检测到核增殖抗原ki-67、P-21表达均下调，Bax表达增强。结论姜黄素对Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用，并与浓度、时间有量效关系。通过上调凋亡基因蛋白Bax，下调ki-67、P-21蛋白的表达，诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的:恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关。本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellularavianmyelocytomavirus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法:脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT-PCR检测转染前后fas(fattyacidsynthase)表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染后fasmRNA表达上调。正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加。结论:低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fasmRNA表达有关。

细胞外基质对舌鳞癌Tca8113细胞黏附性及迁移性的影响

目的 :观察细胞外基质成分在体外对舌鳞癌Tca8113细胞黏附和迁移的影响。方法 :运用细胞黏附实验和细胞迁移实验进行观察。结果 :显示随着纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原浓度升高 ,Tca8113细胞在相应的基质上黏附及迁移能力有所升高 ,低浓度时增强幅度更大 ,I、III型胶原在低浓度 ( <5mg/L)时表现为轻微促进黏附作用 ,高浓度时 ( >5mg/L)抑制黏附和迁移且随着浓度加大抑制作用更明显。结论 :纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原可通过诱导肿瘤细胞黏附和迁移 ,从而促进肿瘤细胞浸润和转移 ;而I、III型胶原则相反 ,可抑制肿瘤细胞的浸润和转移。

NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察NOD2基因对舌鳞癌Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建NOD2表达载体(NOD2-pEZ-M29)和NOD2-shRNA表达载体,分别转染舌鳞癌Tca8113细胞48 h后,RT-PCR和Western blot法检测NOD2和HBD-2分子及蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡比例。结果:转染NOD2表达载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著增高,细胞增殖速度较对照组慢,凋亡较对照组高;转染NOD2-shRNA载体的Tca8113细胞NOD2和HBD-2表达较对照组显著降低,细胞增殖速度较对照组快,凋亡较对照组低。结论:NOD2可促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制其增殖。在舌鳞癌细胞中,NOD2与HBD-2的表达呈正相关。

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。

脂质体介导hES基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞及其蛋白表达

目的 建立转人内皮抑素 (hES)基因舌鳞癌Tca8113细胞 ,检测体外培养的转基因细胞基因蛋白表达。方法 为了建立携带hES基因的舌鳞癌Tca8113细胞克隆 ,选用阳离子脂质体Lipofectamin为载体 ,将含hES基因的质粒———pBLAST_hES转染Tca8113细胞 ,以BlasticidinS抗生素筛选阳性克隆。免疫组织化学S_P方法检测体外培养的转基因Tca8113细胞克隆中ES的表达。结果 经BlasticidinS抗生素筛选 ,转染hES基因的Tca8113细胞由于具有bsr抗性基因 ,可以在含有 5 0 μg mlBlasticidinS的培养基中生长和传代 ,从而得到携带hES基因的Tca8113细胞克隆。该细胞在体外培养传代 96h后 ,经免疫组织化学检测 ,hES表达的强阳性 (+++)率为 10 0 %。结论 以脂质体介导hES基因转染Tca8113细胞效率高 ,转基因细胞具有高效表达活性目的基因产物的能力。

Bcl-2与HER-2反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

目的探讨Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸(ASODN)联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的干预作用及其分子机制。方法实验分成正常对照组、Bcl-2正义干预组、HER-2正义干预组、Bcl-2反义干预组、HER-2 反义干预组、Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合干预组,共6组。脂质体转染后不同时间分别进行电镜观察、 RT-PCR检测,以观察不同条件处理后各组细胞的凋亡、Bcl-2与HER-2基因表达有无差别。结果 Bcl-2与HER-2 基因反义寡核苷酸联合干预组,转染后出现凋亡小体和各期凋亡细胞;Bcl-2基因表达下降36％,HER-2基因表达下降51％。联合转染作用优于单反义基因转染作用。结论 Bcl-2与HER-2基因反义寡核苷酸联合转染能够促进肿瘤细胞凋亡并下调Bcl-2与HER-2基因的表达。

基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库

目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞;用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%;分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D(260)/D(280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均匀分布在200～700 bp,无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。

无血清悬浮培养舌鳞癌Tca8113细胞系及肿瘤干细胞样亚群筛选

目的:比较有血清培养基(Serum-supplemented medium,SSM)培养的细胞中和无血清培养基(Serum-free medium,SFM)培养的肿瘤干细胞球体中肿瘤干细胞样亚群的比例,以期获得较好富集肿瘤干细胞的方法。方法:SFM培养细胞,观察形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态;更换培养基为SSM诱导其分化;流式细胞仪检测SSM组细胞和SFM培养的肿瘤干细胞球分化前、后醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)的表达。结果:Tca8113细胞能在SFM中存活、增殖并形成肿瘤干细胞球;SFM和SSM培养的细胞中ALDHhigh细胞比例分别为0.297 0±0.009 0和0.010 7±0.002 5,差异有统计学意义(P<0.05);诱导分化后细胞与SSM组细胞形态上无明显差异。结论:用SFM培养舌鳞癌Tca8113细胞可形成肿瘤干细胞球,而且这种细胞球富集了肿瘤干细胞。

竹红菌乙素光动力对人舌鳞癌Tca8113细胞杀伤作用的初步研究

目的:本文是用实验的方法,初步探讨中药光敏剂竹红菌乙素(HB)在光动力(PDT)作用下,对体外人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法:常规培养、选取对数生长期人舌鳞癌Tca8113细胞,用含有竹红菌乙素(HB)浓度分别为0μM、0.25μM、0.5μ/M、1μM、2μM的RPMI-1640培养液孵育细胞4h后,经470nmLED定制多光源半导体激光光照处理(PDT),能量密度设置分别为0J/CM2、1J/CM2、2J/CM2、3J/CM2、4J/CM2。PDT处理后细胞继续孵育24h后,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,并用甲基噻唑四唑法(MTT法)检测竹红菌乙素(HB)对细胞的抑制作用。并分别在激光照射6h及24h后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:经PDT处理后细胞在光学显微镜及荧光显微镜下均可观察到细胞坏死和凋亡样改变;在一定浓度范围和光照能量密度范围内,竹红菌乙素(HB)在PDT作用下对人舌鳞癌Tca8113细胞生长增殖的抑制和诱导凋亡作用与药物浓度和能量密度成正相关变化。结论:竹红菌乙素(HB)在光动力(PDT)作用下,对人舌鳞癌Tca8113细胞具有显著的杀伤作用,并在一定范围内呈浓度剂量和光剂量正相关依赖性。

尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E_2释放和生存素表达的影响

大量研究已表明，环氧化酶-2（cyclooxygenase 2，COX-2）在大多数正常组织中不表达，而在大多数人类肿瘤中过表达，与多种肿瘤的发生发展密切相关。本实验通过研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利（Nimesulide，NIM）与人舌鳞癌Tca8113细胞前列腺素E2（PGE2）和生存素（survivin）表达间的关系，探讨NIM对人舌鳞癌细胞生物学行为影响的可能机制，为Nimesulide临床应用提供必要的理论依据。

JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

目的探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据。方法采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验。结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用最为显著,细胞生长抑制率达到60.45%。同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85%,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93%(P<0.01)。结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达。

以量子点为载体转染Survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞中的实时观察

目的通过量子点(quantum dot,QD)为载体将靶向Survivin基因的siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,并通过激光共聚焦显微镜实时观察转染过程,以期在肿瘤治疗的同时对其进行实时影像学观察。方法表面带正电荷的水溶性量子点,通过正负电荷的吸引力与表面带负电荷的Survivin siRNA以1∶2比例结合成QDsiRNA复合物。QD-siRNA复合物通过内吞作用进入人舌鳞癌Tca8113细胞,用激光共聚焦显微镜对QD-siRNA复合物转染至细胞中的过程和分布情况进行实时动态观察。结果激光共聚焦显微镜观察显示QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD-siRNA复合物加入培养皿15 min后开始吸附至细胞膜上,并慢慢穿透胞膜到达胞浆,直至6 h可见QD-siRNA复合物充分进入细胞,QD主要分布在细胞质中,而siRNA在细胞质和细胞核中均有分布。来自QD的红色荧光强度大于来自siRNAFAM的绿色荧光。结论激光共聚焦显微镜观察QD成功将Survivin siRNA转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,QD相对于羧基荧光素更适于进行细胞动态观察。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和Fas L表达的影响。方法:体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组,野黄芩苷组分别用80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h。采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响。结果:用药组Tca8113细胞Fas和FasL的表达水平明显高于对照组(P<0.05);并且随着野黄芩苷药物浓度的增加,Fas和FasL的表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论:野黄芩苷可能通过促进人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白和FasL蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡。

DNL结合放射对人舌鳞癌细胞系Tca8113抗瘤效应的初步研究

ＤＮＬ结合放射对人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３抗瘤效应的初步研究蔡以理，何荣根，邱蔚六，王中和，周晓健，席艳霏上海第二医科大学附属第九人民医院（上海２０００１１）体内外实验及临床试验都证明经含ＩＬ－２培养扩增的引流区淋巴结淋巴细胞（ＤＮＬ）具有与肿瘤浸...

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的 观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法 脂质体介导真核表达载体PBBS2 12 -hTR转染Tca8113细胞系 ,运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡 ,并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化。结果 转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓 ,群体倍增时间较未转染组和转染空质粒组明显延长 ,流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降 ,有亚二倍体凋亡峰出现 ,转染后细胞 p2 1基因表达水平显著增高 ,裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱。 结论 反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长 ,同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡 。

人舌鳞癌TCA8113细胞在不同温度下nm23-H_1基因的表达及其意义

目的:通过测定肿瘤细胞内nm23-H,基因的表达情况,探讨高温治癌与转移抑制基因nm23-H_1之间的关系,以期阐明高温抑制肿瘤侵袭及转移的机理。方法:将人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞分为37℃对照组和43℃实验组,43℃组又分为10、20、30和40min共4个时间亚组。经相应的温度和时间处理后,通过MTT法、免疫组织化学技术及RT-PCR等方法对细胞进行观察、分析,以研究加热后舌癌细胞的生物学行为及nm23-H_1表达量的改变。结果:加温能抑制Tca-8113细胞的增殖活性,在43℃随着加热时间的延长,细胞中nm23-H_1表达量增加,并且在加热30min时达到最高.而在加热40min时有所下降.此变化不随加热后培养时间的延长而改变。结论:高温治疗可能是通过增加细胞中转移抑制基因nm23-H_1表达量来抑制肿瘤细胞的侵袭、转移能力;43℃加热30min可能是临床治疗的理想位点。

多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制作用

目的研究多西紫杉醇对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的作用。方法将0.1μmol/L的多西紫杉醇分别作用于Tca8113细胞12、24、48h,分别用倒置显微镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞凋亡状况;将浓度为0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的多西紫杉醇分别作用于Tca8113细胞12、24、48h后,用MTT法检测细胞增殖状况。结果多西紫杉醇对Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且浓度在0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L时呈时间和浓度依赖性;镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞术检测:多西紫杉醇浓度为0.1μmol/L时,作用12、24、48h,凋亡率增加,细胞阻滞于G2/M期。结论多西紫杉醇对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与抗癌机制有关。