杆状病毒介导LacZ基因转染体外培养的人虹膜色素上皮细胞(英文)

目的 :研究重组杆状病毒 (baculovirus)载体介导 β 半乳糖苷酶基因 (LacZ)对体外培养虹膜色素上皮(IPE)细胞的转染和表达情况。方法 :将质粒pCMV β中的CMV LacZ表达盒插入杆状病毒表达载体pFastBacI的EcoRI/HindⅢ位点 ,构建重组质粒pBac β ,并利用Bac to Bac表达系统在Sf9细胞中产生出重组杆状病毒BV β。将MOI为 2 0 0的BV β感染经酶消化加显微法分离培养的IPE细胞 ,2 4h后进行X gal染色。在显微镜下观察IPE中LacZ表达阳性的情况 ,记录阳性细胞所占的百分比。结果 :限制性酶切分析及测序结果表明 ,我们已成功构建表达质粒pBac β及重组杆状病毒BV β。X gal染色证实杆状病毒介导LacZ在细胞中的表达呈蓝色 ,弥漫于整个胞浆。感染后 2 4h时表达阳性率达 85 %。结论 :重组杆状病毒可有效介导报告基因在体外培养的IPE细胞中表达 ,为利用杆状病毒构建可供移植的基因工程化虹膜色素上皮细胞提供了实验依据。