肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4、环氧合酶2在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)、环氧合酶2(COX2)在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 收集96例结直肠癌患者的病历资料,所有患者均采用免疫组织化学染色法检测ARPC4、COX2表达情况,比较不同临床特征结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率,采用回归分析法分析结直肠癌组织中ARPC4与COX2表达的相关性,比较不同ARPC4、COX2表达情况结直肠癌患者的3年生存率。结果 结直肠癌患者中ARPC4阳性表达率为61.46%(59/96),COX2阳性表达率为59.38%(57/96)。有淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率均高于无淋巴结转移、中高分化、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关(r=0.618,P﹤0.05)。ARPC4阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于ARPC4阴性表达患者,COX2阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于COX2阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关,其表达与结直肠癌患者的临床特征及预后有关。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

miR⁃504调控蛋白酶体激活因子抑制人乳腺癌细胞系MCF⁃7增殖及迁移

目的观察miR-504在模型裸鼠以及乳腺癌细胞生物学行为的调节作用,寻找miR-504在调控过程中的关键靶基因,探究miR-504在乳腺癌中的调控机制。方法构建乳腺癌模型小鼠并观察miR-504对瘤体生长的影响。TargetScan筛选miR-504的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验证实;RT-qPCR、Western blot检测蛋白酶体激活因子复合体亚基3(PSME3)在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达;CCK8法、流式细胞测量术和Transwell小室法检测miR-504和PSME3对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖,周期和迁移能力的作用。结果在乳腺癌裸鼠移植瘤模型中miR-504能抑制瘤体生长;PSME3是miR-504的靶基因,在乳腺癌组织的表达明显升高(P<0.01),上调miR-504的表达能抑制PSME3的表达(P<0.01);较NC组,miR-504 mimic组能抑制乳腺癌细胞增殖、S期阻滞和迁移能力,而较miR-504 mimic组,miR-504 mimic+PSME3组MCF-7细胞增殖、S期比例和迁移能力升高(P<0.01)。结论miR-504可能通过靶向调控PSME3在乳腺癌中发挥抑癌作用。

腺苷酸激活蛋白酶介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与TSC2的关系研究

目的:探讨腺苷酸激活蛋白酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与结节性硬化复合物-2(tuberous sclerosis complex-2,TSC2)的关系。方法:成年雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组、模型+AMPK激动剂AICAR组(AICAR组)。采用腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠糖尿病大鼠模型。AICAR组大鼠连续皮下注射AICAR 12周。采用超声诊断仪检测所有大鼠的心功能:左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,LVESV)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、心率(heart rate,HR)、舒张早期血流峰值速度(peak velocity of early diastolic flow,E)、舒张晚期血流峰值速度(peak velocity of late diastolic flow,A)、E/A。取心肌组织,采用免疫共沉淀法检测AMPK和TSC2的结合水平;Western blot检测AMPK、TSC2、p-TSC2、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白的表达水平。结果:AICAR组LVEDV、LVEF、E和E/A均高于模型组,而A低于模型组(P=0.004,P=0.001,P=0.000,P=0.011,P=0.027);AICAR组AMPK和TSC2蛋白表达水平高于模型组(0.71±0.06 vs.0.36±0.09,P=0.003;0.80±0.02 vs.0.40±0.05,P=0.017);AICAR组结合水平高于模型组(0.49±0.09 vs.0.23±0.03,P=0.002);AICAR组p-TSC2蛋白水平高于模型组(1.48±0.07 vs.0.92±0.07,P=0.029);AICAR组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1和P62均高于模型组(P<0.05)。结论:AMPK介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制可能与其对TSC2的磷酸化作用有关。

罗格列酮对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的研究罗格列酮激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)后对大鼠肝星状细胞(HSC)表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响,探讨罗格列酮对肝纤维化的影响。方法采用胶原酶原位循环灌流法分离大鼠HSC,MTT法检测不同浓度罗格列酮对HSC增殖的影响,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及酶谱法检测罗格列酮对MMP-2基因、蛋白及酶活性的影响。结果罗格列酮在0～40μmol/L浓度范围内抑制HSC增殖。5μmol/L、10μmol/L罗格列酮对HSCMMP-2mRNA表达无明显影响。与对照组相比,5μmol/L、10μmol/L罗格列酮通过激活PPARγ抑制MMP-2蛋白分泌,使上清中MMP-2的酶活性呈剂量依赖性下降,10μmol/L罗格列酮组可使HSC内MMP-2的酶活性下降。结论罗格列酮可抑制HSCMMP-2蛋白分泌及酶活性,这可能是其抗肝纤维化的机制之一。

急性冠状动脉综合征合并2型糖尿病患者血浆过氧化物酶体增殖物激活受体γ与冠状动脉病变严重程度及斑块稳定性的相关性研究

目的探讨血浆过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对急性冠状动脉综合征(ACS)合并2型糖尿病(T2DM)患者冠状动脉病变程度及斑块稳定性的影响。方法选取确诊的ACS患者102例,其中合并2型糖尿病52例(51.0%,ACS+T2DM组),单纯ACS患者50例(49.0%,ACS组)。选取正常对照30例(对照组)。行冠状动脉造影术(CAG)并应用Gensini积分系统进行冠状动脉狭窄程度评估;所有患者抽取静脉血应用ELISA检测血浆PPARγ、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,并进行相关性分析。结果 ACS+T2DM组Gensini积分显著大于ACS组(P<0.05)。与对照组相比,ACS+T2DM组、ACS组血浆PPARγ水平下降,MMP-9浓度显著升高,ACS+T2DM组PPARγ下降、MMP-9升高更明显,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。ACS+T2DM组PPARγ浓度与Gensini积分(r=-0.416,P<0.05)、MMP-9浓度(r=-0.503,P<0.05)均呈负相关趋势。结论合并2型糖尿病能够加剧ACS患者冠状动脉病变及斑块不稳定程度,PPARγ可能在其中起保护作用。

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme,ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500 U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5 h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC_(50)=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC_(50)=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。

PSME2和STAT3双重抑制通过合成致死效应诱导食管鳞癌细胞死亡

蛋白酶体激活物复合物亚基2(proteasome activator complex subunit 2,PSME2)表达异常与多种肿瘤发生发展密切相关,但在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中功能及临床意义尚不明确。本研究分析了TCGA-ESCC和GSE53625数据库中ESCC转录物组数据,发现PSME2高表达组ESCC患者预后不良,且ESCC组织中PSME2蛋白表达水平高于癌旁组织。沉默KYSE30细胞和NE6-T细胞中PSME2表达,ESCC细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆能力均显著下降,同时伴随着LC3-II/LC3-I蛋白表达明显升高、p62蛋白表达降低和自噬激活。GSEA富集分析表明,PSME2低表达组IL-6/STAT3信号通路激活,沉默KYSE30细胞和NE6-T细胞诱导了IL-6分泌和p-STAT3表达增加。上述PSME2沉默诱导的分子变化,能够被LMT28或WP1066逆转。PSME2沉默联合WP1066,使KYSE30与NE6-T细胞培养上清中LDH含量明显升高,Calcein/PI染色表明,死亡细胞率分别为36.69%和32.55%,显著高于PSME2沉默(6.78%和6.74%)或WP1066单独处理组(18.34%和9.70%)。本研究表明,PSME2促进ESCC恶性进展,PSME2沉默通过IL-6/STAT3信号通路代偿性激活ESCC自噬,联合PSME2沉默和STAT3抑制通过合成致死效应诱导食管鳞癌细胞死亡,表明PSME2是ESCC潜在分子治疗靶点,联合抑制PSME2和STAT3是ESCC治疗的新选择。

血清PGC-1α、A1AT水平与2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病发病的关系

目的 探讨血清过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(PGC-1α)、α1-抗胰蛋白酶(A1AT)水平与2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病的关系。方法 选取T2DM患者184例(T2DM组),另选取同期60名体检健康志愿者(对照组),根据是否合并NAFLD将T2DM患者分为NAFLD组(95例)和非NAFLD组(89例)。采用酶联免疫吸附法检测血清PGC-1α、A1AT水平。多因素Logistic回归分析影响T2DM合并NAFLD的因素,受试者工作特征曲线分析血清PGC-1α、A1AT水平对T2DM合并NAFLD的预测价值。结果 与对照组比较,T2DM组血清PGC-1α、A1AT水平降低(P均<0.05)。与非NAFLD组比较,NAFLD组血清PGC-1α、A1AT水平降低(P均<0.05)。体质量指数增加、T2DM病程延长、高血压和总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、谷草转氨酶、谷丙转氨酶升高为T2DM合并NAFLD的独立危险因素,高密度脂蛋白胆固醇、PGC-1α、A1AT升高为独立保护因素(P均<0.05)。血清PGC-1α、A1AT水平联合预测T2DM合并NAFLD的曲线下面积为0.885,大于血清PGC-1α、A1AT水平单独预测的0.788、0.786(P均<0.05)。结论 血清PGC-1α、A1AT水平降低与T2DM合并NAFLD发病密切相关,血清PGC-1α、A1AT水平联合对T2DM合并NAFLD具有较高的预测价值。

高通量测序揭示原发性胆汁性胆管炎患者的T细胞受体图谱特征

目的揭示原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者T细胞受体(T cell receptor,TCR)图谱特征,并揭示大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)抗原在PBC疾病的分子模拟机制。方法采用多重聚合酶链反应和免疫组库测序技术分析PBC患者和健康对照者的CD4^(+)和CD8^(+)记忆性TCRβ链互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)序列的多样性、氨基酸组成及疏水性、共有CDR3序列。体外诱导和扩增人PDC-E2_(163-176)(人PDC-E2)抗原相关T细胞和E.coli PDC-E2_(31-44/134-147/235-248)(E.coli PDC-E2)抗原相关T细胞,通过免疫组库测序技术鉴定人(和E.coli)PDC-E2抗原相关TCRβCDR3图谱,并分析其丰度变化。结果PBC患者组和健康对照组间的CD4^(+)记忆性T细胞、CD8^(+)记忆性T细胞TCRβCDR3免疫图谱多样性相似,D50指数[CD4^(+)记忆性T细胞:0.028±0.019比0.034±0.015;CD8^(+)记忆性T细胞:(1.86±2.70)×10^(-3)比(4.62±3.89)×10^(-4)]、Shannon指数(CD4^(+)记忆性T细胞:9.473±1.346比9.734±0.933;CD8^(+)记忆性T细胞:6.197±1.519比5.436±1.629)、Gini指数(CD4^(+)记忆性T细胞:0.786±0.048比0.760±0.036;CD8^(+)记忆性T细胞:0.920±0.047比0.939±0.025)等差异均无统计学意义(P均>0.05)。PBC组和健康对照组CD4^(+)记忆性T细胞和CD8^(+)记忆性T细胞间共有CDR3序列百分比差异无统计学意义[(6.47±1.43)%比(6.21±3.18)%;t=-0.21,P=0.84]。健康对照组和PBC组中序列长度为13、14、15的CDR3分子第6位和第7位氨基酸的组成频率中部分存在显著差异,疏水氨基酸组成频率近似。通过细胞培养和免疫组库测序鉴定了一系列人PDC-E2和E.coli PDC-E2抗原刺激后丰度显著上升的TCR序列。结论该研究鉴定出PBC疾病的TCR图谱特征,从TCR这个新视角阐述了E.coli在PBC疾病中的分子模拟机制。

AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均降低(P<0.05),EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论AP2M1的过表达部分通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路来抑制DLBCL细胞的增殖和侵袭。

我国代表地区须癣毛癣菌复合体的分子鉴定与分型研究

目的对我国代表地区的须癣毛癣菌菌株进行分子再鉴定和分型研究。方法选取我国南北方8个省市地区经表型鉴定的须癣毛癣菌菌株47株,通过再培养形态观察、生理试验;PCR扩增核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)D1-D2区,测序后利用数据库进行序列比对,对须癣毛癣菌复合体进行再鉴定;PCR扩增rDNA非转录间隔区(NTS)的三个串联重复亚单位S0、S1和S2区,进行种内分型,并比较不同部位来源菌株型别的差异性。结果我国南北方8个省市地区47株须癣毛癣菌中3株鉴定为断发毛癣菌,6株鉴定为无性型苯海姆节皮菌,其余均鉴定为万博节皮菌中的亲人型趾间毛癣菌;三对不同引物扩增38株趾间型毛癣菌和2株苯海姆节皮菌NTS区,共产生28种特征性带型。带型和菌株来源及发生部位无相关性。结论我国分离自人类须癣毛癣菌复合体的主要组成菌种为趾间毛癣菌;ITS区结合LSU D1-D2区测序有助于鉴定须癣毛癣菌复合体至种水平;NTS区的三个串联重复亚单位所产生的特征性指纹图提供了一种快速、稳定的分子生物学种内分型方法,可应用于趾间毛癣菌感染的流行病学研究。

牙体机械损伤后牙本质牙髓组织MMP-2和MMP-9表达变化

目的研究牙体机械损伤后牙本质牙髓组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化。方法以离体第三磨牙(n=30)制作牙体机械损伤的牙本质牙髓复合体体外培养模型(模型组)。分别于培养后第3、7、14天收集样本,免疫组化染色、Real-time PCR和Western blotting检测MMP-2和MMP-9在培养后不同时间点的表达。以无牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养的离体第三磨牙(n=30)作为对照组。结果免疫组化染色发现,MMP-2和MMP-9在对照组成牙本质细胞呈阳性表达,在牙髓细胞则呈阴性表达;在模型组,成牙本质细胞和牙髓细胞MMP-2和MMP-9均呈阳性表达。图像分析显示,模型组培养后各时间点MMP-2和MMP-9表达均显著高于对照组(P<0.05);且模型组培养第3天MMP-2和MMP-9表达均显著高于培养第7和第14天(P<0.05)。Real-time PCR检测表明,模型组培养后第3天的MMP-2和MMP-9 mRNA表达显著高于培养后第7和第14天(P<0.05)。Western blotting检测发现,模型组培养后各时间点均有MMP-2和MMP-9蛋白表达,以培养后第3天时较为明显。结论在牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养过程中,MMP-2和MMP-9表达呈现先增加后减弱,与基质降解和合成的时间相对应。

过氧化物酶体增生物激活物受体γ激活与基质金属蛋白酶2在兔动脉粥样硬化斑块形成中的作用

观察过氧化物酶体增生物激活物受体γ（PPARγ）激活与基质金属蛋白酶2（MMP-2）对高胆固醇饮食兔动脉粥样硬化（AS）斑块形成的影响，并初步阐明其可能的机制。

血清组织型纤溶酶原激活物-抑制剂复合物和膜联蛋白A2及核转录过氧化物酶增殖体激活受体γ与冠心病患者冠状动脉狭窄程度相关性及其对预后的影响

目的观察冠心病患者血清组织型纤溶酶原激活物-抑制剂复合物(tissue plasminogen activator inhibitor complex,t-PAIC)、膜联蛋白A2(annexinⅡ)、核转录过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma,PPARγ)水平,探讨其与冠心病患者冠状动脉狭窄程度相关性及其对预后的影响。方法冠心病患者102例为冠心病组,体检健康者102例为对照组。冠心病组根据冠状动脉狭窄程度分为轻度组(Gensini评分<18分)30例,中度组(Gensini评分18~40分)45例,重度组(Gensini评分>40分)27例。比较冠心病组与对照组及轻、中、重度组血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平。采用Pearson相关性分析血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平之间的相关性及其与冠状动脉狭窄程度的相关性。冠心病组随访3个月,根据预后情况分为预后不良组24例和预后良好组78例,比较2组临床资料及血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平;冠心病患者预后不良的影响因素采用多因素Cox比例风险回归模型分析;绘制ROC曲线,评估血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平对冠心病患者预后不良的预测效能。结果冠心病组血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平[(13.01±3.29)ng/L、(2.23±0.64)ng/L、(2.44±0.75)mg/L]均高于对照组[(7.92±2.07)ng/L、(1.56±0.30)ng/L、(1.06±0.32)mg/L](P<0.05);轻、中、重度组血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平依次增高(P<0.05);血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平与Gensini评分呈正相关(r=0.750,P<0.001;r=0.593,P<0.001;r=0.782,P<0.001),血清t-PAIC与annexinⅡ、PPARγ呈正相关(r=0.644,P<0.001;r=0.531,P<0.001),annexinⅡ与PPARγ呈正相关(r=0.762,P<0.001)。预后不良组冠状动脉单支病变比率(4.17%)、左室射血分数[(52.23±4.18)%]均低于预后良好组[35.90%、(57.31±5.15)%](P<0.05),冠状动脉双支病变比率(37.50%)、冠状动脉多支病变比率(58.33%)、左心室舒张末期内径[(43.76±2.24)mm]、血清t-PAIC[(16.25±3.56)ng/L]、annexinⅡ[(3.12±0.81)ng/L]、PPARγ[(3.36±0.79)mg/L]均高于预后良好组[26.92%、37.18%、(40.95±2.09)mm、(12.01±4.19)ng/L、(1.96±0.63)ng/L、(2.16±0.57)mg/L](P<0.05);血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ是冠心病患者预后不良的影响因素(HR=5.693,95%CI:3.206~10.109,P<0.001;HR=4.754,95%CI:2.714~8.326,P<0.001;HR=4.883,95%CI:2.549~9.355,P<0.001);当血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ的最佳截断值分别为15.27 ng/L、2.51 ng/L、2.99 mg/L时,预测冠心病患者预后不良的AUC分别为0.787(95%CI:0.695~0.862,P<0.001)、0.794(95%CI:0.703~0.868,P<0.001)、0.776(95%CI:0.682~0.852,P<0.001),灵敏度分别为70.83%、95.83%、62.50%,特异度分别为78.21%、58.97%、85.90%;三者联合检测预测冠心病患者预后不良的AUC为0.879(95%CI:0.799~0.935,P<0.001),灵敏度为75.00%,特异度为89.74%。结论冠心病患者血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平增高,血清t-PAIC、annexinⅡ、PPARγ水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关,三者联合检测预测冠心病患者预后不良的效能更高。

凝血酶对体外培养脑微血管内皮细胞的影响

目的 :探讨凝血酶 (thrombin ,TM)增加血脑屏障 (blood brainbarrier ,BBB)通透性的机制。 方法 :将脑微血管内皮细胞在体外进行培养 ,在细胞的培养液中加入TM或TM +组织蛋白酶G(cathepsinG ,CATG) ,应用相差显微镜动态观察TM及其受体抑制剂对内皮细胞形态的影响 ,应用免疫组织细胞化学技术检测基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )表达的变化。结果 :TM加入后 1h内皮细胞开始收缩 ,细胞面积变小 ,细胞间隙增宽 ,细胞收缩程度具有时间依赖性 ,至 12h时细胞面积仅为处理前的 2 0 %。TM使内皮细胞MMP 2的表达水平明显增加 ,与对照组比较 ,存在明显统计学差异 (P <0 .0 1)。TM +CATG加入培养液后 ,细胞形态、MMP 2的表达与对照组比较均无明显统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论 :TM通过激活蛋白酶激活受体 1(proteaseactivatedreceptor 1,PAR 1) ,使内皮细胞发生收缩 ,促进MMP 2表达 ,是TM增加BBB通透性的可能机制。

PPAR-γ通过活化PTEN抑制肾间质成纤维细胞MMP2的活化

目的探讨激活的PPAR-γ是否通过活化PTEN抑制血小板源性生长因子(PDGF)刺激的肾间质成纤维细胞MMP2活化,从而介导肾间质纤维化的发生。方法以原代分离培养的小鼠肾间质成纤维细胞为研究对象,以肾间质纤维化的主要刺激因子PDGF-AA刺激细胞。于PDGF-AA刺激细胞前,分别予以罗格列酮激活PPAR-γ,PI3K、PTEN、PPAR-γ特异性抑制剂LY294002、bpV(Pic)、GW9662预处理细胞,检测AKT、PTEN、PPAR-γ、MMP2的活化水平。结果成功分离并培养小鼠肾间质成纤维细胞,并证实PDGF-AA可剂量依赖性激活MMP2,而对MMP9、TIMPs无影响。特异性抑制PI3K/AKT信号通路或激活PPAR-γ显著抑制PDGF-AA刺激的AKT、MMP2活性;抑制PTEN可逆转PPAR-γ激活对PDGF-AA诱导的AKT磷酸化及MMP2活性的影响。结论 PI3K/AKT信号通路特异性介导PDGF-AA诱导的肾间质成纤维细胞MMP2的活化;激活的PPAR-γ通过活化PTEN抑制PI3K/AKT信号通路进而抑制MMP2活化。

线粒体依赖的凋亡通路与缺血性脑卒中

在脑血管病研究进展中，缺血性脑卒中后神经元损伤的病理、生理机制是研究最为活跃的领域之一。缺血性脑卒中后神经元损伤的机制十分复杂，而凋亡在其中起着举足轻重的作用。线粒体作为细胞内能量产生和代谢的中心，与脑缺血后神经元损伤有着密切联系。近年来，关于线粒体参与脑缺血时细胞凋亡的信号转导通路的研究不断深化，为进一步对缺血性脑卒中后神经元损伤机制的探索指出了新的方向，从而使以线粒体作为靶点的脑缺血保护问题成为可能。

沉默COPB2通过调节AKT信号通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的查明沉默外被体蛋白复合物亚基β2(coatomer protein complex subunitβ2,COPB2)在人非小细胞肺癌细胞(A549)中的作用及其生物学机制。方法通过Western blot法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织、正常肺泡上皮细胞和肺癌细胞中COPB2水平。A549细胞用COPB2短发夹RNA(COPB2 shRNA)转染,MTT法测定细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭水平,免疫印迹法检测p-AKT、AKT、Cleaved Caspase-3、cyclin D1、Bcl-2和Bax水平。结果与正常肺组织或细胞相比,非小细胞肺癌组织和细胞中COPB2水平显著上升;沉默COPB2可以显著抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,降低p-AKT/AKT比值、cyclin D1和Bcl-2水平,升高Cleaved Caspase-3和Bax水平。结论沉默COPB2通过调节AKT信号通路抑制非小细胞肺癌的进展。

慢性阻塞性肺疾病患者痰液PPARγ、MMP-2和TIMP-2水平变化及其与肺功能的关系

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰液过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、组织抑制因子2(TIMP-2)水平变化,并探讨其与肺功能的关系。方法选择COPD患者71例(观察组)、体检健康者62例(对照组),收集两组清晨痰液,采用ELISA法检测PPARγ、MMP-2、TIMP-2,采用肺功能仪检测肺功能。比较两组痰液PPARγ、MMP-2、TIMP-2水平和肺功能,并分析痰液PPARγ、MMP-2、TIMP-2水平与肺功能的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估痰液PPARγ、MMP-2、TIMP-2水平对COPD的诊断价值。结果观察组痰液PPARγ、MMP-2水平高于对照组,TIMP-2水平低于对照组(P均<0.05);观察组肺活量(VC)、第1秒用力呼气量(FEV1)、FEV 1占用力肺活量比率、最大呼气中段平均流速(MMEF)及呼气峰值流速均低于对照组(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,痰液PPARγ、MMP-2水平与VC、FEV1、MMEF均呈负相关关系,痰液TIMP-2水平与VC、FEV 1、MMEF均呈正相关关系(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,痰液PPARγ、MMP-2、TIMP-2诊断COPD的曲线下面积分别为0.883、0.846、0.802。其中,痰液PPARγ诊断COPD的最佳截断值为18.28 pg/mL,其诊断敏感性为83.33%、特异性为85.37%;痰液MMP-2诊断COPD的最佳截断值为141.21 ng/mL,其诊断敏感性为96.67%、特异性为70.73%;痰液TIMP-2诊断COPD的最佳截断值为117.95 ng/mL,其诊断敏感性为70.00%、特异性为78.05%。结论COPD患者痰液PPARγ、MMP-2水平升高,TIMP-2水平降低,三者变化与COPD患者肺功能异常密切相关。