小鼠甘草酸的药代动力学及其与人血浆蛋白结合率

小鼠甘草酸的药代动力学及其与人血浆蛋白结合率＊贺平贾随旺１吴孟超李琳芳郭亚军（第二军医大学东方肝胆外科研究所肿瘤免疫及基因治疗中心，上海２００４３８）中国图书分类号Ｒ２８４．１；Ｒ９７５．５甘草酸（ｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｎ）是甘草的主要有效成分之一，具...

丹红注射液7种药效物质基础的人血浆蛋白结合率

目的建立同时测定丹红注射液中7种主要药效物质基础丹参素、原儿茶醛等体外人血浆蛋白结合率的方法,并将结果与同等浓度条件下每个单体化合物的人血浆蛋白结合率进行比较,以考察两者是否存在显著性差异,由此推测多组分之间是否存在血浆蛋白竞争性结合。为丹红注射液主要药效物质基础的体内药动学,及其在临床联合用药时的体内药动学相互作用研究提供参考依据。方法采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率,HPLC测定丹红注射液中7种成分,及每种成分单独透析平衡时的血药浓度及游离药物浓度。结果在3种浓度的丹红注射液中,丹参素、原儿茶醛、p-香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的人血浆蛋白结合率分别为(11.88±0.58)%、(78.35±1.72)%、(63.48±2.17)%、(87.72±0.78)%、(82.77±2.83)%、(71.59±0.81)%和(70.55±1.34)%;而同等浓度条件下,这7种单体化合物的人血浆蛋白结合率分别为(23.34±1.06)%、(79.32±1.41)%、(78.97±0.08)%、(92.37±0.66)%、(84.95±0.38)%、(79.15±5.47)%和(75.49±0.75)%。与单体化合物的血浆蛋白结合率相比,丹参素、p-香豆酸和紫草酸在丹红注射液样品中的人血浆蛋白结合率差异有显著性;在本实验的药物浓度范围内,只有紫草酸的人血浆蛋白结合率与浓度呈线性;原儿茶醛、丹酚酸D、迷迭香酸和丹酚酸B的人血浆蛋白结合率差异没有显著性。结论该测定方法简便易行,准确度、稳定性均较好。实验条件下,原儿茶醛、p-香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的人血浆蛋白结合率均>60%,且在样品体系中这7种成分的血浆蛋白结合率均比单独给药的血浆蛋白结合率低,组分之间可能存在竞争性结合,但竞争影响可能较弱。考察血浆蛋白竞争性结合对该药的药物相互作用影响时,其组分间的相互竞争影响较小。

人血浆蛋白C的纯化与鉴定

目的 建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法 利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论 已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。

杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白结合率测定

目的:测定杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白的结合率。方法:采用平衡透析法结合HPLC,使用Zorbax SB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm),杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元分别采用乙腈-水(26∶74)、(30∶70)、(28∶72)为流动相,流速0.3 m L·min-1,检测波长220 nm。结果:在低、中、高不同质量浓度下,杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的平均结合率分别为83.48%、94.19%、84.04%。结论:杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的结合率大于80%,为高血浆蛋白结合的化合物。

人血浆蛋白C的酶联免疫测定法的建立

人血浆蛋白C(Human protein C,HPC)是维生素K依赖蛋白的一种,在调节血凝和纤溶过程中起着重要作用。HPC的缺乏,可以导致多种血栓性疾病,如静脉血栓、脑栓塞、新生儿突发性紫癜、严重中风和播散性血管内凝血(DIC)等。因此,在研究HPC缺乏的临床生理病理,以及在HPC制剂的制备和临床应用方面,HPC抗原(HPC:Ag)水平的检测都有着重要的意义。 国外目前采用3种方法测定HPC:Ag,即ELISA法、放射免疫测定法和火箭电泳法。放射免疫测定法所需仪器设备复杂,一般实验室难以开展;火箭电泳法特异性差,敏感性低,并且受抗血清制备规模的限制。

不同冻存温度及时间对人血浆蛋白分离沉淀中蛋白质的影响

《中国药典》2015年版中规定了蛋白沉淀应冻存于-30℃以下,并规定其有效期;但此处的规定仅针对"最终冻存温度"或"低温保存设备的设定温度",并未对沉淀冻存降温过程、时间进行规定。但在实际生产过程中,对沉淀冻存时间、温度的统计过程中发现,FⅤ、FⅡ沉淀冻存过程的实际降温时间可能长短不同,在极端的情况下,可能超过48h的降温时间范围规定。为考察此种情况,开展了对冻存沉淀质量的影响试验。结果表明,FⅤ、FⅡ沉淀对较高冻存温度(-10℃)的最长耐受时间均大于为72h。

抗人血浆蛋白C单克隆抗体研制的初步报告

用物理化学方法纯化的人血浆蛋白C(HPC)免疫小鼠,制备了8株分泌抗HPC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为PC01～PC08。各株杂交瘤细胞都具有长期稳定的抗体分泌能力,其中PC03为构象特异性单克隆抗体,二价金属离子对其与HPC的结合有明显影响;PC02和PC03对活性蛋白C的酶活性有促进作用;而PC04具有抑制作用。

人血浆蛋白质组研究方法及其应用

人血浆蛋白质组(Proteome)是人类血浆中可以检测到的所有蛋白质,承担着维持渗透压、运输物质、免疫防御等多种生理功能。本文对人血浆蛋白质组的性质、功能和研究方法以及应用情况进行了综述。

新蛋白制剂输液——重组人血浆蛋白

新蛋白制剂输液——重组人血浆蛋白保木昌德等过去所指的蛋白制剂是指血浆成分制剂，现今市场能购到的精制人血浆成分蛋白大致上有白蛋白制剂、免疫球蛋白制剂、凝血因子制剂。其中就应用率和数量而言，以白蛋白制剂、静脉用的人免疫球蛋白制剂、凝血因子中的第Ⅷ因子制剂...

鸡卵黄抗体的制备以及金磁微粒为载体去除人血浆部分高丰度蛋白的研究

目的：以人血浆白蛋白（HSA）和IgG为免疫原，制备特异性鸡卵黄抗体IgY（Egg yolk immunoglobulin），并将其固定于金磁微粒表面，用于HSA和IsG的去除研究。方法：用HSA、IsG以及混合成分分别作免疫原免疫Roman母鸡。制备抗HSA和IsG鸡卵黄抗体IgY，并对IgY的分离提取条件进行优化。SDS-PAGE和间接ELISA检测IgY的纯度和效价。将高效价IgY固定于金磁颗粒表面进行血浆高丰度蛋白去除研究。结果：免疫后60—120d内，鸡血清抗体效价可达1：15000—1：25000；收获鸡蛋，提取得到的卵黄抗体IgY效价可达1：10000—1：25000，纯度98％以上；采用金磁微粒载体固定IgY，可对血浆中的HSA，IsG进行特异性的去除。结论：人血浆中的高丰度蛋白成分HSA和IsG免疫产蛋母鸡后，可从鸡卵黄中分离提取到高效价、高纯度的卵黄抗体IgY；IgY偶联于金磁微粒表面可特异性的去除人血浆中的HSA和IsG，作为血浆蛋白质组学研究的一种新方法，有较好的应用前景。

高效毛细管电泳前沿分析法研究酸性药物那格列奈与人血浆白蛋白的结合

用高效毛细管电泳前沿分析法研究了酸性药物那格列奈与人血浆白蛋白的结合常数、结合位点和结合率。使用未涂层的毛细管柱 (4 0cm× 5 0 μmi.d .;有效柱长 32cm) ,磷酸盐缓冲溶液 (pH 7.4 ,离子强度0 .17)为背景溶液 ,在紫外检测波长 2 14nm、运行电压 18kV和重力进样 10 0s的条件下 ,利用那格列奈谱峰的平台高度和游离药物浓度的良好线性关系 (r>0 .999,n =6 ) ,测定了那格列奈的游离药物浓度。固定药物浓度 (2 0 0 μmol L ,2 5 0 μmol L) ,考察不同的蛋白质浓度对结合的影响 ;固定蛋白质浓度 (10 0 μmol L) ,考察不同的药物浓度对结合的影响。实验数据采用非线性拟和程序进行处理 ,得到了那格列奈的蛋白质结合参数。高效毛细管电泳前沿分析法测定的数据重现性良好 (RSD <2 .5 % ,n =3) ,在药代动力学和药效学研究方面具有简便、准确的优点。

人血浆因子V蛋白免疫印迹分析及其临床应用

目的 建立人血浆因子Ｖ（ＦＶ）蛋白免疫印迹分析，对遗传性ＦＶ缺乏症家系成员血浆ＦＶ含量进行分析。方法 以３３％饱和硫酸铰从多克隆兔抗人ＦＶ抗血清中纯化ＩｇＧ，待测血浆行４％～１２％梯度的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，继之电转印至硝酸纤维膜上。结果 在３３０ ｋＤ附近，正常人混合血浆呈现一明显的条带，患者母亲对应条带的显色强度明显弱于正常对照，而患者则完全缺如，且未能检出其他较小的ＦＶ片段产物。结论 我们建立的人血浆ＦＶ蛋白免疫印迹分析法对于遗传性ＦＶ缺乏症的辅助诊断及分型具有重要作用。该家系属于Ｉ型遗传性ＦＶ缺乏。

同型半胱氨酸和人血浆脂蛋白磷脂酶A2在冠心病患者中的水平及其诊断价值与危险因素

目的:探讨冠心病患者血清中同型半胱氨酸(Hcy)和人血浆脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)的水平及其诊断价值,并分析相关危险因素。方法:选取243例冠心病患者作为研究组,根据疾病原因分为急性心肌梗死组(AMI组,n=80)、不稳定型心绞痛组(UAP组,n=82)和稳定型心绞痛组(SAP组,n=81)。同时选取80例健康体检者为对照组。比较各组之间血清Hcy和Lp-PLA2水平的差异。使用单因素和多因素Logistic回归对冠心病的危险因素进行分析,利用受试者工作特征(ROC)曲线进一步探索Hcy和Lp-PLA2单独及联合检测时对冠心病的诊断效能。结果:对照组、SAP组、UAP组和AMI组之间血清Hcy和Lp-PLA2水平呈上升趋势,且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。使用Logistic回归分析该疾病的危险因素。单因素分析结果显示,冠心病与Hcy、Lp-PLA2、高血压、糖尿病和高脂血症有关(P<0.05),与肥胖、长期饮酒和长期吸烟无关(P>0.05)。多因素分析结果显示,Hcy、Lp-PLA2、高血压和高脂血症是冠心病的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线分析得出:Hcy和Lp-PLA2对冠心病患者有较高的诊断价值,曲线下面积(AUC)分别为0.925和0.879。在冠心病患者中联合检测血清中Hcy和Lp-PLA2水平的诊断效能高于单项指标检测,曲线下面积(AUC)为0.959。结论:冠心病患者血清中Hcy和Lp-PLA2水平均升高,Hcy、Lp-PLA2、高血压和高脂血是冠心病的独立危险因素,可为冠心病的诊断、治疗和预防提供实用依据。Hcy和Lp-PLA2联合检测可有效提升冠心病患者临床诊断效能,为临床诊疗提供了新的思路。

人血浆载脂蛋白B100分离纯化方法的研究

通过硫酸右旋糖苷(dextransulfate,DS)法沉淀人血浆中低密度脂蛋白(LDL)及利用SDS-PAGE电泳分离出其中载脂蛋白B100(apolipoprotein B100,ApoB100),与弗氏佐剂充分乳化后免疫新西兰大白兔,获得ApoB100特异性多克隆抗体,经过protein A纯化后制备抗体亲和层析柱,并利用该亲和层析柱分离纯化SDS-PAGE电泳ApoB100条带的电洗脱液和人血浆LDL中ApoB100.结果发现,所制备层析柱对电洗脱液中ApoB100具有较好纯化效果.

幽门螺旋杆菌与颈动脉粥样硬化斑块和血浆脂蛋白相关磷脂酶A2水平的关系

目的:对消化科门诊幽门螺旋杆菌感染患者的颈动脉粥样硬化与血浆脂蛋白相关磷脂酶A2进行分析,探讨幽门螺旋杆菌与颈动脉粥样硬化斑块和血浆脂蛋白相关磷脂酶A2浓度的关系.方法:将随机入组的75例幽门螺旋杆菌阳性患者、75例幽门螺旋杆菌阴性患者行颈动脉彩色多普勒检查和血浆脂蛋白相关磷脂酶A2测定.结果:不稳定斑块组血浆Lp-PLA2水平高于稳定斑块组和无斑块组,稳定斑块组血浆Lp-PLA2水平高于无斑块组.差异具有统计学意义(P<0.05).Hp阳性组患者斑块不稳定性高于Hp阴性组患者的不稳定性,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);Hp阳性组患者Lp-PLA2浓度高于Hp阴性组患者Lp-PLA2浓度,两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论:1.血浆脂蛋白相关磷脂酶A2水平反映颈动脉斑块的稳定性;2.幽门螺旋杆菌感染与否影响斑块的稳定性;3.幽门螺旋杆菌感染与否影响血浆脂蛋白相关磷脂酶A2水平.

红细胞膜总胆固醇与人血浆脂蛋白磷脂酶A2与冠心病的关系

目的探讨红细胞膜总胆固醇(erythrocyte membranes,CEM)和人血浆脂蛋白磷脂酶A2(lipoproteinassociated phospholipase A2,Lp-PLA2)与急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)之间的相关性。方法入选ACS组患者72例、慢性稳定型冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)组43例、非冠心病(对照组)患者20例。分别测定入选患者的血浆低密度脂蛋白-胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、Lp-PLA2浓度及CEM浓度,对比分析3组间相关指标的差异,并比较CEM浓度与传统冠心病预测指标(LDL-C、HDL-C、Lp-PLA2)对ACS的预测价值的优劣。结果 3组血浆LDL-C、HDL-C浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ACS组CEM浓度较对照组、冠心病组均有明显升高,差异有统计学意义(P均=0.000);冠心病组CEM浓度与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.159)。ACS组血浆Lp-PLA2浓度较对照组、冠心病组均有明显升高,差异有统计学意义(P均=0.000);冠心病组血浆Lp-PLA2浓度比对照组高,差异有统计学意义(P=0.011)。ACS组血浆Lp-PLA2浓度与CEM浓度呈正相关(r=0.492、P=0.000)。Lp-PLA2与ACS的相关系数为r=0.720(P=0.000)、CEM与ACS的相关系数为r=0.874(P=0.000)。结论CEM与Lp-PLA2对ACS的预测优于传统的LDL-C、HDL-C,且CEM的预测则更加明确的指向ACS。

人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2与脑梗死的相关性研究

目的探究人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)与脑梗死的相关性。方法选取神经内科住院脑梗死患者150例作为实验组,时间为2015年6月-2016年6月,同时选取150例健康体检者作为对照组,这2组受检者均接受Lp-PLA2检测,并对检测的结果进行分析。结果实验组血浆Lp-PLA2水平与hs-CRP水平明显高于对照组(P<0.05);随着脑梗死患者疾病加重,其血浆Lp-PLA2水平与hs-CRP水平逐渐升高(P<0.05);脑梗死预后良好组的血浆Lp-PLA2水平与hs-CRP水平明显低于预后不良组(P<0.05);脑梗死患者的病情程度与其血浆Lp-PLA2水平和hs-CRP水平呈正相关的关系,其预后与血浆Lp-PLA2水平和hs-CRP水平呈负相关的关系(P<0.05)。结论Lp-PLA2在脑梗死患者疾病发生、发展过程中起着重要的作用,其与患者的疾病程度与预后有着较为密切的联系,可以为患者的治疗以及预后评估提供依据。

人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2水平对动脉粥样硬化脑梗死患者预后的影响

目的探究人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)对动脉粥样硬化脑梗死患者预后和认知的影响。方法回顾性分析扬州江都人民医院神经内科2018年1月至2019年10月收治的首发动脉粥样硬化脑梗死患者153例,根据入院时Lp-PLA2检测结果增高和正常分别分为观察组(69例)和对照组(84例)。比较两组患者住院时间、费用以及入院时、出院3个月、出院6个月时改良Rankin量表评分(MRS)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)和蒙特利尔认知测评(MoCA)评分。结果与观察组比较,对照组住院时间更短,出院3、6个月后MRS、NIHSS和MoCA评分均优于观察组(P<0.05)。两组住院费用比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Lp-PLA2对动脉粥样硬化脑梗死患者的预后和认知均有消极影响并增加患者的住院时间。

羟基磷灰石薄膜对人血浆纤维蛋白原的吸附性能

目的:探讨羟基磷灰石(HA)薄膜的制备方法及其对人血浆纤维蛋白原(Fib)的吸附性能。方法:用电子束蒸发和射频磁控溅射两种技术制备了天然HA薄膜。用原子力显微镜(AFM)观察了HA薄膜的表面形貌,并用光反射干涉仪(RIfS)测试和比较了两种不同技术制备的HA薄膜对Fib的吸附性能。结果:用电子束蒸发和射频磁控溅射制备的HA薄膜,对Fib的吸附厚度分别为7.01 nm和0.75 nm。结论:用电子束蒸发技术制备的HA薄膜对Fib的吸附能力和吸附牢固度均高于采用射频磁控溅射技术制备的HA薄膜。