人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备人细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)的单克隆抗体(mAb),并对其免疫特性进行鉴定。方法用重组CYFRA21-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血清效价最高小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选出阳性杂交瘤细胞株,进行亚克隆,并鉴定分泌抗体亚型;制备小鼠腹水,用protein G从腹水中纯化出CYFRA21-1的mAb;用间接ELISA测定mAb的效价,Western blot和竞争ELISA对mAb的免疫特性进行检测,竞争ELISA对mAb的临床应用性进行评价。结果获得2G8和12G7两株能稳定分泌人CYFRA21-1mAb的杂交瘤细胞株,其分泌抗体都为轻链为κ的IgG1;两株mAb都能特异识别人血清中的CYFRA21-1,效价分别为1×10-6和5×10-7;检测134份血清样本CYFRA21-1含量的结果与北京源德生物医学工程有限公司CYFRA21-1化学发光法定量检测试剂盒检测结果的相关性分别为y=0.8167x+0.3755(r=0.9772)和y=0.8142x+0.3655(r=0.9770)。结论成功制备两株人CYFRA21-1的特异mAb,为后期人血清CYFRA21-1定量测定试剂盒的完全国产化奠定了良好的基础。