猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析

目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb-N(45-344aa)和Fhb-C(345-664aa)的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,获得高纯度的重组蛋白,鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段,构建His-Fhb-N和His-Fhb-C重组表达质粒,利用亲和层析纯化目的蛋白并用Western blot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hIgG),Western blot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His-Fhb与hIgG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His-Fhb-N和His-Fhb-C截短表达蛋白,验证出Fhb特异性地与hIgG结合,且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论 Fhb能够结合hIgG,结合区域位于Fhb-N。

一种新的单克隆抗体检测方法在杂交瘤阳性细胞克隆筛选中的应用

目的探讨将一种新的检测抗人血清IgG及白蛋白单克隆抗体的方法应用在杂交瘤阳性细胞克隆筛选中。方法分别将人血清IgG和白蛋白连接到微球Beads上,混合2种微球,然后与抗人血清IgG及白蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,再与连接有荧光R-藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)的羊抗小鼠IgG抗体发生反应,最后在Luminex200仪器上读取微球上的平均荧光强度(MFI)值。结果抗人血清IgG及白蛋白单克隆抗体只与其相对应的微球发生特异性反应,2种抗体同时测定时,不互相干扰。当用该方法测定含有抗人血清IgG或白蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清液时,微球MFI值明显高于不含该抗体的上清液中微球的MFI值。结论该检测法具有较好的特异性,敏感性和重复性,可以应用到抗人血清IgG和白蛋白单克隆抗体杂交瘤阳性细胞克隆的筛选中。