肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C在肺癌术前评估中的价值分析

目的探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)检测在肺癌患者术前分期及淋巴结转移中的评估价值。方法我院收治的203例接受手术治疗的肺癌患者,比较肿瘤组织及癌周正常组织MTA1、VEGF-C表达阳性率,采用Spearman相关性分析MTA1与VEGF-C表达的关系,不同临床资料患者MTA1、VEGF-C阳性表达率,采用Logistics回归分析肺癌患者淋巴结转移影响因素,比较不同淋巴结转移情况肺癌患者肿瘤组织MTA1、VEGF-C表达量,采用ROC曲线获取MTA1、VEGF-C诊断肺癌淋巴结转移表达量截断值并判断诊断价值。结果肿瘤组织MTA1、VEGF-C表达阳性率高于癌周正常组织(P<0.05),MTA1与VEGF-C表达阳性正相关(P<0.05),肿瘤中低分化的MTA1、VEGF-C阳性表达占比均高于肿瘤高分化,术前ⅢA期MTA1、VEGF-C阳性表达占比均高于术前Ⅰ期,淋巴结转移的MTA1、VEGF-C阳性表达占比均淋巴结未转移(P<0.05)。MTA1、VEGF-C表达阳性为肺癌患者淋巴结转移的独立危险因素(P<0.05),淋巴结转移患者肿瘤组织MTA1、VEGF-C表达量高于淋巴结未转移患者(P<0.05)。MTA1、VEGF-C对肺癌淋巴结转移AUC为0.837、0.819,均具有良好诊断效能(P<0.05)。结论MTA1与VEGF-C互相影响,在肺癌组织发生发展过程中发挥重要作用,MTA1、VEGF-C表达阳性提示患者存在较高淋巴结转移风险,通过检测MTA1、VEGF-C表达量有助于判断肺癌患者淋巴结转移。

微RNA-509-3p/干扰素刺激基因15轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的探究微RNA(miR)-509-3p/干扰素刺激基因15(ISG15)轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法2022年1―9月,将喉癌M4E细胞分为Con组、miR-NC组、miR-509-3p组、pcDNA-ISG15组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中miR-509-3p表达;细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Matrigel体外成管实验检测血管生成能力;蛋白质印迹法检测细胞中ISG15、VEGF蛋白表达;萤光素酶活性报告检测miR-509-3p和ISG15的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69中miR-509-3p表达(1.01±0.13)μg/L相比,喉癌细胞SCC-40、SCC-2、M4E中miR-509-3p表达[(0.61±0.08)、(0.45±0.07)、(0.18±0.07)μg/L]均降低,且M4E细胞中miR-509-3p表达低于SCC-40、SCC-2细胞(P<0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞中miR-509-3p表达增加[(1.17±0.05)μg/L比(118±0.03)μg/L];Con组细胞中miR-509-3p表达与miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞增殖(1.71±0.02比3.09±0.07)、侵袭(55.33±2.52比150.67±2.52)、迁移(30.58±2.08比98.33±1.53)、形成小管数量(61.28±2.15比135.62±2.54)及细胞中ISG15(0.24±0.03比1.11±0.13)、VEGF(0.35±0.02比0.99±0.04)蛋白表达均降低,细胞凋亡率[(18.76±0.18)%比(5.61±0.08)%]增加(P<0.05);Con组细胞增殖、侵袭、迁移、形成小管数量、凋亡率及细胞中ISG15、VEGF蛋白表达和miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR-509-3p组相比,pcDNA-ISG15组细胞增殖(3.25±0.06)、侵袭(144.00±2.65)、迁移(89.34±5.13)、形成小管数量(131.56±2.08)及细胞中ISG15(0.83±0.05)、VEGF蛋白(0.89±0.03)表达增加,细胞凋亡率降低(6.85±0.06)%(P<0.05)。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞血管生成及VEGF蛋白表达。

过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧诱导的脑微血管内皮细胞活性及VEGF表达的影响

目的探讨过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用,并分析其可能的机制。方法将小鼠源性脑微血管内皮细胞,根据不同干预方式分为正常对照组(细胞正常培养)、细胞损伤组(细胞正常培养24 h,随后OGD3h/R3h损伤细胞)、BIRC5干预组(细胞预先转染腺病毒-BIRC5质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)和阴性对照组(细胞预先转染腺病毒空质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)。采用激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态学变化;用MTT法和流式细胞仪分别检测各组细胞存活率和凋亡率;用RT-PCR和免疫印迹法分别检测各组细胞BIRC5和VEGF mRNA及蛋白表达。结果正常对照组的细胞骨架微丝彼此连接,分布规则,丝网状有序排列;细胞损伤组和阴性对照组的细胞微丝断裂,收缩变短或移向周边,微丝网状排列紊乱,可见细胞外形皱缩,间隙加大,少部分微丝缺失出现空隙;BIRC5干预组的细胞微丝连接,形态成长梭形,排列较规则,可见细胞间隙缩小,显示过表达BIRC5基因能够减轻损伤细胞的骨架微丝紊乱。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组及阴性对照组细胞存活率降低,而细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组的细胞存活率增高,而细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5干预组和阴性对照组的BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与细胞损伤组相比,BIRC5干预组细胞BIRC5和VEGF的mRNA及蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达BIRC5基因对OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,机制可能与上调VEGF表达有关,提示BIRC5调控VEGF表达促进血管新生可能是脑侧支循环建立和形成的重要机制之一。

替雷利珠单抗联合白蛋白紫杉醇+奈达铂治疗晚期基因野生型肺腺癌疗效及对血清细胞蛋白19片段21-1、血管内皮生长因子水平和预后的影响

目的探讨替雷利珠单抗联合白蛋白紫杉醇+奈达铂治疗晚期基因野生型肺腺癌疗效及对血清细胞蛋白19片段(CYFRA)21-1、血管内皮生长因子(VEGF)水平和预后的影响。方法回顾性分析2018年2月~2020年3月于我院治疗的88例晚期基因野生型肺腺癌患者,依据治疗方案不同分成对照组(46例)与观察组(42例),对照组采用白蛋白紫杉醇+奈达铂治疗,观察组采用替雷利珠联合白蛋白紫杉醇+奈达铂治疗,两组均治疗5个疗程。比较两组患者治疗疗效、治疗前后肿瘤标志物、VEGF水平、治疗期间骨髓抑制发生状况及生存状况。结果治疗后观察组疾病控制率(DCR)高于对照组,血清CFRA21-1、VEGF及癌胚抗原(CEA)均低于同期对照组;两组患者血清CYFRA21-1、VEGF及CEA水平均低于同组治疗前(P<0.05)。治疗期间,两组患者骨髓抑制发生状况构成比较差异无统计学意义(P>0.05)。随访2年期间,对照组生存率均低于观察组(P<0.05)。结论晚期基因野生型肺腺癌患者予替雷利珠单抗结合白蛋白紫杉醇+奈达铂治疗可有效控制肿瘤进展,降低患者血清CYFRA21-1及VEGF水平,改善患者预后。

血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

背景:人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2在激素性股骨头坏死骨缺损中均具有成血管成骨作用,目前国内在以人血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2基因联合治疗激素性股骨头坏死方面少有报道。目的:构建人血管内皮生长因子121与人骨形态发生蛋白2双基因腺病毒穿梭质粒。方法:将质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经KpnⅠ/XbaⅠ酶切后,将BMP2片段定向连入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,构建可同时表达2个目的基因重组质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-BMP2,注入H5a细胞扩增,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析及序列测定。将已构建确认正确的腺病毒质粒,经BJ5183-AD-1电转感受态细胞进行电穿孔后,铺板,筛选阳性菌落,提取质粒,进行酶切分析,PCR检测和序列分析。结果与结论:酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确,提示实验成功构建了血管内皮生长121及骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体。

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响及机制研究

目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。术前7 d,Ad-HGF/VEGF165组和Ad-VEGF165组分别于大鼠皮瓣及创缘内多点注射Ad-HGF/VEGF165及AdVEGF165,对照组注射等容量0.9%氯化钠注射液。分别于术后7 d、14 d观测皮瓣成活面积,切取皮瓣组织标本HE染色、免疫组化观察微血管密度及组织间VEGF阳性率等指标,WesternBlot检测目的蛋白表达情况。结果:术后7 d、14 d,Ad-HGF/VEGF165组、Ad-VEGF165组皮瓣存活面积、组织间微血管数目、VEGF及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达情况均高于对照组(P<0.001),且Ad-HGF/VEGF165组明显高于Ad-VEGF165组(P<0.05)。结论:Ad-HGF/VEGF165具有协同作用,能显著促进VEGF和ERK1/2信号因子表达,短期内促进血管网重建,改善皮瓣血液灌注,提高大鼠超比例随意皮瓣成活面积。

血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子区多态性与抗VEGF药物治疗黄斑水肿疗效的相关性

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子区多态性与抗VEGF药物治疗黄斑水肿疗效的相关性。方法选取2020年9月至2022年3月在成都大学附属医院经荧光素眼底血管造影和光学相干断层扫描确诊的黄斑水肿患者145例(190眼),给予所有患者抗VEGF药物治疗1个月,根据视力提升情况将145例患者分为有效组(提升≥5个字母)和无效组(提升<5个字母)。收集两组患者临床资料并进行VEGF基因启动子区多态性分型,对各组数据进行统计学分析。结果本研究有效组患者64例(81眼),无效组患者81例(109眼)。有效组患者视网膜分支静脉阻塞发生率、基线最小分辨角对数(logMAR)视力及基线黄斑中心凹视网膜厚度(CMT)均高于无效组(均为P<0.05);有效组患者年龄相关性黄斑变性发生率、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、血糖及单核细胞数均低于无效组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。有效组rs13207351多态性A等位基因频率高于无效组,差异有统计学意义(P<0.05)。AA及AG基因型患者血糖水平均低于GG基因型患者,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。AG基因型患者胱抑素C水平高于AA及GG基因型患者(均为P<0.05)。AA及AG基因型患者抗VEGF药物治疗后小数视力、字母视力及logMAR视力均优于治疗前,且AA基因型患者视力改善程度稍优于AG基因型患者(均为P<0.05);AA及AG基因型患者抗VEGF药物治疗后CMT均低于治疗前,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。GG基因型患者抗VEGF药物治疗后CMT较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VEGF基因启动子区rs13207351多态性与抗VEGF药物治疗黄斑水肿疗效显著相关,A等位基因携带者抗VEGF药物治疗后疗效较好,其机制可能与A等位基因携带者血糖水平降低有关。

人血管内皮细胞生长因子121基因修饰材料修复桡骨火器性骨缺损

背景:骨缺损是导致火器性股损伤骨不连的首要原因,火器性损伤相对比较特殊。自体骨移植和异体骨移植均存在较大弊端,难以满足基层医院需求,采用具有良好血管能力、骨能力的组织工程化骨修复火器性骨缺损将是一种理想的、可行的修复方法。目的:探讨人血管内皮细胞生长因子121基因修饰材料在兔桡骨火器性骨缺损修复中的应用。方法:将128只家兔随机分为手术致伤组和火器伤组,每组64只。火器伤组采用56式滑膛枪发射质量为0.25 g的钢珠,建立火器伤桡骨损伤模型;手术致伤组仅用手术方法造成兔桡骨1.2 cm损伤模型。采用人血管内皮细胞生长因子121基因修饰材料进行修复处理,取家兔相关组织细胞,获得骨髓基质干细胞进行培养,制备多孔支架材料,并将获得的材料分别植入手术致伤组和火器伤组家兔桡骨骨缺损部位,分析人血管内皮细胞生长因子121基因修饰材料在兔桡骨火器性骨缺损修复中的应用。结果与结论:与手术致伤组相比,修复8,12,16周后,火器伤组家兔骨缺损部位灰度比值、健侧与修复侧桡骨的抗压缩力学比值降低(P<0.05),新生骨面积增多(P<0.05);修复2,4周后,骨缺损修复处局部血流量显著升高(P<0.05)。结果说明,与单纯手术致桡骨损伤相比,烧伤致桡骨损伤修复过程中由于局部出现了缺血缺氧,采用人血管内皮细胞生长因子121基因治疗效果更理想。人血管内皮细胞生长因子121能够对骨髓基质细胞进行修复,将其运用于火器烧伤中能够提高其合成及分泌成血管因子,提高其局部血流量、降低抗压缩力学比值,且新生骨面积较大。

急性心肌梗死模型大鼠经血管内皮生长因子121基因治疗后的血管新生(英文)

背景:血管内皮生长因子121可能是基因治疗急性心肌梗死的合适目的基因之一。目的:观察直接心肌注射重组腺病毒人血管内皮生长因子121基因(Ad-hVEGF121)对心肌梗死大鼠心脏结构、功能及新生血管影响。方法:将78只SD大鼠随机分为假手术组(n=18)、心肌梗死组(n=24)、Ad-hVEGF121组(n=19)和生理盐水组(n=17),后3组大鼠经结扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。Ad-hVEGF121组和生理盐水组结扎后10～15min分别在心肌三点注射Ad-hVEGF12和生理盐水。假手术组只开胸,不结扎左冠状动脉前降支。结果与结论:注射后2周治疗组行心脏超声检查,发现相比于假手术组,心肌梗死组、Ad-hVEGF121组和生理盐水组大鼠心肌新生毛细血管数量、体质量和左心室质量/体质量明显增加(P<0.05或P<0.01),且转染rAd-VEGF基因后心肌组织毛细血管密度显著高于生理盐水组和心肌梗死组。但4组大鼠的梗死面积、心脏结构和功能接近。提示直接心肌注射Ad-VEGF121能明显促进心肌内新血管形成。

肺癌组织环指蛋白181、转移相关基因1、血管内皮生长因子C表达及与患者临床病理特征和预后相关性分析

目的:研究肺癌组织环指蛋白181(RNF181)、转移相关基因1(MTA1)及血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达意义。方法:选择收治的100例肺癌患者,获取肺癌组织和正常肺组织,通过免疫组化法检测RNF181、MTA1及VEGF-C表达情况并进行比较。分析上述三项蛋白表达和患者病理特征的关系。此外,将所有受试者按照生存状况的差异分为死亡组及存活组,比较两组RNF181、MTA1及VEGF-C表达情况。结果:肺癌组织RNF181阳性率为24.00%,低于癌旁正常组织的75.00%,而MTA1、VEGF-C阳性率分别为73.00%、69.00%,高于癌旁正常组织的25.00%、33.00%(均P<0.05)。低分化、Ⅲ-Ⅳ期与淋巴结转移患者的RNF181表达均低于中高分化、Ⅰ-Ⅱ期与无淋巴结转移;而MTA1及VEGF-C表达均高于中高分化、Ⅰ-Ⅱ期与无淋巴结转移(均P<0.05)。死亡组RNF181表达低于存活组,而MTA1及VEGF-C表达高于存活组(均P<0.05)。结论:肺癌组织RNF181异常低表达,而MTA1及VEGF-C异常高表达,三项蛋白表达和分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及预后均密切相关。

重组人血管内皮细胞生长因子121cDNA的基因克隆、表达和鉴定

应用RT PCR方法 ,扩增人VEGF12 1cDNA基因片段 ,与酵母表达载体pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9KVEGF12 1.该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,PCR鉴定VEGF12 1cDNA与酵母染色体整合状态 ,高拷贝转化子用甲醇诱导表达 .工程菌用 5L发酵罐发酵 ,表达产物r hVEGF12 1占培养液中总蛋白量 70 %以上 .纯化产物促进牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖 。

不同HBV基因型乙肝相关肝细胞癌患者的临床特征和血管内皮生长因子及其受体在肝癌组织中的表达

目的探讨不同HBV基因型乙肝相关肝细胞癌患者的临床特征和血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1,Flk-1)在肝癌组织中的表达。方法前瞻性连续纳入2020年10月至2022年10月在郑州大学第一附属医院就诊住院的乙肝相关肝细胞癌患者200例作为研究对象,根据患者HBV基因型检测结果将患者分为HBV基因型B型组101例,HBV基因型C型组90例,HBV基因型D型组9例,分析肝功能相关指标以及VEGF和受体(Flt-1,Flk-1)的表达的差异。结果HBV基因型C型肝细胞癌患者甲胎蛋白(AFP)水平以及HBV载量、Child-Pugh评分、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1,Flk-1)表达较HBV基因型B型肝细胞癌与HBV基因型D型肝细胞癌更高。结论不同HBV基因型患者的肿瘤标志物、病毒载量以及肝功能比较有区别,对于确诊的肝细胞癌患者及时进行HBV基因型检测和VEGF及其受体(Flt-1,Flk-1)表达检测对于治疗以及预后具有指导意义。

血管内皮生长因子基因治疗大鼠脑缺血的实验研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗大鼠脑缺血的可行性,构建了pcD2/hVEGF121真核表达质粒,建立持续性大脑中动脉堵塞(MCAO)的局灶性脑梗塞模型,大鼠脑皮质直接注射法转移pcD2/hVEGF121真核表达质粒。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、VEGF免疫组织化学法、脑血管计数及梗塞面积测定等方法检测转移pcD2/hVEGF121真核表达质粒后大鼠脑中VEGF基因表达及生物学效应。结果发现,与转移空载质粒的对照组相比,转移VEGF基因后7d的大鼠脑组织中有VEGFmRNA高表达,VEGF免疫组化染色可见VEGF蛋白表达水平增高,脑血管数增多,梗塞体积缩小。因此,直接注射法转移VEGF基因能够在缺血脑组织中表达,表达产物能够发挥生物学效应,进而起到保护脑组织作用。

肺癌中血管内皮生长因子及突变型p53基因表达及其临床意义研究

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、突变型p5 3(mtp5 3)基因表达水平与肺癌病理生理学特征之间的关系。方法 采用免疫组化方法 (LSAB法 ) ,检测 12 0例肺癌组织及相应癌旁组织 ,40例肺良性病变组织中的VEGF、mtp5 3表达水平。结果 肺癌组织中VEGF、mtp5 3基因的表达水平显著高于癌旁肺组织和肺良性病变组织 (P <0 .0 1)。VEGF、mtp5 3基因表达水平与肺癌患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型均无明显关系 (P >0 .0 5 ) ,与原发肿瘤大小、细胞分化程度、淋巴结转移状态、P_TNM分期均有密切关系 (P <0 .0 1)。mtp5 3基因表达水平与VEGF表达水平呈显著正相关 (P <0 .0 1)。结论 VEGF、mtp5 3基因可能参与了肺癌的发生、发展进程 ,可以作为肺癌生物学行为恶化的一项指标。

RNAi沉默Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的抑制

目的:研究Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的影响。方法:设计合成针对Cripto基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染结肠癌LS-174T细胞。细胞分4组:空载对照组(对照组)和不同浓度(3.125、6.25和12.5 nmol/L)的siRNA组。分别于转染24、48、72 h后收集细胞,以实时定量PCR检测结肠癌细胞CriptomRNA,分别采用Northern blotting和免疫荧光标记法检测癌细胞VEGF mRNA和蛋白表达。分别收集转染72 h的12.5 nmol/L组和对照组细胞,接种于裸鼠背部。30 d后处死裸鼠,收集裸鼠肿瘤组织,对组织VEGF进行免疫组化染色,计算染色平均强度。结果:实时定量PCR检测显示,转染组CriptomRNA被有效地抑制,且呈浓度和时间依赖性。转染组细胞VEGF蛋白和mRNA明显低于对照组。裸鼠肿瘤免疫组化分析显示,转染组VEGF平均染色强度明显低于对照组。结论:Cripto基因参与了结肠癌组织血管生成的调控。采用siRNA下调Cripto基因表达,可抑制结肠癌组织血管生成。

血管内皮生长因子基因转染促进骨折愈合的实验研究

目的 :(1)寻找外源性血管内皮生长因子 (VEGF)体内转染的有效途径 ;(2 )了解外源性VEGF基因表达对于骨折愈合的促进作用。方法 :建立大鼠股骨干骨折模型 ,将Lipofectamine、pBLAST49 mVEGF质粒混合物局部注射于骨折断端的骨膜下 ,在术后不同时间点观察大体标本 ,X线摄片和HE染色比较 ,观察外源性VEGF基因在体内表达对于骨折愈合的影响。结果 :大鼠股骨骨折术后 ,pBLAST49 mVEGF基因转染组骨折愈合及重新塑形时间较对照组缩短 2周。结论 :(1)局部注射阳离子脂质体Lipofectamine、质粒混合物是一种有效的体内转染途径 ;(2 )pBLAST49 VEGF基因转染能有效促进骨折的愈合。

人血管内皮生长因子-C基因编码区cDNA的克隆与测序

目的 克隆人舌癌组织中血管内皮生长因子 (VEGF)_C功能片段的cDNA ,为进一步研究VEGF_C在口腔鳞癌中表达的意义及与淋巴转移的关系打下基础。方法 以RT_PCR法从舌鳞癌组织中克隆VEGF_C基因功能片段的cDNA ,用限制性内切酶消化和PCR筛选出阳性克隆pCRII_VEGF_C ,以SP6和T7引物完成VEGF_CcDNA的全序列测定。结果 从人舌癌组织总RNA中克隆到约 1 1kb大小的VEGF_C基因cDNA ,经测序与Genbank公布的人VEGF_C基因cDNA序列的同源性为 99 6 %。结论 从人舌癌组织中克隆得到的VEGF_C基因功能片段cDNA ,为进一步研究VEGF_C在口腔癌颈淋巴结转移中的功能效应提供了物质基础。

血管内皮生长因子基因转染促进成骨细胞增殖及其功能的实验研究

目的探讨外源性血管内皮生长因子（VEGF）基因表达在成骨细胞增殖、分化中的作用。方法利用阳离子脂质体Lipofectamine将pBLAST49-mVEGF基因导人体外培养的成骨细胞，观察外源性VEGF在成骨细胞内的表达，及其对成骨细胞生长曲线、细胞周期和成骨细胞分泌骨钙素和Ⅰ型胶原的影响。结果同步培养后第1、2d，pBLAST49-mVEGF基因转染组细胞数大于对照组，二者间差异无统计学意义（P〉0．05）；从第3d开始，二者间差异具有统计学意义（P〈0．05）。pBLAST49-mVEGF基因转染组第1～5代细胞（G2／M＋S）％明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈O．05）。pBLAST49-mVEGF基因转染组第1～5代细胞合成分泌骨钙素浓度和Ⅰ型胶原的表达均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论pBLAST49-mVEGF基因转染能促进成骨细胞的增殖和成骨活性。

小鼠胚胎干细胞在血管内皮生长因子作用下造血相关基因表达的研究

目的 研究小鼠胚胎干细胞系ES D3在血管内皮生长因子 (VEGF)的作用下表达造血相关基因的情况。方法 先将ES D3形成拟胚体 ,将拟胚体细胞转入含不同浓度VEGF和VEGF +干细胞因子 (SCF)培养基中。分为VEGF 2 0ng/ml组、VEGF 10ng/ml组、VEGF 5ng/ml组、VEGF 5ng/ml+SCF组、VEGF 10ng/ml+SCF组、VEGF 2 0ng/ml+SCF组 ;同时设不加因子的自发分化对照组。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测各组造血转录因子GATA 2和早期造血细胞阶段表达的基因c kit和 β H1表达 ,并进行定量分析。 结果 经 1周诱导培养 ,各实验组均可检测GATA 2表达 ,其中VEGF 2 0ng/ml组和VEGF +SCF组表达较强。未分化胚胎干细胞不表达c kit和 β H1mRNA ,拟胚体细胞开始表达c kit,实验组以VEGF 10ng/ml+SCF组和VEGF 2 0ng/ml +SCF组表达最强。VEGF 10ng/ml组和VEGF 5ng/ml组 ,β H1的表达分别为阴性和弱阳性 ,其他各组可检测到阳性条带 ,以VEGF 10ng/ml +SCF组表达最强 ;而自发分化组未检测到上述mRNA的表达。结论 对造血转录因子和早期造血细胞阶段表达基因的检测可进一步证实胚胎干细胞的成血分化 ,VEGF或VEGF

内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒的包装与鉴定

目的:构建内皮抑素-可溶性血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体并包装成重组腺病毒,为下一步基因治疗打下基础。方法:用PCR方法在hENDO基因的5’端引入IL_3信号肽、3’端引入弹性蛋白连接肽序列(linker),再与sVEGI基因连接,插入到pCAl3腺病毒载体中,用脂质体介导包装出重组腺病毒,PCR法对重组腺病毒进行鉴定。结果:构建完成hENDO-sVEGI融合基因重组腺病毒载体,融合基因包括IL_3信号肽、hENDO全长基因、弹性蛋白连接肽序列和sVEGI基因,总长度约1114bp,经酶切鉴定、序列分析证实克隆序列、插入方向和读码框架均正确,可包装出携带融合基因的重组腺病毒,用TCID_(50)法测定粗制重组腺病毒滴度为2×10^(11) TCID_(50)/L。结论:成功构建了hENDO-sVEGI融合基因,连接肽序列使两蛋白空间构象不受影响,IL_3信号肽保证蛋白可被分泌至胞外,完成携带融合基因的重组腺病毒的包装与鉴定,为进一步开展肿瘤基因治疗研究奠定了基础。