重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究

目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养基中培养至A6 0 0nm 为 0 .5～ 0 .6时 ,诱导表达 5h ,rhANG表达量最高达 30 %。重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量 。

重组人血管生长素的鉴定

目的 :为了鉴定自行制备的重组人血管生长素。方法 :采用凝胶扫描法分析纯度 ;ELISA等方法检测特异性 ;鸡胚绒毛尿囊膜实验检测生物活性 ,并与商品化标准品进行免疫结合性的对比研究。结果 :重组血管生长素纯度达 96% ,具有促进血管生长的生物活性 ;而且较标准品有理想的免疫结合性。结论 :该重组人血管生长素可用于进一步的实验和临床应用研究。

重组人血管生长素及其单克隆抗体的特性鉴定

目的鉴定自制重组人血管生长素(rhANG)及其单克隆抗体(mAb)。方法采用凝胶扫描法分析rhANG的纯度;ELISA等方法检测抗rhANGmAb的特异性,鸡胚绒毛尿囊膜实验检测rhANG及其mAb的生物学活性,并与商品化标准品的免疫结合性进行对比研究。结果rhANG的纯度达96%,具有促进血管生长的生物学活性;抗ANGmAb具有很好的特异性和抑制血管生长的活性;而且二者较标准品均具有良好的免疫结合活性。结论该rhANG及其mAb可用于进一步的实验和临床应用研究。

人血管生长素重组大肠杆菌发酵条件优化

考察了 Mg2 + 、Ca2 + 、NH+4、PO3-4等无机离子、初始 p H、装液量以及诱导前添加葡萄糖对重组大肠杆菌表达rh ANG和菌体生长的影响。经过优化 ,rh ANG表达量提高约 39% ,菌体干重达 1.5 9g/ L ,为工程菌发酵的扩试提供了参考。

重组人血管生长素包涵体复性条件研究

目的 摸索重组人血管生长素（rhANG）复性影响条件,以提高rhANG的复性效率.方法 超声波破碎菌体,变性萃取rhANG包涵体.分析rhANG包涵体起始浓度、氧化型、还原型谷胱甘肽比例、盐酸胍和添加精氨酸对复性的影响.结果 在0.1 mol/L Tris-HCl pH 7～8,还原型、氧化型谷胱甘肽比率为5,盐酸胍为0.2～0.5 mol/L,起始蛋白质浓度0.1～0.2 mg/mL时,rhANG蛋白复性率为60%;0.5 mol/L L-精氨酸有助于复性.结论 初步优化rhANG包涵体复性参数,为rhANG的放大制备创造了条件.

抗rhANG多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗重组人血管生长素 (recombinanthumanangiogenin ,rhANG)多克隆抗体 ,并初步应用于消化道肿瘤实验研究。方法 用重组基因工程菌表达 ,SDS法纯化的rhANG蛋白免疫新西兰兔 ,制备并纯化多克隆抗体 ,并用免疫组织化学和ELISA等方法对多克隆抗体进行测定。结果 此次获得的抗血清ELISA方法效价达 1∶12 80 0 ,检测ANG灵敏度最低为 8～ 16μg/L ,不与其他细胞因子和血清反应。该抗体与 2 0 %～ 3 0 %上消化道恶性肿瘤呈阳性反应。结论 ANG多克隆抗体对表达ANG的肿瘤组织反应特异性强 ,ELISA方法检测灵敏度高 。