苯那普利、缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察苯那普利与缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达水平的影响,探讨ACE2在高血压发病机制和药物治疗中的意义。方法12周龄雄性SHR28只,分为空白对照组(Sc)、苯那普利组(10mg/kg.d)(Sb)、小剂量缬沙坦组(10mg/kg.d)(Sl)、大剂量缬沙坦组(30mg/kg.d)(Sh),每组7只,7只雄性WKY大鼠为正常对照。药物治疗3月后,用放射免疫法测定血浆AngⅡ含量,RT-PCR法测定肾脏中ACE和ACE2mRNA的表达水平,免疫组化法比较肾脏中ACE2蛋白的表达。结果与WKY大鼠相比,SHR肾脏中ACE2mRNA及其蛋白的表达均明显降低,而ACEmRNA的表达和血浆AngⅡ水平则明显升高(P<0.05)。缬沙坦治疗后SHR血压显著下降而血浆AngⅡ水平则进一步升高,肾脏中ACE2的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。苯那普利治疗对SHR血浆AngⅡ水平及肾脏ACE2的表达则无明显影响。结论SHR体内ACE和ACE2的表达失衡可能在高血压的发病机制中有重要意义。血管紧张素受体拮抗剂(ARB)可能通过升高SHR血浆AngⅡ的水平而增加肾脏中ACE2的表达,ACE2表达的增加可能是ARB抗高血压治疗的一个新药理机制。

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠颈总动脉血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察阿托伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)颈总动脉血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响及其改善血管重构的可能作用机制。方法24只13周龄雄性SHR随机分为3组(每组8只):SHR组(0.5%阿拉伯胶浆15 mg·kg^(-1)·d^(-1))、阿托伐他汀组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦组(20 mg·kg^(-1)·d^(-1));8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组(WKY组)(0.5%阿拉伯胶浆15 mg·kg^(-1)·d^(-1))。连续灌胃给药4周后处死。放免分析法测定血浆和颈总动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度;病理图像分析系统测定颈总动脉内膜增生程度和中膜增生面积。免疫组化法检测颈总动脉ACE 2蛋白表达;RT-PCR法检测颈总动脉ACE 2 mRNA的表达。结果(1)与SHR组比较,阿托伐他汀组和缬沙坦组内膜增生程度显著降低(P<0.01),且缬沙坦组优于阿托伐他汀组(P<0.05),但2组中膜增生面积差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与SHR组比较,阿托伐他汀组、缬沙坦组颈总动脉AngⅡ浓度降低(P<0.01),血浆AngⅡ浓度、ACE 2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),且缬沙坦组优于阿托伐他汀组(P<0.05,P<0.01)。结论阿托伐他汀可显著抑制血管内膜增生,与其降低颈总动脉AngⅡ浓度、升高ACE 2 mRNA和蛋白表达有关。

血管紧张素转化酶2激动剂对动脉粥样硬化肝脏作用的研究

为了研究血管紧张素转化酶2（ACE2）在动脉粥样硬化模型的小鼠中发挥的作用,试验采用8~10周龄APOE基因敲除小鼠,分为普通饮食对照组、高脂饮食模型组、阳性药物对照组（卡托普利给药组）及ACE2激动剂组[血管紧张素转化酶2（ACE2）激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐（DIZE）给药组],皮下注射给药12周后处死,观察小鼠的肝脏病理学特征,并检测相应血清指标。结果表明：高脂饮食模型组三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）比普通饮食对照组显著升高,高密度脂蛋白（HDL）降低,且肝组织脂肪变;而给予卡托普利和DIZE的药物组后都相应降低了TG、TC、LDL含量,提高了HDL含量,并且能够很大程度地减轻肝组织的脂肪病变程度。说明动脉粥样硬化发生的进程中,血脂升高,肝脏也发生了相应病变。而ACE2激动剂DIZE和血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利一样,可以降低血脂,改善局部的肝脏病变。

hACE2转基因小鼠SARS-CoV感染后的病理变化及免疫学反应

目的观察SARS-CoV感染人血管紧张素转换酶2(hACE2)转基因小鼠引起的病理变化并初步探讨其发生的免疫学机制,为SARS研究提供可靠的动物模型。方法实时PCR测定hACE2转基因小鼠的拷贝数;用PUMC01株SARS-CoV感染hACE2转基因小鼠,光镜下观察小鼠全身组织器官的病理变化;ELISA方法检测血清特异性抗体和肺组织匀浆上清细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ变化。结果单拷贝hACE2转基因小鼠在感染SARS-CoV后肺组织出现更严重的间质性肺炎并伴有肺外多器官损伤;少数转基因小鼠血清检测到特异性IgG抗体;转基因小鼠肺组织匀浆上清TNF-α、IL-6、IFN-γ的水平明显升高。结论hACE2转基因小鼠感染SARS-CoV后出现与人类SARS患者相似的病理特征和免疫学反应,为研究SARS发病机制和药物评价提供了小动物模型。

hACE2转基因小鼠模型

血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SRAS-CoV-2)及SARS冠状病毒(severe scute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)的受体,也是新型冠状病毒的药物治疗及疫苗研发靶点。药物治疗及疫苗研发都离不开动物模型的支持,小鼠是目前各类疾病研究中应用最广泛的模型。早在2003年SARS冠状病毒来袭后,人们发现,由于小鼠与人的ACE2蛋白之间存在结构差异,造成冠状病毒对小鼠的感染率较低,为了更好研究冠状病毒的致病机理,国内外研究者建立了几种表达人源ACE2(h ACE2)的转基因小鼠模型。每种转基因小鼠由于应用技术、整合方式及小鼠品系等方面的差异,造成遗传背景及表型不同。本文重点对现有的各种h ACE2转基因小鼠模型进行介绍,利于研究者选择使用。

hACE2-KI/NIFDC小鼠主要生物学特性指标测定

目的测定自培育hACE2-KI/NIFDC转基因小鼠的生物学特性指标。方法分别测定4周龄和8周龄各10只雌性hACE2-KI/NIFDC小鼠的11项脏器系数、22项血液生理指标和13项血液生化指标,利用统计学方法分析组间差异。结果 4周龄组的5项脏器系数(脾、肺、胸腺、左肾、右肾,P<0.01)和3项血液生理指标(MCV、MCH、EOS,P<0.05)高于8周龄组,5项指标(MON%、ALP,P<0.05;心脏脏器系数、AST、P,P<0.01)低于8周龄组。结论 hACE2-KI/NIFDC小鼠生物学特性指标的测定为其应用研究提供了基础数据。

缬沙坦对自发性高血压大鼠血管中血管紧张素转化酶2 mRNA表达的影响

目的:观察血管紧张素转化酶2(ACE2)在自发性高血压大鼠(SHR)血管中的表达以及缬沙坦对ACE2mRNA表达的影响。方法:24只12周龄雄性SHR随机分为SHR组和缬沙坦组,每组各12只,另设12只同龄雄性血压正常的Wistar大鼠作为对照组。缬沙坦组大鼠给予缬沙坦30mg.kg-1.d-1灌胃,SHR组及对照组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。10周后,截取胸主动脉,光镜观察血管的病理变化,测定中膜厚度与血管腔内径之比;采用RT-PCR和免疫组织化学法检测胸主动脉中ACE2的表达。结果:与对照组比较,SHR组血管壁明显增厚,管腔变窄,且血管中ACE2mRNA和蛋白的表达均下调;而缬沙坦组ACE2mRNA和蛋白的表达明显高于SHR组。结论:高血压时血管重构可能与ACE2的表达下调有关,缬沙坦可能通过增加血管中ACE2的表达而发挥保护血管的作用。

黄芪及缬沙坦对肾型高血压大鼠心脏血管紧张素转化酶2表达的影响

目的：探讨两肾一夹高血压大鼠心脏血管紧张素转化酶2（Angiotensin-Converting Enzyme2,ACE2）mRNA、蛋白表达水平及甘肃定西黄芪（Astragalus in Gansu Dingxi,Ast）和缬沙坦（Valsartan,Val）对其表达的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠,体重180~200g,构建两肾一夹KIC高血压模型。术后随机分为5组,假手术组;②2KIC组;③Val＋2KIC组;④Ast＋2KIC组（低剂量）;⑤Ast＋2KIC组（高剂量）。在观察期末,分别测定各组大鼠体重、心脏湿重,计算出心脏重量/体重;光镜下观察心肌结构的变化;RT-PCR检测各组心肌组织ACE2mRNA,免疫组化测定其蛋白表达。结果：与假手术组比较,2KIC组、Val＋2KIC、Ast＋2KIC组（低剂量）、Ast＋2KIC组（高剂量）心脏重量/体重均升高（P〈0.05）;②与假手术组比较,2KIC组ACE2mRNA、蛋白表达显著减少;与2KIC组比较,Val＋2KIC组及Ast＋2KIC组（高剂量）经8周治疗后,ACE2mRNA、蛋白表达量增加（P〈0.05）。结论：高血压大鼠心脏ACE2mRNA、蛋白表达减少,Ast＋2KIC组（高剂量）及Val＋2KIC组可上调高血压大鼠心脏ACE2水平,此作用可能说明甘肃定西黄芪具有调节肾素-血管紧张素系统的作用。

缬沙坦对自发性高血压大鼠肾组织中血管紧张素转化酶2的影响

目的:研究缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)肾组织中血管紧张素转化酶(ACE)2表达的影响,进一步探讨ACE2对肾组织的保护作用。方法:选取12周龄雄性SHR24只,随机分为缬沙坦组和SHR组,每组12只;另取正常雄性大鼠(WKY)12只为对照组。缬沙坦组给予缬沙坦30mg·kg-1·d-1灌胃,SHR组及对照组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。10周后处死大鼠,取出肾组织,用HE染色法观察各组大鼠肾组织的病理变化;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组大鼠肾脏组织中ACE2的表达;放射免疫法检测大鼠血浆及肾脏组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及Ang(1-7)的水平。结果:与对照组相比,缬沙坦组及SHR组大鼠肾组织中ACE2的表达明显降低(P<0.05);与缬沙坦组相比,SHR组大鼠组织中ACE2的表达降低(P<0.05)。与对照组相比,缬沙坦组及SHR组大鼠血浆及肾组织中AngⅡ水平明显增高,Ang(1-7)水平明显降低(均P<0.05);与缬沙坦组相比,SHR组AngⅡ水平降低,Ang(1-7)水平升高(均P<0.05)。结论:缬沙坦能够上调SHR肾组织中ACE2的表达,并对肾脏起保护作用。

血管紧张素转化酶2在慢性阻塞性肺疾病大鼠中的表达和作用机制

血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）2是ACE的同源物，属于肾素-血管紧张素-醛固酮系统，其功能与ACE相反，在平衡血管紧张素（angiotensin conveaingenzyme，Ang）II功能中起重要作用，

三七总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用

目的研究三七总皂苷(PNS)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)所致大鼠心肌肥厚的保护作用。方法5mg/kg.d连续7d建立大鼠心肌肥厚模型。造模第二天开始ipPNS25和50mg/kg.d连续14d,测定全心重量指数(HW/BW)、左心室重量指数(LVW/BW即LVI);采用试剂盒用分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)和一氧化氮(NO)含量,及Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性;用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量。结果ISO模型组大鼠的HW/BW、LVI明显升高;左心室Hyp、AngⅡ含量增高,NO水平下降,Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性降低。PNS能明显提高心肌组织NO水平及Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性,降低胶原的含量,抑制AngⅡ产生,使HW/BW及LVI下降,抑制心肌肥厚。结论PNS对ISO所致大鼠心肌肥厚具有保护作用。

BD-77抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药效及机制探讨

目的:利用人血管紧张素转化酶2(hACE2)转基因小鼠模型,进行BD-77抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药效学研究,并初步探讨BD-77抗SARS-CoV-2的作用机制。方法:建立SARS-CoV-2奥密克戎(Omicron)和德尔塔(Delta)变异株感染VeroE6细胞模型并给予BD-77,观察BD-77体外抗病毒作用效果;通过试剂盒体外检测BD-77对SARS-CoV-2病毒(Delta/Omicron)刺突S蛋白与血管紧张素转化酶2(ACE2)结合的影响;采用色谱法检测BD-77对新冠病毒S蛋白和N蛋白的结合作;hACE2转基因C57BL/6小鼠分为空白组、SARS-CoV-2感染组、BD-77给药37.5、75 mg·kg^(-1)组,每组各8只,建立SARS-CoV-2感染hACE2转基因小鼠致肺炎模型,观察小鼠生存情况,检测小鼠肺组织病毒滴度并观察肺组织病变情况。结果:BD-77在体外对Omicron和Delta变异株有一定的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为526.3、653.0 mg·L^(-1);BD-77对SARS-CoV-2病毒的WT、Omicron和Delta变异株S蛋白与ACE2的结合无明显抑制作用;BD-77与新冠病毒S蛋白、N蛋白无结合作用;空白组小鼠无死亡,SARS-CoV-2感染小鼠死亡率为75%、小鼠肺组织中有大量病毒复制、且肺组织、间质有大面积炎症渗出;与模型组比较,BD-77给药37.5 mg·kg^(-1)组和75 mg·kg^(-1)组能够降低小鼠死亡率、明显降低小鼠肺组织中病毒滴度(P<0.05)并改善肺部病变情况。结论:BD-77显示出在体内外对SARS-CoV-2病毒的显著抑制效果。然而,其作用机制并非直接抑制病毒或干预病毒与宿主的结合过程。这一发现提示了对BD-77的作用机制需要通过进一步的实验来深入研究和阐明。

ACE2和ACE在自发性高血压大鼠心肌中的变化

目的:观察自发性高血压大鼠(SHR)心肌的血管紧张素转化酶(ACE)和ACE2的表达,以探讨ACE2和ACE在高血压发生发展中的变化。方法:取15只SHR,处死,分离左心室,行RT-PCR、Western blot蛋白质免疫印迹和免疫组织化学检测ACE及ACE2表达;同步取10只WKY大鼠作为正常血压对照组。结果:SHR组心肌ACE的mRNA和蛋白质表达都显著高于WKY组[(1.68±0.34)∶(0.33±0.12),P<0.05;(1.21±0.14)∶(0.71±0.11),P<0.05],而ACE2的mRNA和蛋白质表达皆明显低于WKY组[(0.50±0.15)∶(1.16±0.24),P<0.05;(0.71±0.24)∶(1.22±0.14),P<0.05)]。免疫组织化学染色显示,SHR组ACE的阳性率明显高于WKY组(87%∶50%,P<0.05),而ACE2的阳性率明显低于WKY组(27%∶70%,P<0.05)。结论:SHR心肌ACE明显升高,ACE2显著降低;SHR高血压发生发展过程中存在着ACE和ACE2表达的失衡。

替米沙坦对球囊损伤后2型糖尿病大鼠颈动脉内膜增生及ACE2表达的影响

目的:观察2型糖尿病大鼠颈动脉球囊导管损伤后血管内膜血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达,初步探讨替米沙坦对球囊导管损伤后动脉内膜增生的作用及机制,血管ACE2表达的调节作用及对其的影响。方法:30只7周龄雄性SD大鼠高糖高脂饮食4周后腹腔注射链尿佐菌素(STZ,35mg·kg-1)建成2型糖尿病大鼠模型,将建成的模型经颈外动脉行球囊损伤成功后将大鼠分成4组,每组8只:正常对照组(NC)、2型糖尿病组、单纯球囊损伤组、替米沙坦组(0.8mg·kg-1.d-1)。药物治疗2周后,用RT-PCR法测定颈动脉中ACE2mRNA的表达水平,免疫组化法比较ACE2蛋白的表达。结果:与正常SD大鼠相比,2型糖尿病大鼠颈动脉内膜ACE2mRNA及其蛋白的表达均明显降低,分别降低30.1%,57.1%(P<0.05).与糖尿病模型组比较,替米沙坦组ACE2mRNA及蛋白水平增加(P<0.01),与单纯损伤组比较ACE2mRNA和蛋白的表达亦明显增加,分别增加44.0%和63.6%(P<0.01)。结论:(1)动脉内膜ACE2表达水平的降低可能是糖尿病大鼠动脉病变的发病机制之一;(2)ARB可能是通过增加动脉内膜局部ACE2的表达而发挥血管保护作用。

铁蛋白-AHLL纳米颗粒的稳定性及肠吸收研究

使用马脾铁蛋白包封降血压活性肽AHLL,通过紫外、荧光和圆二光谱研究AHLL荷载对HSF结构的影响。在此基础上,研究铁蛋白包封对AHLL稳定性以及体外胃肠道消化过程中血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的影响作用,并开展复合纳米颗粒(HSF-AHLL)的细胞转运试验。结果表明,AHLL载运显著降低了HSF的α-螺旋结构和β-转角结构,而β-折叠结构含量和无规卷曲含量增加,另外,包埋后HSF四重轴通道上的色氨酸微环境被改变。HSF-AHLL的热稳定性、pH稳定性和紫外稳定性明显高于游离AHLL。在模拟胃消化过程中,结合态与游离态AHLL的ACE抑制活性在胃液中下降明显,而在肠液中变化不明显。HSF-AHLL在Caco-2细胞上的转运试验具有一定方向性。吸收(AP→BL)大于外排(BL→AP),HSF-AHLL在Caco-2细胞单层膜上以细胞旁路转运为主,内吞抑制剂和肽载体抑制剂对HSF-AHLL的转运没有明显影响,而脱氧胆酸钠能打开细胞间通路促进其转运;HSFAHLL的转运与多药耐药蛋白抑制剂形成竞争性抑制,HSF-AHLL的转运对温度具有一定的依赖性,属于能量依赖型转运。

通心络对自发性高血压大鼠肾损害的保护作用及机制

目的研究通心络对自发性高血压大鼠(SHR)肾损害的干预作用及机制。方法 10周龄雄性SHR 48只随机分成5组:SHR对照组(同龄Wistar大鼠作对照),氨氯地平干预组和氨氯地平+不同剂量通心络(0.5,1.0,1.5g·kg-1·d-1)干预组。20周后,测血压、留尿后处死,取肾组织检测指标。测尿微量白蛋白(UMA)和β2微球蛋白(β2MG),测血管紧张素转化酶2、血管紧张素Ⅱ1型受体基因表达。结果与同龄京都威斯特(WKY)大鼠比较,10周龄SHR的尿β2MG、肾组织AT1R表达明显增加而ACE2明显减少。与单用氨氯地平组比较,伍用通心络组大鼠的尿β2MG、UMA及肾组织AT1R表达明显减少而肾组织ACE2表达明显增加。结论氨氯地平伍用通心络能降低蛋白尿、减轻高血压病肾损害的作用可能是通过增加肾组织ACE2、下调AT1R表达来实现的。