色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞的影响

目的观察几种色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞形态及功能的影响。方法体外培养正常表皮黑素细胞,分别加入合适浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、氢醌(HQ)、烟酰胺(NAA)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和维生素C磷酸酯镁(AP-Mg)干预细胞72h,测定酪氨酸酶活性和黑素生成量。用黑素体相关蛋白单克隆抗体(NKI-beteb)染色鉴定黑素细胞,观察并摄片。结果3mmol/LEGCG,0.5mmol/L HQ,6mmol/L AP-Mg与黑素细胞共同孵育72h后,其细胞酪氨酸酶活性及黑素生成受到抑制,但只有EGCG组细胞形态发生变化;50nmol/Lα-MSH干预后,细胞酪氨酸酶活性及黑素生成显著增加,形态改变较显著。lmg/mL NAA组细胞酪氨酸酶活性无改变,而黑素生成减少,细胞异形化。结论EGCG,HQ,NAA,AP-Mg和α-MSH对黑素细胞都有显著的影响,虽然作用于黑素细胞的机制有所不同,但也有一些相似的地方,其具体机理有待于进一步研究。

miR-223-3p对H_(2)O_(2)诱导的人表皮黑素细胞氧化应激反应和生物学功能的影响

目的 探讨miR-223-3p的表达对H_(2)O_(2)诱导的人表皮黑素氧化应激反应及生物学功能的影响。方法 建立H_(2)O_(2)诱导的人表皮黑素细胞氧化应激白癜风细胞模型,将miR-223-3p模拟物、miR-223-3p抑制剂以及阴性的对照物分别转染至人表皮黑素细胞氧化应激白癜风模型,并利用qRT-PCR测定miR-223-3p的表达;通过WST-1法和TBA法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量活性;通过CCK-8法测定细胞增殖;流式细胞术测定细胞周期、凋亡和线粒体膜电位;使用生物信息软件预测FBXW7为miR-223-3p的潜在靶基因,并采用双荧光素酶报告基因实验加以证明。结果 成功确定了构建白癜风氧化应激细胞模型的H_(2)O_(2)的浓度为0.4 mmol/L,miR-223-3p模拟物可明显提高H_(2)O_(2)诱导的人表皮黑素细胞增殖率及SOD活性,改善细胞线粒体膜电位,降低细胞凋亡率及MDA和ROS含量,而miR-223-3p抑制剂组作用效应则相反。同时过表达miR-223-3p可降低氧化应激损伤的人表皮黑素细胞在G0/G1期的比例,提高在S期和G2/M期细胞的比例。同时验证了FBXW7是miR-223-3p的潜在靶基因。结论 过表达miR-223-3p可对人表皮黑素细胞H_(2)O_(2)诱导的氧化应激损伤起到一定的保护作用,在H_(2)O_(2)诱导的人表皮黑素细胞增殖和凋亡中发挥重要作用。

PM2.5对人表皮黑素细胞自噬水平的影响

目的研究空气细颗粒物(PM2.5)对人表皮黑素细胞自噬水平的影响。方法收集湖北黄冈市区空气中的PM2.5,分离并提取其水溶性及非水溶性成分,以不同的终浓度处理体外培育人表皮黑素细胞。采用单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测PM2.5对人表皮黑素细胞自噬的影响、采用免疫组化和蛋白印迹法检测PM2.5作用前后人表皮黑素细胞自噬标记性蛋白LC3-II/I的含量表达的差异。结果随着PM2.5水溶性及非水溶性成分浓度的升高,黑素细胞自噬体及自噬标志蛋白LC3-II/I的表达均随之升高,自噬反应明显增强(P<0.01)。蛋白印迹结果表明,在相同浓度下,PM2.5非水溶性成分对LC3-II/I表达的促进作用较PM2.5水溶性成分更强(P<0.01)。结论PM2.5可诱导人表皮黑素细胞发生自噬,并与PM2.5浓度有明显相关性,其机制可能与PM2.5对人表皮黑素细胞的氧化应激损伤有关。

萝卜硫素通过下调Traf6/TAK1信号传导抑制UVB诱导黑素生成的机制研究

目的:研究萝卜硫素对中波紫外线(UVB)照射后黑素细胞产生黑素能力的抑制效应及其对Traf6/TAK1信号传导的影响。方法:采用人表皮黑素PIG1细胞为研究模型,分为对照组(Control)、模型组(Model,UVB照射)、萝卜硫素处理组(10、20、40μM)。CCK8法分析PIG1细胞增殖情况,氢氧化钠裂解法分析黑素含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析优黑素含量,Westernblot技术检测小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、TRP-2、肿瘤坏死因子相关受体因子6(Traf6)及转录生长因子β-活化激酶1(TAK1)表达。结果:与对照组比较,UVB照射能诱导PIG1细胞黑素及优黑素含量显著升高(P<0.05),还能促使MITF、TYR、TRP-1、TRP-2、Traf6及p-TAK1蛋白表达水平显著增高(P<0.05);与模型组比较,不同浓度萝卜硫素能降低PIG1细胞黑素及优黑素的生成(P<0.05),还能显著抑制MITF、TYR、TRP-1、TRP-2、Traf6及p-TAK1蛋白表达(P<0.05),呈现出剂量依赖性。结论:萝卜硫素通过抑制Traf6/TAK1信号传导降低UVB诱导PIG1细胞黑素生成。