黄芪甲苷通过高尔基体应激调控高糖诱导RGC-5细胞氧化应激、凋亡、自噬的机制研究

目的:探究黄芪甲苷对高糖诱导RGC-5细胞氧化应激、凋亡、自噬的影响,并探究其与高尔基体应激之间的关系。方法:将不同浓度葡萄糖(5、35 mmol/L)处理的RGC-5细胞设为正常(NG)组、高糖(HG)组;不同浓度黄芪甲苷(20、40、60、80、100μmol/L)处理高糖RGC-5细胞,筛选最适浓度60μmol/L。将si-NC、si-高尔基磷蛋白3(GOLPH3)转染至高糖和黄芪甲苷共处理的RGC-5细胞,设为黄芪甲苷+si-NC组、黄芪甲苷+si-GOLPH3组。细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3Ⅰ)、自噬蛋白(p62)、高尔基体外膜蛋白(GOLPH3)的蛋白表达;实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测GOLPH3表达。结果:与NG组相比,HG组RGC-5细胞存活率明显降低,ROS、MDA明显升高,SOD明显降低,细胞凋亡率明显升高,LC3Ⅱ蛋白明显升高,LC3Ⅰ、p62蛋白明显降低,GOLPH3的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。黄芪甲苷(20、40、60、80、100μmol/L)处理高糖诱导RGC-5细胞最适浓度为60μmol/L。黄芪甲苷明显反向调控HG组细胞上述指标。沉默GOLPH3能够明显增强黄芪甲苷对高糖诱导RGC-5细胞中上述指标的负向调控。结论:黄芪甲苷可减轻高糖诱导RGC-5细胞的损伤,抑制高糖诱导的氧化应激、凋亡和自噬,其潜在的机制与激活高尔基体应激有关。