非小细胞肺癌生物标记物角蛋白19基因的克隆、表达及纯化

目的克隆人角蛋白19（CK19）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础。方法从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA，经RT—PCR合成eDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增目的片段，构建pET．32a—CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体，在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化，并进行SDS—PAGE及Westernblot鉴定。结果经PCR扩增后得到一条420bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。初步结果鉴定表明，表达和纯化的融合蛋白，与预期结果一致。结论成功克隆CK19基因，并获得高纯度的CK19融合蛋白，为进一步制备体外诊断试剂打下基础。