人转化生长因子β1基因转染骨髓基质干细胞复合藻酸钙修复骨软骨缺损

目的:拟利用人转化生长因子β1基因转染骨髓基质干细胞,再与可降解藻酸钙材料复合构建具有较好生物学活性的组织工程化人工骨软骨,以期获得良好的软骨间整合。方法:雄性12个月龄的崇明山羊18只,由上海交通大学附属第九人民医院动物实验中心提供。携带人转化生长因子β1基因的重组腺病毒由上海交通大学附属第九人民医院骨科研究室提供。制备藻酸钙凝胶的氯化钙、藻酸钠为Gibco公司产品。从羊髂嵴抽取8mL骨髓,贴壁法分离培养骨髓基质干细胞,传至第3代以携带人转化生长因子β1基因的重组腺病毒转染过夜。18只山羊均于双膝股骨内髁负重区建立骨软骨缺损模型,造模后分为3组,6只/组:转染细胞-藻酸钙组将转染人转化生长因子β1基因的骨髓基质干细胞悬于1.2%藻酸钠中,调整细胞密度为5×1010L-1,吸取5mL注入骨软骨缺损处,随后缓慢滴入过量的2.5%氯化钙,使氯化钙与藻酸钠发生交联反应形成藻酸钙凝胶。复合对照组同法注入未转染人转化生长因子β1基因的骨髓基质干细胞-藻酸钙凝胶,模型组不给予任何干预。转染后Westernblot法检测细胞外源基因的表达。移植后组织形态学检查及缺损评分。结果:人转化生长因子β1基因转染后,骨髓基质干细胞表达人转化生长因子β1,并分泌细胞外基质Ⅱ型胶原及Aggrecan。移植后24周,转染细胞-藻酸钙组缺损获得类透明样软骨修复,复合对照组及模型组均为纤维组织或纤维样软骨修复。与模型组比较,移植后第12,24周复合对照组、转染细胞-藻酸钙组骨软骨缺损组织形态学评分均明显升高(P<0.05),且转染细胞-藻酸钙组升高幅度显著大于复合对照组(P<0.05);转染细胞-藻酸钙组缺损评分随着修复时间的延长而明显升高(P<0.05)。结论:实验成功将组织工程学与分子生物学有机结合,经基因修饰的骨髓基质干细胞可使人转化生长因子β1持续高效发挥作用,并逐步转化为成熟的软骨细胞且分泌软骨基质,与藻酸钙复合修复骨软骨缺损效果满意。

人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化

目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.4 2℃温控诱导表达 .采用谷胱甘肽法 ,对重组蛋白进行复性 .通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白 .用MTT法测定重组蛋白的活性 .结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF - β1的表达量约为 15 %.重组蛋白的复性率达到30 %.经纯化获得了银染一条带的重组蛋白 .测活表明重组蛋白具有较强的生物活性 .结论 :人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达 ,获得了具有生物活性的重组TGF - β1.

联合检测支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α及人转化生长因子β1的临床意义

目的探讨结缔组织疾病与其他病因所致间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和转化生长因子β1(transform growth factorβ1,TGF-β1)的差异。方法 2010年6月至2011年5月在我院诊治的13例结缔组织疾病所致间质性肺疾病(interstitial lung disease with connective tissue disease,CTD-ILD)患者(CTDILD组)、12例其他病因所致的间质性肺疾病(NCTD-ILD)患者(NCTD-ILD组)和21例同期健康体检者(对照组),均采用ELISA法测定BALF中TNF-α及TGF-β1水平。结果 CTD-ILD组和NCTD-ILD组两项因子均明显高于对照组,且CTD-ILD组高于NCTD-ILD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BALF中TNF-α及TGF-β1水平差异有助于间质性肺疾病的诊断,两项因子联合检测对于CTD-ILD的鉴别诊断亦有提示意义。

人转化生长因子β1在大肠杆菌胞内表达的研究

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFβ)是细胞增殖、分化的重要调节蛋白之一,同时还参与了细胞外基质形成、胚胎发育、骨重建等多项病理和生理过程,并在创伤愈合、免疫抑制。

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明。

人转化生长因子β1成熟肽基因的克隆及序列测定

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了人TGF β1基因的克隆及其在真核细胞中的表达后,准备进行其在大肠杆菌中的高效表达研究。

人转化生长因子βlmRNA定量检测在肝纤维化病人中的应用研究

目的：建立实时定量RT—PCR检测人转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)的方法，对慢性肝炎肝纤维化患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中TGF-β1 mRNA进行定量检测。方法：在TGF-β1基因的外显子1和2之间设计一对引物和一条TaqMan—MGB探针；构建TGF-β1质粒克隆，以T7 RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA作为标准品，根据10倍系列稀释cRNA标准浓度对数和其循环域值(Cycle threshold，Ct)制作标准曲线，检测PBMC中TGF—β1 mRNA含量；并对本方法进行方法学评价。结果：重组质粒测序显示插入的片断为TGF—β1 mRNA特异性片断，成功的建立了实时定量RT—PCR检测TGF-β1 mRNA方法，灵敏度达6．81拷贝，线性范围为6．81～6．81×10^8拷贝，且重复性好，批内、批间变异系数分别为1．28％-2．27％和2．56％-2．61％，临床应用显示，27例肝纤维化病人PBMC中TGF-β1表达量为1．20×10^8(1．80×10^7～9．80×10^7)拷贝数／10^5细胞，显著高于正常对照组3．30×10^7(7．24×10^6～5．00×10^7)拷贝数／10^5细胞(P<0．05)。结论：实时定量RT-PCR检测TGF-β1 mRNA具有敏感、特异、快速、高效等特点，为TGF—β1 mRNA作为肝纤维化的诊断指标提供方法学依据。

抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定

目的制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1(TGF-β1)的纳米抗体。方法构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进行巢式PCR,扩增抗体重链可变区(VHH),并构建VHH噬菌体展示文库;利用ELISA筛选能与TGF-β1重组蛋白特异性结合的抗体株,原核表达并纯化抗TGF-β1的纳米抗体;利用免疫印迹、免疫荧光和ForteBio Octer等方法鉴定纳米抗体的特异性及亲和力。结果成功构建cFUGW-TGF-β1表达载体并纯化了3 mg TGF-β1蛋白;羊驼经过5次免疫后得到容量为1.2×108的TGF-β1-VHH噬菌体展示文库;通过4轮ELISA筛选,得到7株能与重组TGF-β1蛋白特异性结合的抗体株;免疫印迹及免疫荧光实验结果均显示原核表达纯化的TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性识别肺癌细胞系NCI-H520表达的天然TGF-β1;ForteBio Octer结果显示B3、C8与重组TGF-β1的亲和力分别达到1.48×10-9 mol/L、9×10-9 mol/L。结论TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性结合TGF-β1,特异性强、亲和力高,或可开发用于肿瘤的免疫治疗。

重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr^-细胞中的稳定表达和纯化

构建了含重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株.于14L细胞发酵罐进行扩大培养,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测得表达量在3mg/L左右.采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化,获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97%,得率在25%以上.通过基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhTGF-β1的分子量为25.470ku,与理论分子量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,与理论的氨基酸序列一致.rhTGF-β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性,测定其比活为3.2×107 IU/mg,与商品化的rhTGF-β1标准品相当.本研究为进一步规模化制备rhTGF-β1奠定了基础.

重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。

三七总皂苷对人转化生长因子-β1诱导的伤口愈合及JAK2信号通路的影响

目的探讨三七总皂苷对人转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))诱导的伤口愈合和JAK2信号通路的影响。方法体外培养人角质形成细胞HaCaT,采用5 ng/mL的TGF-β_(1)刺激HaCaT细胞建立皮肤损伤模型,采用100μg/mL的三七总皂苷干预TGF-β_(1)刺激的HaCaT细胞,实验分为空白对照(Con)组、模型(TGF-β_(1))组和三七总皂苷处理(NT)组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期分布,划痕实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测增殖和迁移相关分子增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2、MMP-9)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析JAK2信号通路JAK2的磷酸化水平。结果与Con组比较,TGF-β_(1)组细胞增殖活力、克隆形成数[(107.61±10.63)个vs(44.95±4.77)个]、S期[(33.16±3.13)%vs(22.32±2.04)%]和G2/M期[(18.12±1.09)%vs(13.62±1.04)%]细胞比例、相对迁移率[(1.00±0.09)vs(0.54±0.05)]、迁移细胞数[(127.76±11.86)个vs(54.16±5.04)个]、PCNA[(1.00±0.10)vs(0.41±0.06)]、MMP-2[(1.00±0.09)vs(0.62±0.08)]和MMP-9[(1.00±0.09)vs(0.57±0.07)]的表达以及JAK2的磷酸化水平[(0.20±0.02)vs(0.07±0.01)]降低,G0/G1期细胞比例[(48.72±4.75)%vs(64.06±5.66)%]升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,NT组细胞增殖活力、克隆形成数[(44.95±4.77)个vs(89.24±7.97)个]、S期[(22.32±2.04)%vs(31.04±2.87)%]和G2/M期[(13.62±1.04)%vs(17.60±1.16)%]细胞比例、相对迁移率[(0.54±0.05)vs(0.87±0.09)]、迁移细胞数[(54.16±5.04)个vs(105.49±11.40)个]、PCNA[(0.41±0.06)vs(1.47±0.14)、MMP-2[(0.62±0.08)vs(1.37±0.14)]和MMP-9[(0.57±0.07)vs(1.44±0.14)]的表达以及JAK2的磷酸化水平[(0.07±0.01)vs(0.45±0.05)]升高,G0/G1期细胞比例[(64.06±5.66)%vs(51.36±4.48)%]降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论三七总皂苷通过提高TGF-β_(1)刺激的HaCaT细胞增殖和迁移能力来促进伤口愈合,其作用机制可能与激活JAK2信号通路有关。

人转化生长因子TGF-β_3基因合成及其在大肠杆菌中的表达

目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β3 (TGF β3 )的基因工程菌。方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β3 的cDNA ,将该cDNA片段插入表达载体pET3c的表达框架中 ,构建了表达菌株BL2 1/pET TGF β3 。IPTG诱导表达。通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白。用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性。结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF β3 的表达量占菌体总蛋白 2 5 %以上。经纯化获得了银染一条带的重组蛋白。免疫学检测表明重组蛋白具有较强的抗原特异性。结论 :人转化生长因子 β3 在大肠杆菌中实现了高效表达 ,获得了具有免疫原性的重组TGF β3 。

转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达

目的 :构建人转化生长因子 β2的真核表达载体 pcDNA3.1(+) /TGF - β2 ,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法 :用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF - β2全长cDNA ,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将TGF - β2的cDNA构建到真核表达载体 pcDNA3.1(+)上 ,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术 ,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中 ,体外单层培养。分别于转染后 2 4h和 4周利用RT -PCR和Western -Blotting方法检测目的基因的表达情况。结果 :经琼脂糖凝胶电泳及测序证实 ,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF - β2cDNA序列完全相同。pcDNA3.1(+) /TGF - β2酶切片段的长度与理论大小相符。转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF - β2的表达。结论 :pcDNA3.1(+) /TGF - β2真核表达载体构建成功 。

重组人转化生长因子β3对成纤维细胞作用的观察

目的 观察重组人转化生长因子 β3(recombinehumantransforminggrowthfactorβ3,rhTGFβ3)对成纤维细胞的作用 ,探讨其可能机制。 方法 取体外培养的人正常皮肤成纤维细胞(normalskinfibroblast,NSFb)和增生性瘢痕成纤维细胞 (hypertrophicscarfibroblast,HSFb) ,经不同浓度的rhTGFβ3处理 ;另设不含rhTGFβ3的DMEM培养液相应细胞组作为对照。通过放射免疫和Northernblot杂交法 ,观察NSFb和HSFb中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及转录水平mRNA表达的变化。 结果 (1)NSFb和HSFb中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达有明显不同 ;(2 )与对照组相比 ,经rhTGFβ3处理的各实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原合成明显增加 (P <0 .0 0 1) ,Ⅰ Ⅲ型前胶原的比例变小 ;(3)rhTGFβ3对NSFb和HSFb生物学作用的影响呈明显的量效关系。在相同剂量作用下 ,HSFb的PCⅠ、PCⅢ含量高于NSFb。 结论 rhTGFβ3能有效提高成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和Ⅰ、Ⅲ型构成比中Ⅲ型胶原的相对含量 。

人转化生长因子β1抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原融合肽苗的构建与表达

目的原核表达、纯化人转化生长因子β1(TGFβ1)抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的基因工程融合肽苗,并测定其抗原性。方法利用聚合酶链反应(PCR)法获得人TGFβ1抗原决定簇成熟编码区编码79-108位氨基酸的32肽基因片断,将其嵌合于HBcAg主要免疫优势区,构建符合开放读码框要求的重组嵌合表达质粒pET28a/HBcAg1-71-TGFβ132-HBcAg89-144,在大肠杆菌BL-21(DE3) 中表达,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸亲和层析法纯化蛋白。电镜观察,酶联免疫吸附法及western blot检测融合蛋白的TGF β1和HBcAg抗原性。结果原核表达融合蛋白相对分子量为2.46×104,与理论预测一致,能形成颗粒,较天然的HBcAg颗粒大;具有TGFβ1抗原性而无HBcAg抗原性。结论构建的pET28a/ CTC融合蛋白可诱导产生抗TGFβ1抗体,为进一步动物实验及阻断TGFβ1抗纤维化治疗奠定基础。

人截断型转化生长因子β受体Ⅱ真核表达载体的构建和表达

目的构建无细胞内段基因的人转化生长因子βⅡ型受体（△TβRⅡ）的真核表达载体pEGFP／△TβRⅡ，转染L02细胞以表达融合蛋白EGFP／△TβRⅡ，并检测其生物学活性。方法以质粒H2-3FF为模板，用PCR方法扩增得到人转化生长因子βⅡ型受体（TpRⅡ）胞外段和跨膜段的cDNA，将该cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N2上，构建成pEGFP／△TβRⅡ重组质粒。经双酶切和核酸测序鉴定，将该重组质粒转染L02细胞，用倒置荧光显微镜观察融合蛋白EGFP的表达，并检测其生物学活性。结果L02细胞转染pEGFP／△TβRⅡ重组质粒后，在荧光显微镜下可以观察到融合蛋白EGFP的表达，所表达的蛋白能显著减轻TGF-β1对L02细胞G1～S期的阻滞作用。结论成功构建了pEGFP／△TβRⅡ重组质粒，并表达了有活性的融合蛋白EGFP／△TβRⅡ，为进一步探讨其生物学效应奠定了基础。

局部注射重组人转化生长因子对大鼠正畸牙移动的影响

目的:探讨局部注射重组人转化生长因子(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动速度的影响。方法:80只模型大鼠随机分为实验组和对照组,每组又按1、4、7、10和14 d再分为5个小组,每小组8只。实验组从加力的第1天开始,每2 d在大鼠加力侧上颌第一磨牙颊侧黏膜下注射rhTGF-β10.1 mL(5 ng/mL),对照组注射相同容量的PBS。加力后依实验设计时间分别处死每1小组大鼠。体视显微镜观察并采集图像,运用计算机图像分析软件测量牙移动的距离,同时应用TRAP组织化学染色观察不同时段压力侧破骨细胞数量的变化,采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:局部注射rhTGF-β1的牙移动速度较对照组快,在加力后第7天,牙移动距离差异显著(P<0.05);第10天和第14天相比,差异显著(P<0.01)。实验组压力侧破骨细胞的TRAP阳性细胞数较对照组显著增多(P<0.01)。结论:局部注射rhTGF-β1增强了大鼠正畸牙破骨细胞的活性,促进了破骨细胞的骨吸收功能,加速了正畸牙移动。

Eudragit S-100对人转化生长因子β1(TGF-β1)复性的促进作用及其机制

为考察一种对pH较为敏感的多聚化合物聚丙烯酸树脂Eudragit S-100对人转化生长因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)复性的作用,将以包涵体形式存在TGF-β1进行变性,并将变性蛋白直接加入到含有不同浓度Eudragit的蛋白复性缓冲液中。采用MTT法、荧光分光光度法、圆二色谱以及高效液相色谱法等方法来比较分析不同浓度Eudragit S-100对变性TGF-β1的复性促进作用。实验结果表明,在Eudragit S-100作用下TGF-β1的复性产率比普通稀释复性法显著增高,且最高达到53%,研究还表明Eudragit S-100的促进蛋白复性的作用是基于Eudragit S-100与TGF-β1发生了特异性的离子结合反应。通过这一反应,Eudragit S-100遮蔽了蛋白多肽间的疏水基团,有效地抑制了蛋白的聚集进而发挥其促复性功能。

兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究

目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。

人转化生长因子-β1转基因表达对大肠癌细胞(HT-29)体内生物学行为的影响

为证实 TGF-β1转基因表达对 HT-29细胞株体内生物学行为的影响,将正反义 TGF-β1基因转染后克隆出的抗性细胞株分别接种棵鼠皮下。结果证实:TGF-β1基因表达对裸鼠移植瘤产生明显的抑制作用,导致出瘤时间延长,肿瘤增殖速度减慢。TGF-β1抑制大肠癌细胞发生发展作用机制可能与 TGF-β1基因表达产物启动细胞凋亡有关。