外周血神经丝蛋白轻链多肽含量与神经压迫性疼痛程度相关性研究

目的探讨外周血神经丝蛋白轻链多肽(Nefl)水平与神经根性颈椎病(CSR)疼痛程度的相关性,并评估其是否可作为CSR进展的生物标志物。方法健康SD大鼠18只,随机数字表法分为2组,Sham组(9只)和大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型(CCI)组(9只)。Sham组暴露坐骨神经后缝合皮肤,CCI组暴露坐骨神经后先环扎再缝合皮肤;于术前,术后1、3、7、14 d采用电子测痛仪检测2组大鼠机械缩足反应阈值(MWT);并采集外周血进行定量蛋白质组分析,采用ELISA方法检测Nefl蛋白表达水平。将80例CSR患者作为研究组,同期体检的24例健康人群作为对照组,收集疼痛视觉模拟评分(VAS)结果,采用ELISA方法检测外周血Nefl蛋白表达;Spearman秩相关系数法评价外周血Nefl表达水平随疼痛程度的变化规律。结果CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 dMWT持续下降;3、7、14 d时MWT显著低于Sham组(P<0.01);TMT标记定量蛋白质组分析显示Nefl蛋白表达显著上调,Log(foldchange)=1.14,P<0.05;CCI组大鼠术前,术后1、3、7、14 d外周血Nefl蛋白表达量持续上升,Sham组3、7、14 d逐渐下降,MWT与大鼠外周血Nefl蛋白表达量呈负相关(r=-0.662,P<0.01)。CSR患者外周血Nefl表达显著高于健康人群(P<0.01),VAS为8分患者显著高于VAS为6分的患者(P<0.01),VAS与外周血Nefl呈正相关(r=0.41,P<0.01)。结论CCI模型大鼠和CSR患者外周血Nefl表达显著增加,且与疼痛程度相关,Nefl可作为临床上CSR病情进展评估的生物标志物。

血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白、N末端脑钠肽前体、神经酰胺风险评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、神经酰胺风险(CERT)评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭(CHF)患者预后的评估价值。方法回顾性分析2020年7月至2021年7月于徐州医科大学附属医院收治住院治疗的304例老年慢性心力衰竭患者的临床资料。随访1年,根据随访期间是否发生不良心血管事件(MACE)将患者分为MACE组(76例)和非MACE组(228例)。比较2组患者血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱的差异。采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、秩和检验或χ^(2)检验进行组间比较。采用Spearman相关分析左心室射血分数(LVEF)与sST2、NT-proBNP、CERT评分等指标的相关性。采用logistic回归分析MACE的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值。结果sST2、NT-proBNP、CERT评分与LVEF呈负相关(r=-0.241,-0.193,-0.183;P<0.05)。与非MACE组比较,MACE组患者sST2、NT-proBNP、CERT评分、衰弱比例更高,LVEF值更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、NT-proBNP水平、CERT评分、衰弱对CHF患者预后不良的预测的曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.713、0.636、0.658,四项联合预测AUC为0.800。结论血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱是老年CHF患者发生MACE的重要影响因素,具有较高的预后预测价值,且联合预测价值更高。

血清神经丝蛋白轻链多肽水平预测急性颅脑损伤患者临床预后的研究

目的:探讨血清神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)水平预测急性颅脑损伤患者临床预后应用价值。方法:选取100例急性颅脑损伤患者和50例健康人群分别作为观察组和对照组,检查并且比较2组患者入院后1～12 d血清NF-L水平和S100B水平,对观察组进行CT分级并分析CT分级和血清NF-L、S100B水平的相关性,根据观察组1年后生存和预后情况分为生存亚组和非生存亚组,预后良好亚组和预后不良亚组,比较亚组间血清NF-L水平,采用Spearman相关性分析软件分析血清NF-L水平和GOS评分相关性,并分析血清NF-L水平预测急性颅脑损伤预后的ROC曲线。结果:观察组受伤后D0、D1、D2、D3、D4、D6、D8-9和D10-12血清NF-L平均显著高于对照组(均P<0.05),对照组仅D0、D1、D2、D3和D4血清S100B水平均显著高于对照组(均P<0.05)。相关分析显示观察组受伤后D0血清NF-L水平与CT分级呈显著正相关(r=0.386,P=0.001)。非生存亚组受伤后24 h和1～12 d血清NF-L水平均显著高于生存亚组(P<0.05);预后不良亚组受伤后24 h血清NF-L平显著高于预后良好亚组(P<0.05);相关分析显示血清NF-L水平和患者1年后GOS评分呈显著负相关(r=-0.367,P=0.008)。入院当天血清NF-L预测急性颅脑损伤的AUC为0.99,且在入院后6 d AUC上升到1.00;入院当天血清NF-L预测急性颅脑损伤生存的最佳截断值为412 pg/mL,灵敏度和特异度分别为71%和88%;入院24 h血清NF-L预测急性颅脑损伤预后的最佳截断值为217 pg/mL,灵敏度和特异度分别为86%和56%。结论:血清NF-L水平与急性颅脑损伤患者临床预后呈显著负相关,检测血清NF-L水平有利于敏感预测急性颅脑损伤后神经元损伤的严重程度。

ABCA1基因多态性与阿尔茨海默病相关神经丝蛋白的关系

目的 探讨三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)基因多态性与阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)的关系。方法 选择2019年1月至2022年1月于延安大学咸阳医院就诊的阿尔茨海默病(AD)患者214例(AD组),选择同期该院健康体检者214例(对照组),收集两组一般资料,比较两组认知功能[简易精神状态量表(MMSE)评分]、血脂、尿AD7c-NTP水平,测定两组ABCA1基因多态性。结果 AD组MMSE评分、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均低于对照组,尿AD7c-NTP、总胆固醇(TC)水平以及高脂血症史患者比例均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组RR、RK、KK基因型频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AD组中RR基因型患者MMSE评分低于RK+KK型,尿AD7c-NTP水平高于RK+KK型,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,高脂血症史、TC、HDL-C、尿AD7c-NTP、MMSE评分、RK+KK基因型是AD的影响因素(P<0.05)。结论 AD的发生与血脂、尿AD7c-NTP水平及ABCA1基因多态性有关,同时ABCA1基因多态性与患者AD7c-NTP水平存在一定关系,通过检测ABCA1基因型及尿AD7c-NTP水平可能为AD患者个体化治疗提供新的思路。

神经生长因子及降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白磷酸化

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、免疫印迹法和图像分析方法检测大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果:缺血再灌注组同侧顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高;NGF组及CGRP组大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau蛋白也下降;NGF与CGRP合用组顶叶皮质tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组。结论:NGF及CGRP明显减轻脑缺血再灌注大鼠脑tau蛋白磷酸化程度,两者合用作用更强。

神经生长因子与降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化

为探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果显示:缺血再灌注组同侧海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0.05);NGF组及CGRP组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau也下降(P<0.05);NGF与CGRP合用组海马tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组(P<0.05)。以上结果表明NGF及CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,二者合用作用更强,降低缺血神经元tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。

神经丝蛋白轻链多肽在脑损伤评估中的应用进展

神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)是神经丝的重要组成成分之一,与轴突神经冲动传导有关。血清NF-L水平在创伤性脑损伤与非创伤性脑损伤患者中均显著升高,且脑脊液与血清NF-L变化具有一致性,同时NF-L水平升高不受血脑屏障通透性影响。血清和脑脊液中NF-L水平越高,预示脑损伤程度越严重,且与其他同类生物标志物相比,NF-L在不同脑损伤中的敏感性更高。因此,NF-L可用于预测、诊断神经系统疾病、监测疾病进展、评估患者预后,未来有望成为脑损伤的常规生物标志物。

急性颅脑损伤病人血清外泌体中泛素碳末端水解酶L1和神经丝蛋白轻链多肽的表达及意义

目的探讨急性中、重度创伤性脑损伤(TBI)病人血清外泌体中泛素碳末端水解酶L1(UCH-L1)及神经丝蛋白轻链多肽(NF-L)的表达及临床意义。方法我院2017年1月~2020年8月就诊的中、重度TBI病人94例为观察组,同期健康体检者52例作为对照组。分别于受伤后2小时、12小时、24小时、48小时、72小时抽取外周血约5 ml,提取外泌体,用蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测各时间点外泌体中UCH-L1及NF-L浓度。结果观察组病人外周血外泌体中UCH-L1蛋白浓度于伤后12小时达到高峰,后逐步下降,但各时间点均高于对照组,NF-L蛋白浓度逐渐升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。UCH-L1及NF-L蛋白浓度与年龄、性别及是否合并脑水肿无关,UCH-L1与病灶是否弥漫性轴索病变或局灶性病变亦无关,但NF-L能很好区分弥漫性轴索损伤或局灶性轴索损伤,差异有统计学意义(P<0.05)。入院后1周内死亡病人中,外泌体UCH-L1蛋白的浓度变化呈持续升高趋势,与未死亡病人比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在中、重度TBI病人发病早期,外周血外泌体中UCH-L1及NF-L升高;NF-L可以很好地区分弥漫性或局灶性轴索损伤,UCH-L1可以预测发病早期死亡率。外泌体UCH-L1及NF-L有可能成为TBI预测疾病程度及预后的理想生物标志物。

神经丝蛋白轻链多肽在神经纤维瘤病变组织中的表达及意义

目的研究神经丝蛋白轻链多肽(NEFL)在I型神经纤维瘤病变(NF1)组织中的表达及意义。方法回顾性分析2017年1月~2019年6月本院收治的I型神经纤维瘤患者34例为研究对象,收集手术或病理活检切除的神经纤维瘤瘤变组织,另取因整容或其他皮肤疾病手术患者术中切除的正常皮肤组织34例为对照组,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NF1及正常皮肤组织中NEFL mRNA、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及其下游效应分子转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达水平,采用免疫印迹(WB)检测NEFL、CTGF、TGF-β1蛋白表达水平,采用Pearson相关性分析NF1组织中NEFL蛋白水平与CTGF、TGF-β1蛋白的相关性。结果与正常皮肤组织比较,NF1瘤变组织中NEFL、CTGF、TGF-β1 mRNA及蛋白水平均显著增加(P<0.05)。Pearon法分析结果显示,NF1瘤变组织中NEFL蛋白水平与CTGF、TGF-β1蛋白水平均正相关(r=0.471、0.610,P<0.05)。结论NEFL在I型神经纤维瘤组织中高表达,可能通过组织纤维化参与NF1发生发展。

Ⅲ型神经中丝蛋白基因与中国高度近视人群相关性的研究

为了检测peripherin基因（PRPH）的突变与高度近视的病因有无相关关系,采用PCR-SSCP检测180例中国人高度近视先证者及60例正常人中PRPH基因所有外显子有无突变;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果表明,分析180例高度近视先证者PRPH基因编码区9个外显子及其邻近内含子,分别发现有下列核苷酸改变:密码子21TTC→TTT（Phe21Phe、4/180）,nt2138C→G（IVS3、1/180）,密码子277GCC→ACC（Ala277Thr、8/180）,密码子237CCA→TCA（Arg237stop、1/180）,密码子292GCG→GCA（Ala292Ala,1/180）,密码子361CUG→CUC（Leu361Leu,12/180）,密码子369AAA→AAG（Lys369Lys,12/180）,nt3331G→C（IVS7、3/180）,其中GCC277ACC为错义突变（Ala277Thr）;CCA237TCA为无义突变（Arg237stop）;密码子361CUG→CUC,密码子369AAA→AAG属于同义突变并且相连锁。Ala277Thr突变尚存在于正常人群中（1/60）,亦存在于患者正常亲属中;Arg237ston仅见于一个常染色体隐性遗传家系的患者中,为杂合性突变。分析180例高度近、视先证者PRPH基因,未发现致病突变,可排除PRPH基因与高度近视病因的相关性。在中国人群中PRPH基因有多种变异。

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。

胃扩张对大鼠脑、脊髓和肌间神经丛Fos蛋白和降钙素基因相关肽表达的影响

背景:功能性消化不良是一种常见疾病,越来越多的证据显示其发病与内脏神经敏感性增高有关。目的:通过测定大鼠伤害性胃扩张后脑、脊髓和肌间神经丛Fos蛋白和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达,探索内脏刺激传入的途径和方式。方法:24只成年Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为3组:实验组(12只)、手术对照组(6只)和空白对照组(6只)。实验组和手术对照组先植入胃内气囊。48h后,实验组接受反复的气囊扩张[80mmHg(1mmHg=0.133kPa)],2h后处死全部实验动物,立即取材。采用免疫组化法观察脑、脊髓和肌间神经丛Fos蛋白和CGRP的表达。结果:实验组杏仁核、延髓和胸髓Fos蛋白的表达较其他两组显著增强(P均<0.01),肌间神经丛的Fos蛋白表达3组间无显著差异。实验组延髓、胸髓CGRP表达较其他两组显著增强(P<0.05和P<0.01)。延髓和胸髓中Fos蛋白与CGRP的表达显著相关(rs分别为0.794和0.728,P均<0.01)。结论:胃扩张刺激可以兴奋皮层下中枢,CGRP在内脏刺激信号的传入过程中起重要作用。

血清神经丝蛋白轻链多肽水平与急性脑卒中预后的相关性分析

目的探究血清神经丝蛋白轻链多肽水平与急性脑卒中预后的相关性。方法选取徐州医科大学附属医院2018年9月—2020年9月收治的急性脑卒中患者120例作为研究组,选择同期100例健康人群为对照组。按照改良Rankin量表(mRS)评分进行分组,将120例患者分为预后良好组77例(mRS评分为0~2分)和预后不良组43例(mRS评分为3~5分),测定并比较不同组别之间血清神经丝蛋白轻链多肽和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用Pearson相关性分析软件分别对血清神经丝蛋白轻链多肽水平、TNF-α水平与mRS评分的相关性进行分析,通过受试者工作特征(ROC)和曲线下面积(AUC)分析血清TNF-α和神经丝蛋白轻链多肽水平对患者预后的预测价值,并对影响患者预后的相关因素采用Logistic回归分析。结果研究组患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平和TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05);而急性脑梗死和急性脑出血患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平和TNF-α水平比较均无明显差异(P>0.05)。与预后良好组患者相比,预后不良组年龄≥60岁、糖尿病、高血压、高血脂比例,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及血清神经丝蛋白轻链多肽水平、TNF-α水平显著升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示:血清神经丝蛋白轻链多肽水平(r=0.641,P<0.05)和TNF-α水平(r=0.498,P<0.05)都与mRS评分呈中等强度正相关关系;ROC曲线结果显示:血清神经丝蛋白轻链多肽水平的AUC为0.852(95%CI:0.777~0.926),截断值是132.942 pg/mL,此时灵敏度和特异性分别为79.1%,77.9%;血清TNF-α水平的AUC为0.777(95%CI:0.674~0.881),截断值为0.186 mg/L,对应的灵敏度和特异性分别为79.1%,84.4%;Logistic回归分析结果表明:年龄≥60岁、高血压、NIHSS评分(OR=2.129,95%CI:1.347~3.365,P<0.05)、血清神经丝蛋白轻链多肽水平(OR=2.639,95%CI:1.925~3.618,P<0.05)及TNF-α水平(OR=2.117,95%CI:1.385~3.236,P<0.05)均是影响急性脑卒中患者预后的危险因素。结论急性脑卒中预后不良患者血清神经丝蛋白轻链多肽水平明显升高,且其与患者预后mRS评分呈正相关,可作为预测急性脑卒中患者预后的指标。

新生儿缺氧缺血性脑病血清神经丝蛋白轻链多肽表达水平及与预后的关系

目的观察新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)血清神经丝蛋白轻链多肽(neurofilament light polypeptide,NF-L)表达水平及与预后的关系。方法选取2018年3月至2019年3月青海省妇女儿童医院收治的124例HIE患儿纳入研究组,根据HIE临床严重程度分为轻度(n=41)、中度(n=47)、重度(n=36);并将同期出生的125例健康新生儿纳入对照组。血清NF-L水平采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)进行检测,比较研究组与对照组、不同严重程度HIE患儿的NF-L水平,采用受试者操作特性(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析其对HIE患儿预后不良的预测价值。统计学方法采用t检验、单因素方差分析、χ^(2)检验。结果研究组患儿血清NF-L水平明显高于对照组[(145.9±30.8)与(1.3±0.4)ng/L],差异有统计学意义(t=52.460,P<0.05)。不同严重程度HIE患儿性别、出生胎龄、出生体质量比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。轻、中、重度患儿血清NF-L水平[(116.4±15.7)、(153.2±20.9)与(170.0±28.2)ng/L]比较,差异有统计学意义(F=61.996,P<0.001);进一步两两比较,重度和中度患儿血清NF-L水平均高于轻度患儿,重度患儿血清NF-L水平高于中度患儿(P值均<0.05)。轻、中、重度HIE患儿预后不良比例[0.0%(0/41)、34.0%(16/47)与61.1%(22/36)]比较,差异有统计学意义(χ^(2)=34.093,P<0.001);进一步两两比较,重度和中度患儿预后不良比例均高于轻度患儿,重度患儿预后不良比例高于中度患儿(P值均<0.05)。预后不良患儿血清NF-L水平高于预后良好患儿[(169.8±26.7)与(135.3±20.4)ng/L],差异有统计学意义(t=7.872,P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清中NF-L水平预测HIE患儿不良预后的曲线下面积为0.889(95%CI:0.827~0.951),截断值为140.6 ng/L,其灵敏度为85.7%、特异度为79.8%。结论不同严重程度HIE患儿的预后情况不同,NF-L可作为判定预后的血清指标,在临床上具有一定的参考价值。

神经生长因子及降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑环磷酸腺苷反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)及降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响。方法:用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA的表达。结果:缺血再灌注组右侧海马CA1区和顶叶皮质神经元CREB mRNA表达比假手术组减少,NGF组及CGRP组的CREB mRNA表达均高于缺血再灌注组,NGF与CGRP联合应用时CREB mRNA的表达分别高于NGF组和CGRP组。结论:NGF及CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,NGF与CGRP联合应用则作用更强,NGF和CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过激活CREB基因转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fos mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达的影响。方法:在脑缺血后再灌注模型上,应用原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法检测c-fosmRNA及蛋白表达。结果:缺血组大鼠纹皮质较假手术组c-fosmRNA和蛋白表达非常显著增加;CGRP组和NGF组c-fosmRNA和蛋白表达分别显著弱于缺血组;CGRP和NGF合用组c-fosmRNA和蛋白表达非常明显弱于缺血组、CGRP组和NGF组。结论:CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-fosmRNA及蛋白表达,联合应用则能显著抑制脑缺血后再灌注大鼠纹皮质cfosmRNA及蛋白表达,二者对保护缺血神经元可能有协同作用。

胰高血糖素样肽-1受体在β淀粉样蛋白31-35对HT22神经细胞节律基因per2影响中的作用

目的探讨胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)在β淀粉样蛋白(Aβ)31-35影响HT22神经细胞节律基因per2表达中的作用。方法以小鼠海马HT22神经细胞为研究对象。四甲基偶氮唑盐(MTT)细胞毒性实验检测细胞存活率的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测不同CT时间per2基因的变化趋势;免疫荧光染色观察CT16时GLP-1R及PER2蛋白的原位表达情况。结果 (1)分别使用0、1、5μmol/L的Aβ31-35处理细胞,结果发现:1μmol/L Aβ31-35处理组细胞存活率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);5μmol/L Aβ31-35处理组细胞存活率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(2)经1μmol/L Aβ31-35处理后,per2基因表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);经5μmol/L Aβ31-35处理后,per2基因表达在CT16时与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(3)在CT16时,经5μmol/L Aβ31-35处理后,GLP-1R的表达与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)在CT16时,经10μmol/L Exendin(9-39)处理后PER2蛋白的荧光强度与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ31-35可能通过降低GLP-1R表达导致小鼠海马HT22神经细胞per2节律基因异常表达。

甲基-CpG结合蛋白1缺失小鼠抑制背根神经节与脊髓背角降钙素基因相关肽生成缓解炎性疼痛

目的探讨甲基-CpG结合蛋白1(methyl-CpG-binding domain protein 1,MBD1)缺失小鼠缓解弗氏完全佐剂(CFA)诱导的炎性疼痛是否通过抑制神经传导通路中的降钙素基因相关肽(CGRP)来实现的,为MBD1调控炎性疼痛的神经生物学机制提供新的思路。方法(1)取8周龄雄性MBD1敲除小鼠(KO)和与KO小鼠年龄、性别和体质量配对C57BL6小鼠(WT),按随机数字表法分为4组,分别为做足底注射生理盐水(NS)、CFA的WT小鼠组和注射NS、CFA的KO小鼠组(每组7只)。观察药物前1天(-1 d)、注射后2 h、1、3、7和14 d 4组小鼠机械缩足反应频率(PWF)和热缩足反应潜伏期(PWL)行为改变;(2)另取CFA注射后1 d(疼痛最明显点)上述组小鼠(每组3只),分别提取患侧背根神经节(DRG)和脊髓背角组织行ELISA法检测CGRP含量,比较4组含量变化。结果(1)与WT小鼠比较,KO小鼠CFA注射前明显降低双侧后爪基础PWF和延长PWL;与注射生理盐水的WT小鼠组比较,CFA注射后2 h、1、3、7和14 d WT小鼠患侧PWF增加(P<0.05)、PWL降低(P<0.05),而注射CFA的KO小鼠患侧PWF无明显差异(P>0.05)、PWL仅在CFA注射后1 d有差异(P<0.05),其余差异无统计学意义(P>0.05);(2)CFA注射后1天,与注射生理盐水的WT小鼠组比较,WT小鼠DRG和脊髓背角内CGRP显著增加(P<0.05),注射生理盐水的KO小鼠DRG和脊髓背角内CGRP显著降低(P<0.05),而注射CFA的KO小鼠DRG和脊髓背角内CGRP无明显变化(P>0.05)。结论MBD1敲除缓解CFA诱导的机械和热刺激痛觉过敏,机制可能与抑制DRG和脊髓背角内CGRP生成和释放有关。

鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体和降钙素基因相关肽表达的影响

目的:观察鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:将54只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=9):舒芬太尼组[S+保留神经损伤(spared nerve injury model,SNI)组]、舒芬太尼+PKC抑制剂组(SP+SNI组)和PKC抑制剂组(P+SNI组)在SNI模型制作后14 d内每天分别鞘内注射舒芬太尼1μg、舒芬太尼1μg+PKC抑制剂11μg、PKC抑制剂11μg,注射药物容量均为20μL。对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理痛模型组(SNI组)则在上述相同时间点分别注入0.9%的生理盐水20μL。在模型制作前1 d和模型制作后14 d内,对各组大鼠进行疼痛行为学观察,并用免疫组织化学法观察各组大鼠L5节段水平脊髓背角NMDAR和CGRP的表达。结果:与C组和S组比较,SNI组在SNI术后均出现机械刺激痛阈降低(P<0.01),且脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物数量和表达增加(P<0.01)。与SNI组比较,S+SNI组、P+SNI组和SP+SNI组注药后机械刺激痛阈提高(P<0.01),脊髓背角NMDAR和CGRP免疫阳性产物表达降低(P<0.05或0.01),且3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射舒芬太尼和PKC抑制剂对神经病理痛大鼠具有明显的抗伤害效应,同时可显著抑制大鼠脊髓背角NMDAR和CGRP表达。

动物肽类神经毒素基因工程研究进展

介绍了克隆动物肽类神经毒素cDNA和基因组基因克隆的方法 ,以及毒素cDNA结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程 .概述了毒素蛋白基因组基因的结构及其mRNA前体的加工过程 .综述了在毒素蛋白的基因工程方面已取得的进展 。