重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的 :在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。方法 :体外采集已生育健康男子精液 ,采用非连续密度梯度法分离精子 ,将获能的精子悬液分成阴性对照组 (C组 ,2 0 0 μL 精子悬液加 1μL DMSO)、阳性对照组 (A组 ,2 0 0 μL精子悬液加 A2 3187至终浓度为 10 μmol· L- 1 )和 ZP3组 (2 0 0 μL 精子悬液加 ZP3至终浓度为 10 m g· L- 1 ) ,考马斯亮蓝染色法检测重组人 ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果 :C组、A组和 ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为 (5 .0 0± 1.70 ) %、 (4 6 .10± 7.4 9) %和 (13.2 0± 2 .70 ) % ,各组间比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。

人透明带蛋白3真核表达载体的构建

目的构建人ZP3蛋白(从第23位到348位氨基酸)真核表达载体,用于在毕赤酵母中表达重组人ZP3蛋白。方法通过PCR方法扩增编码人ZP3蛋白的基因,并将其克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ构建真核表达质粒pPICZα-hZP3。结果经PCR扩增获得的hZP3基因大小为978 bp,其DNA测序结果分析表明:pPICZα-hZP3质粒上的基因片段与已知发表在Genbank上的人ZP3 cDNA序列一致。结论成功构建了含有人ZP3基因的真核表达载体pPICZα-hZP3。

用人透明带蛋白(hZPA)N端重组肽的免疫避孕展望

哺乳动物卵透明带(ZP)是避孕疫苗可能的候选抗原之一。研究结果表明人ZPA重组表达蛋白在兔体内诱导了可抑制人体外受精的抗血清。本研究旨在确定该重组蛋白是否也能在一非人灵长类动物中产生可阻断受精的抗血清。 方法 免疫原使用了去除信号肽的猪ZPA氨基端198和人ZPA氨基端206个氨基酸残基肽,它们均山含各重组pET21b质粒的大肠杆菌(BL21)表达,然后被分别纯化用作抗原、帽猴的免疫采用完全福氏佐剂和单次为500μg抗原的背部两位点肌肉注射方式,在每次间隔1个月的4次加强免疫后收集抗血清。关于抗血清效价的鉴定,抗体生成的测定采用人卵母细胞免疫荧光染色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法,阻断受精试验使用人卵母细胞和精子。

人卵透明带蛋白huZP3a^(22～176)和huZP3b^(177～348)肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:探索将huZP3a22~348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性。方法:用PCR技术, 将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322~348蛋白编码基因拆成大小相近的两段, 以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV221的多克隆区。结果:大肠杆菌分别特异地表达了可单独或复合应用的huZP3a22~176和huZP3b177~348,在经过抗人ZP3不同抗原区合成肽抗体的蛋白印迹鉴定后, 用改良的制备性PAGE方法分离纯化这两种表达产物。同时用兔抗猪ZP IgGs蛋白印迹试验表明, huZP3a和pZP3b的几个共同线性抗原表位都存在于其肽链的前半区域。结论:通过基因重组技术可获得足够量的huZP3a和huZP3b,这为开展huZP3a和huZP3b的免疫原性以及huZP3诱发人精子顶体胞吐的功能域等研究奠定了基础。

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用

目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果:精子与培养液共孵育30 min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性(P<0.05),顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论:重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。