与人遗传病相关(CTG)n·(CAG)n重复序列的分子克隆

为了得到（CTG）n·（CAG）n重复序列,设计了一个可获得具有单个G/C悬端的重复序列的克隆策略.化学合成重复序列及两侧接头序列,两侧接头有EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Ple Ⅰ酶切位点,EcoR Ⅰ、BamHⅠ位点用于将重复序列插入载体,Ple Ⅰ酶切位点可方便地将重复序列从重组质粒中取出.使用该方案,可获得长度在200～1000bp的重复序列片段.本工作为进一步研究和人遗传病相关的重复序列的结构特性及该类遗传疾病的分子机理奠定基础.

与人遗传病相关(GCCT)_n·(CAGG)_n重复序列的分子克隆

克隆与人遗传病相关的(GCCT)n.(CAGG)n重复序列.通过化学合成重复序列及两侧接头序列,两侧接头有EcoRⅠ,BamHⅠ和PleⅠ酶切位点,EcoRⅠ,BamHⅠ位点用于将重复序列插入pUC18制成的载体,PleⅠ酶切位点可方便地将重复序列从重组质粒中取出.为进一步研究和人遗传病相关的重复序列的结构特性及该类遗传疾病的分子机理奠定基础.

与人遗传病相关的三核苷酸(GAA)_n·(CTT)_n重复序列的分子克隆

为了获得长片段(GAA)_n·(CTT)_n重复序列进而对其结构特性和致病机理研究,通过化学合成重复序列及两侧接头,两侧接头有Eco R I,Bam H I和Ple I酶切位点,Eco R I,Bam H I位点用于将重复序列插入pUC19制成的载体,Ple I酶切位点可方便地将重复序列从重组质粒中取出.为核苷酸重复序列的动力学结构和探讨与遗传病相关的重复序列结构特性及该类遗传疾病的分子机理奠定了基础.

应用正交实验法优化DNA重复序列的PCR扩增体系

采用L9(34)正交实验法,对与人神经系统疾病相关的DNA重复序列PCR扩增体系中的模板DNA浓度、Taq酶浓度、引物浓度、dNTP浓度4种影响因素进行了优化筛选,发现引物浓度对扩增结果影响的显著性最大.在此基础上进行了引物浓度单因素实验,得到最优DNA重复序列PCR扩增体系在25μL反应体系中各组分的最适浓度分别为:模板3 ng/μL、Taq酶0.75 U、dNTP0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L.通过优化前后反应体系的对比,扩增目的产物的量均有较大程度的提高.该优化体系的建立为进一步研究与人遗传病相关的DNA重复序列的结构特性及阐明该类遗传疾病的分子机理奠定了基础.