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人重组蛋白PDCD5抑制胶原诱导性关节炎大鼠来源的淋巴细胞增殖和炎性细胞因子分泌并促进活化的淋巴细胞凋亡(英文) 被引量:3
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作者 王万林 毛春 肖娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期627-632,共6页
目的研究腹腔注射人重组蛋白PDCD5(rhPDCD5)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的活化淋巴细胞的作用,探讨rhPDCD5对活化的脾细胞发挥免疫抑制作用的机制。方法将雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,CIA动物模型+卵白蛋白(OVA)治疗组,... 目的研究腹腔注射人重组蛋白PDCD5(rhPDCD5)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的活化淋巴细胞的作用,探讨rhPDCD5对活化的脾细胞发挥免疫抑制作用的机制。方法将雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,CIA动物模型+卵白蛋白(OVA)治疗组,CIA动物模型+rhTNFR:Fc治疗组,CIA动物模型+rhPDCD5治疗组。第0天建立胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠模型,第2天到26天腹腔注射给药。第28天取脾脏制成单细胞悬液,体外用CⅡ(20μg/mL)和anti-CD3(1μg/mL)+anti-CD28(2μg/mL)分别刺激活化48h和72h。ELISA检测细胞上清中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-17A(IL-17A)的水平;[3H]掺入法检测活化脾细胞的增殖;流式细胞技术检测活化的CD4^+T淋巴细胞的凋亡。结果rhPDCD5处理的CIA大鼠来源的脾细胞经CⅡ和anti-CD3+anti-CD28分别刺激活化之后,分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17A水平下降,增殖能力下降,CD4^+T淋巴细胞凋亡百分比上调。结论rhPDCD5通过抑制活化的脾细胞分泌炎性细胞因子,抑制活化的脾细胞增殖,促进活化的CD4^+T淋巴细胞凋亡多条途径发挥免疫抑制作用。 展开更多
关键词 人重组蛋白pdcd5 淋巴细胞 活化诱导性凋亡 类风湿性关节炎
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
2
作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮CHO-S细胞 cAMP活性 基因工程 脂代谢
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重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究
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作者 千爱君 萧耿苗 +6 位作者 李壮 田雪 刘晓红 宋玉萍 赵正刚 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1272-1278,共7页
目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内... 目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内甘油三酯(TG)及培养上清中甘油的水平,油红O染色观察脂滴变化。Western blot检测各组脂肪细胞中HSL和ATGL脂解蛋白的表达水平。不同浓度rCGH加或不加PKA抑制剂H89对已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预实验,将培养细胞分为对照组、H89预处理组、1μmol·L^(-1)rCGH组和(1μmol·L^(-1)rCGH+H89)联合干预组。酶法测定胞内TG及游离甘油的含量,Western blot检测CREB及脂解相关蛋白的表达。结果不同浓度rCGH(0.25、0.5、1、2μmol·L^(-1))对脂肪细胞细胞活力无显著影响(P>0.05);与对照组相比,rCGH处理显著降低了脂滴大小和细胞内TG含量,同时显著升高了细胞上清液中的甘油浓度。rCGH处理还刺激了p-HSL、ATGL和p-PKA的蛋白表达。此外,加入PKA抑制剂H89,减弱了rCGH对游离甘油水平、细胞内TG含量以及p-HSL、p-PLIN1和p-CREB表达的影响。结论rCGH通过上调HSL、ATGL和PKA活性促进3T3-L1脂肪细胞的脂质分解,促进甘油释放,抑制TG合成和脂质积累,其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 重组蛋白激素β5/α2 3T3-L1脂肪细胞 甘油 甘油三酯 脂解 cAMP/PKA/CREB
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重组人PDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞凋亡的增敏作用的初步探讨 被引量:14
4
作者 张岱 刘朝晖 +2 位作者 李克敏 范慧 廖秦平 《中国妇产科临床杂志》 2004年第4期286-289,共4页
目的 初步探讨重组人PDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞凋亡的增敏作用。方法人宫颈癌SiHa细胞培养于含 1× 1 0、 1× 1 0 2 、 1× 1 0 3 、 1× 1 0 4IU/ml浓度的IFNγ的无血清培养基中 ,培养 2 0、 2 4、4 ... 目的 初步探讨重组人PDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞凋亡的增敏作用。方法人宫颈癌SiHa细胞培养于含 1× 1 0、 1× 1 0 2 、 1× 1 0 3 、 1× 1 0 4IU/ml浓度的IFNγ的无血清培养基中 ,培养 2 0、 2 4、4 8、 72h ,以MTT法指征细胞增殖程度 ,选择适宜的作用浓度及时间。将不同浓度的rhPDCD5蛋白与选定浓度的IFNγ同时加入SiHa细胞中共同培养 ,以AnnexinV -PI标记进行流式细胞仪分析 ,检测细胞凋亡程度。结果 单次给予不同浓度的IFNγ ,培养 2 0h ,与对照组相比 ,1× 1 0 3 组、 1× 1 0 4组的MTT值显著下降 (P <0 0 5 ) ,同时测定细胞凋亡率发现 ,1× 1 0 2 、 1× 1 0 3 、 1× 1 0 4IU/mlIFNγ组SiHa细胞的凋亡率分别为 5 6 7%、 1 2 91 %、 2 0 88% ,随干扰素的浓度上升而增加。 1× 1 0 3 IU/mlIFNγ组加入 1 0、 2 0mg/LrhPDCD5蛋白后细胞凋亡率为 2 4 74 %、2 6 89% ,1× 1 0 4IU/mlIFNγ组加入 1 0、 2 0mg/LrhPDCD5蛋白后细胞凋亡率为 32 6 9%、 32 2 7%。结论干扰素可能通过诱导凋亡而抑制SiHa细胞的生长。rhPDCD5蛋白对干扰素γ诱导人宫颈癌SiHa细胞系凋亡有增敏作用。 展开更多
关键词 IFNΓ pdcd5 宫颈癌 干扰素Γ 蛋白 细胞凋亡率 诱导 增敏作用 初步探讨 对照组
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重组人PDCD5蛋白对U937细胞化疗的增敏作用及机制 被引量:2
5
作者 王艳芳 宋泉声 +3 位作者 张颖妹 马大龙 王应 克晓燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期277-281,共5页
本研究探讨重组人PDCD5(rhPDCD5)蛋白对U937血液肿瘤细胞化疗增敏作用的机制。利用流式细胞术检测rhPDCD5蛋白对化疗药诱导的细胞凋亡以及细胞周期的影响;用Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡的形态变化;用caspase-3荧光活性检测分析rhP... 本研究探讨重组人PDCD5(rhPDCD5)蛋白对U937血液肿瘤细胞化疗增敏作用的机制。利用流式细胞术检测rhPDCD5蛋白对化疗药诱导的细胞凋亡以及细胞周期的影响;用Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡的形态变化;用caspase-3荧光活性检测分析rhPDCD5蛋白诱导凋亡的可能机制;用RT-PCR检测rhPDCD5蛋白对耐药基因表达的影响。结果表明:rhPDCD5蛋白可以通过caspase-3相关的途径促进化疗药诱导的U937细胞凋亡,增强化疗药对细胞周期的阻滞作用。另外,rhPDCD5蛋白也能通过减少耐药基因的表达而增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性。结论:rhPDCD5蛋白的作用机制比较复杂,它可能通过促进凋亡、影响细胞周期、逆转耐药等途径发挥化疗增敏作用。 展开更多
关键词 pdcd5蛋白 化疗增敏 凋亡 细胞周期 耐药
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热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用
6
作者 颜晶莹 倪亮 +1 位作者 沈星宇 李玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2079-2088,共10页
随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无... 随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无害的秸秆处理方法非常重要。高温处理是降解转基因秸秆重组蛋白和重组DNA的有效手段,但目前对处理温度和处理时间的选择还缺乏系统的研究。本研究通过试纸条、聚合酶链反应(PCR)等方法检测不同温度和时间处理的转基因作物秸秆中重组蛋白和重组DNA的水平。结果表明,转基因大豆、棉花、玉米、水稻的秸秆在50℃处理3 h后,其体内的抗除草剂蛋白草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)等重组蛋白基本降解;但相同温度下,重组DNA的降解则需要4 d时间;提高处理温度可以在一定程度上缩短重组蛋白和重组DNA降解所需的时间。50℃处理4 d的条件在实际生产中通过堆肥就能实现。本研究从分子生物学的角度为转基因秸秆处理提供了依据。 展开更多
关键词 转基因秸秆 重组蛋白 重组DNA 草胺膦乙酰转移酶(PAT) 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(Cp4-EPSPS) BT基因
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重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性
7
作者 王露 范慧 +4 位作者 莫晓宁 张颖妹 魏征人 钟英成 黄大无 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期360-363,共4页
目的 :建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线 ,获得高纯度的PDCD5蛋白 ,并观察其稳定性。方法 :以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白 ,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAESepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0两步层... 目的 :建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线 ,获得高纯度的PDCD5蛋白 ,并观察其稳定性。方法 :以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白 ,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAESepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0两步层析分离获得PDCD5蛋白。选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度 ,SDS -PAGE检定蛋白质的稳定性。结果 :经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为 10 0 % ,相对分子质量 15 80 0 ,等电点 5 .9。生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL 6 0细胞的凋亡 ,呈现一定的量效关系。稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定 ,对温度敏感 ,4℃和 2 5℃极易降解 ,而 - 2 0℃和冻干保存则相对稳定。结论 :本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白。稳定性实验提示PDCD5宜在 - 2 0℃以下或冻干保存。 展开更多
关键词 重组凋亡相关蛋白 pdcd5 纯化 稳定性 HL-60细胞
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PDCD5蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌中的表达 被引量:25
8
作者 刘朝晖 张岱 +1 位作者 李克敏 廖秦平 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期407-410,共4页
目的 :了解凋亡基因PDCD5在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变 (cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)和宫颈鳞癌中的表达 ,分析PDCD5在宫颈癌的发病中所起的作用。方法 :采用免疫组织化学的方法 ,对 93例宫颈组织 (其中包括正常宫颈 1 8... 目的 :了解凋亡基因PDCD5在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变 (cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)和宫颈鳞癌中的表达 ,分析PDCD5在宫颈癌的发病中所起的作用。方法 :采用免疫组织化学的方法 ,对 93例宫颈组织 (其中包括正常宫颈 1 8例 ,CINⅠ级 1 9例、CINⅡ级 1 8例、CINⅢ级 2 0例、宫颈癌 1 8例 )的组织切片进行PDCD5的免疫组化染色。采用人工阅片评分及计算机辅助染色强度判定 2种方法判断宫颈组织PDCD5的染色阳性率及染色强度。采用单因素方差分析法判断PDCD5的表达与正常宫颈、CIN、宫颈鳞癌的相关性。结果 :免疫组织化学的结果显示 ,在正常宫颈及CINⅠ级组织中 ,PDCD5表达多呈强阳性 ,CINⅡ级以上及宫颈癌组织表达呈递减趋势。正常宫颈组织、CIN各级及宫颈癌组织之间PDCD5的平均光密度值分别为 0 .32 2、0 .36 6、0 .2 87、0 .2 5 2和 0 .2 0 6 ,各级病变之间差异均有显著性。在整体上说 ,PDCD5的表达在CINⅠ级较正常升高 ,在CINⅡ级以上随宫颈病变的进展呈下降趋势。结论 展开更多
关键词 pdcd5蛋白 宫颈上皮 瘤样病变 宫颈癌 基因表达 肿瘤 CIN
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PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化 被引量:36
9
作者 谷红 杨汉春 +1 位作者 郭鑫 陈艳红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期64-69,共6页
为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,... 为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20 8%。Western Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 PRRSV BJ-4株 ORF5基因 原核表达 重组蛋白 分离纯化 繁殖与呼吸综合症
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重组胸腺素β4调节创伤皮肤层粘连蛋白5表达的研究 被引量:7
10
作者 李艳 王冠 +4 位作者 于虎 杨小凡 许松山 聂李亚 车永哲 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1306-1310,共5页
目的探讨重组胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)调节层粘连蛋白5(laminin5,LN-5)表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,体重200~250g,采用直径8mm自制打孔器于脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。根据伤口用药的不同,... 目的探讨重组胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)调节层粘连蛋白5(laminin5,LN-5)表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,体重200~250g,采用直径8mm自制打孔器于脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。根据伤口用药的不同,随机分为实验组(45只)和对照组(15只),实验组再根据用药剂量不同分为低、中、高剂量组,每组15只。实验组于模型制备后即刻、每天7:00、19:00分别予每个伤口表面滴加50μLTβ4,低、中、高剂量组Tβ4浓度分别为2、6、18μg/50μL,对照组同法滴加等量PBS液(pH7.2),共滴加7d。造模后观察大鼠大体情况,术后2、4、7d观察大鼠伤口愈合情况及取材行免疫组织化学观察。结果除高剂量组1只大鼠于术后7d死亡,余均存活至实验完成。术后7d,中剂量组伤口明显缩小,多数伤口与创缘皮肤衔接良好。术后2d,对照组和低、中、高剂量组伤口愈合率分别为7.67%±5.46%、29.01%±7.43%、26.54%±11.49%、10.39%±3.96%;术后4d分别为28.16%±13.76%、37.99%±13.05%、42.00%±9.56%、39.58%±12.74%;术后7d分别为59.08%±19.02%、64.15%±17.92%、77.39%±8.45%、69.78±8.45%。术后2d,低、中、高剂量组伤口愈合率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后2d,各组均可见较多LN-5阳性表达,对照组与低剂量组阳性表达强(P<0.05),中剂量组阳性表达最少;术后4d,中剂量组阳性表达最强(P<0.05);术后7d,中剂量组仍有较强阳性表达(P<0.01)。结论重组Tβ4早期抑制LN-5表达,有利于细胞的增殖、分化,中晚期上调LN-5表达,改善基质环境,促进表皮细胞迁移和创伤愈合。 展开更多
关键词 重组胸腺素β4 皮肤创伤愈合 层粘连蛋白5 大鼠
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盐酸埃克替尼对NSCLC患者血清PDCD5、P53及凋亡抑制蛋白Livin的影响 被引量:9
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作者 郭开峰 缪继东 +2 位作者 郑成丽 杨丽丽 张鹏 《临床和实验医学杂志》 2018年第8期816-819,共4页
目的探讨盐酸埃克替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及对患者血清程序性细胞凋亡因子5(PDCD5)、P53、Livin蛋白表达的影响。方法前瞻性选取确诊并治疗的98例NSCLC患者,收集时间2014年1月至2015年12月,随机分为两组,其中49例患者采用盐... 目的探讨盐酸埃克替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及对患者血清程序性细胞凋亡因子5(PDCD5)、P53、Livin蛋白表达的影响。方法前瞻性选取确诊并治疗的98例NSCLC患者,收集时间2014年1月至2015年12月,随机分为两组,其中49例患者采用盐酸埃克替尼治疗(研究组),49例患者采用多西他赛、培美曲塞进行治疗(对照组)。化疗4个周期后进行临床效果评价,比较两组患者的临床疗效、不良反应和生存率情况。检测并比较两组患者治疗前后的血清PDCD5、P53、Livin蛋白。结果研究组的缓解率30.61%,总有效率79.59%,对照组的缓解率22.45%,总有效率67.35%,研究组略高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,研究组的Livin蛋白水平低于对照组(P<0.05),PDCD5蛋白、P53蛋白均高于对照组(P<0.05);研究组患者Ⅱ~Ⅳ度的恶心呕吐、腹泻发生率显著低于对照组(P<0.05);两组患者均随访24个月,两组的1年生存率、2年生存率比较无统计学显著性(P>0.05)。结论盐酸埃克替尼治疗NSCLC患者的疗效与多西他赛、培美曲塞的效果基本一致,但其具有更有效的促进癌细胞凋亡作用,患者对其具有更好的耐受性。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 盐酸埃克替尼 LIVIN蛋白 pdcd5蛋白 P53蛋白
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应 被引量:7
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作者 江云波 方六荣 +2 位作者 肖少波 张辉 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期858-864,共7页
猪伪狂犬病毒(PRV)是一种良好的兽用活病毒疫苗载体。但以PRV基因缺失疫苗株TK-gE-LacZ+为载体表达PRRSVGP5的重组病毒TK-gE-GP5+免疫实验动物后难以激发抗PRRSV的中和抗体。为了进一步增强这种重组病毒的免疫效力,用具有更好免疫原性... 猪伪狂犬病毒(PRV)是一种良好的兽用活病毒疫苗载体。但以PRV基因缺失疫苗株TK-gE-LacZ+为载体表达PRRSVGP5的重组病毒TK-gE-GP5+免疫实验动物后难以激发抗PRRSV的中和抗体。为了进一步增强这种重组病毒的免疫效力,用具有更好免疫原性的修饰的ORF5基因(ORF5m)代替天然ORF5基因,构建了表达PRRSV的修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒TK-gE-GP5m+。经PCR、Southernblot、Westernblot证实构建正确,并能表达具有活性的GP5m蛋白。将TK-gE-GP5m+与TK-gE-GP5+分别免疫Balbc小鼠,结果TK-gE-GP5m+免疫小鼠不仅产生了较高水平的抗PRRSV的中和抗体(36只达到了1∶16),而且在诱导PRRSV特异性细胞免疫方面也显著优于TK-gE-GP5+,表明TK-gE-GP5m+是一种极有希望的PRRSV和PRV二价基因工程候选疫苗。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5m蛋白 重组伪狂犬病毒
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PDCD5和Bcl-2蛋白在大肠癌和癌前病变组织中的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 王士勇 刘艳萍 +5 位作者 曾雪 刘飒 梁春艳 张远 张晖 杜微丽 《实用肿瘤杂志》 CAS 2012年第1期59-63,共5页
目的明确PDCD5蛋白在大肠良性疾病、癌前病变到大肠癌变过程中的表达情况及其临床意义。方法应用S-P免疫组织化学方法,检测46例大肠癌、20例腺瘤和28例慢性炎症患者的组织中PDCD5和Bcl-2蛋白的表达,并与临床资料比较,对46例大肠癌患者... 目的明确PDCD5蛋白在大肠良性疾病、癌前病变到大肠癌变过程中的表达情况及其临床意义。方法应用S-P免疫组织化学方法,检测46例大肠癌、20例腺瘤和28例慢性炎症患者的组织中PDCD5和Bcl-2蛋白的表达,并与临床资料比较,对46例大肠癌患者预后进行电话随访。结果 PDCD5在慢性炎症组织中表达最高,明显高于腺瘤及癌组织中的表达(χ2=10.495,P<0.05),但在大肠腺瘤和癌组织、以及不同分级的大肠癌之间的表达差异无统计学意义(P=0.552)。随访病例中PDCD5表达高的患者,生存评分较高。Bcl-2蛋白在大肠癌患者中表达最高,腺瘤其次,在炎症患者中表达最低(χ2=13.373,P<0.05)。PDCD5及Bcl-2蛋白在上述各种组织中的表达呈现相反的趋势,经统计学处理未见明显负相关性(R=0.149,P=0.151)。结论 PDCD5可能不同程度参与了大肠组织细胞癌变过程的调控,而且可能在癌变早期起一定的作用。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 基因 BCL-2 pdcd5蛋白 细胞凋亡 免疫组织化学
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毕赤酵母表达重组hPK-5蛋白不均一性的鉴定 被引量:2
14
作者 李永红 饶春明 +3 位作者 史新昌 陶磊 袁力勇 王军志 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期180-184,共5页
对毕赤酵母表达重组人纤溶酶原Kringle 5(hPK-5)蛋白的不均一性进行了鉴定。应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯度分析。采用糖蛋白染色法... 对毕赤酵母表达重组人纤溶酶原Kringle 5(hPK-5)蛋白的不均一性进行了鉴定。应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯度分析。采用糖蛋白染色法鉴定是否为糖蛋白,以Edman降解法测定N端氨基酸,采用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱(HPLC-ESI-QTOF-MS)联用技术测定蛋白质精确分子质量。结果表明:SDS-PAGE测定为单-条带,纯度大于95%,SEC-HPLC测定为单一色谱峰,纯度大于95%,RP-HPLC测定为几个紧密相连的峰。糖蛋白染色为阴性。N端氨基酸测定结果表明含多个N端氨基酸。液质联用测定精确分子质量的结果表明hPK-5蛋白是相对分子质量分别为10744.88,10646.00,10533.00和10419.63的混合物。以上结果准确鉴定出毕赤酵母表达的该重组hPK-5蛋白是C端完整而N端依次缺失0~3个氨基酸的不均一蛋白。 展开更多
关键词 hPK-5 毕赤酵母 重组蛋白 不均一性
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白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤中PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 郑湘予 吴成富 +1 位作者 崔黎 陈奎生 《疑难病杂志》 CAS 2012年第8期611-613,F0003,共4页
目的探讨白藜芦醇(Res)对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将BGC-823细胞复苏后,通过右前肢腋部皮下移植构建裸鼠胃癌移植瘤模型。建模成功后的荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、Res组、顺铂组和联合用药... 目的探讨白藜芦醇(Res)对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将BGC-823细胞复苏后,通过右前肢腋部皮下移植构建裸鼠胃癌移植瘤模型。建模成功后的荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、Res组、顺铂组和联合用药组(白藜芦醇+顺铂),各组分别在成瘤部位皮下注射0.2ml相应的药物,每日1次,治疗1周。停药后将裸鼠处死,剥离肿瘤组织。采用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中PDCD5蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果 Res组中PDCD5蛋白表达水平明显高于空白对照组,但低于顺铂组和联合用药组,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测到胃癌移植瘤中凋亡细胞核呈棕褐色,染色深浅不一,染色质分布不均,空白对照组中仅见到少数凋亡细胞,Res组、顺铂组和联合用药组凋亡细胞数依次增加,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可上调裸鼠胃癌移植瘤细胞中PDCD5的蛋白表达,表明其可能通过上调PDCD5的表达进而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胃癌移植瘤 pdcd5蛋白表达 人胃癌BGC-823细胞 凋亡 裸鼠
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定 被引量:2
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作者 周井祥 薛江东 +3 位作者 刘晔 张守峰 朱霞 扈荣良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期920-923,共4页
为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切... 为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切和脂质体介导法,将其转染MDCK细胞,获得重组病毒rCAV-2-GP5,经酶切鉴定显示该重组病毒含有目的基因。经RT-PCR检测表明,rCAV-2-GP5能够转录相应GP5蛋白基因mRNA;western blot检测证实GP5蛋白在MDCK细胞中得到表达。体外连续传30代检测表明,rCAV-2-GP5具有良好的遗传稳定性。本实验为PRRSV新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 犬2型腺病毒 重组病毒
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重组人可溶性DR5蛋白的分离纯化及其生物活性检测 被引量:3
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作者 杜耀武 刘广超 +2 位作者 赵粤萍 白慧玲 马远方 《河南大学学报(医学版)》 CAS 2007年第1期25-27,31,共4页
目的:提纯毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(sDR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞的阻断效应。方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用Ni-NTA Agar... 目的:提纯毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(sDR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞的阻断效应。方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用Ni-NTA Agarose亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5,用SDS-PAGE检测纯化产物的纯度。用流式细胞仪检测纯化的可溶性DR5对TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用的阻断效应。结果:转化阳性的毕赤酵母GS115菌株可以成功表达分子量为23kD的可溶性DR5蛋白,经过Ni-NTAAgarose亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白,培养上清产量达28.69mg/L;体外活性检测结果显示,纯化的可溶性DR5蛋白几乎完全可以阻断TRAIL诱导的Jurkat细胞凋亡作用。结论:经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可以有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡作用,显示DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡作用中起着十分关键的作用。 展开更多
关键词 人类重组蛋白 死亡受体5 细胞凋亡 JURKAT细胞
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重组人可溶性DR5蛋白的表达、制备及其生物活性检测 被引量:1
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作者 梁晓红 孙汶生 +5 位作者 高立芬 马春红 韩丽辉 王晓燕 张宁 郭春 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第3期252-256,共5页
目的:纯化毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(DR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞凋亡的阻断效应?方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用ProBondT... 目的:纯化毕赤酵母GS115菌株表达的重组人可溶性死亡受体5(DR5)蛋白,并研究其对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所诱导细胞凋亡的阻断效应?方法:大量扩增可溶性DR5酵母表达载体转化阳性的毕赤酵母GS115菌株,收集上清,利用ProBondTM亲和层析柱纯化获得重组可溶性DR5蛋白,用SDS-PAGE?Western Blot检验纯化产物的特异性和纯度?用MTT法检测纯化的可溶性DR5蛋白对TRAIL诱导人宫颈癌细胞系Hela细胞凋亡作用的阻断效应?结果:转化阳性的毕赤酵母GS115菌株可成功表达分子量为26 kD的可溶性DR5蛋白,经ProBondTM亲和层析柱纯化,SDS-PAGE?Western Blot鉴定,结果显示获得了高纯度的重组人可溶性DR5蛋白,蛋白产量达20 μg/ml;体外活性检测结果显示,纯化的可溶性DR5蛋白可部分阻断TRAIL诱导的Hela细胞的凋亡,阻断率最高达53.6%?结论:经纯化后的重组人可溶性DR5蛋白可有效阻断TRAIL诱导的细胞凋亡反应? 展开更多
关键词 重组蛋白 HELA细胞 受体 DR5 细胞凋亡
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PRRSV GP5蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定 被引量:1
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作者 田野 张维军 +6 位作者 林燕 王群 杨涛 步志高 童光志 张守发 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期833-837,共5页
为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组牛痘病毒,本研究通过RT-PCR获得PRRSVCH-1a株GP5蛋白基因,将其克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至转移质粒pSC11中,构建重组转移质粒(pSC11-GP5)。将pSC... 为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组牛痘病毒,本研究通过RT-PCR获得PRRSVCH-1a株GP5蛋白基因,将其克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至转移质粒pSC11中,构建重组转移质粒(pSC11-GP5)。将pSC11-GP5转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,与牛痘病毒进行同源重组。在含有X-gal的琼脂培养基上进行蓝斑筛选,获得了含有PRRSV GP5基因的重组病毒(rWR-PRRSV-GP5)。IFA及动物试验表明,重组病毒表达了PRRSVGP5蛋白,并在免疫小鼠体内诱生了较强的PRRSV抗体。实验表明,该重组病毒所表达的PRRSV GP5蛋白保持了良好的抗原性,为进一步研究PRRSV GP5蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 重组牛痘病毒
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乙肝病毒X蛋白对凋亡蛋白PDCD5表达的影响及意义 被引量:1
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作者 郭锋伟 赵志辉 +2 位作者 杨盛力 袁祖成 薛磊 《中国肿瘤外科杂志》 CAS 2011年第2期90-92,95,共4页
目的研究乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对凋亡蛋白PDCD5的影响及意义。方法建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,通过Real-time PCR和Western Blot检测转染HBx基因后PDCD5 mRNA和蛋白表达水平的改变。结果转染HB... 目的研究乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对凋亡蛋白PDCD5的影响及意义。方法建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,通过Real-time PCR和Western Blot检测转染HBx基因后PDCD5 mRNA和蛋白表达水平的改变。结果转染HBx基因后PDCD5 mRNA和蛋白表达水平上调。结论 HBx可上调凋亡蛋白PDCD5的表达,进一步显示其可能对细胞凋亡具有双重调节作用。 展开更多
关键词 乙肝病毒X蛋白 凋亡相关蛋白 pdcd5表达 肝细胞凋亡 L02细胞系
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