血小板衍生生长因子BB参与生长板损伤修复的作用与机制

背景:在生长板损伤炎症初期,血小板衍生生长因子BB通过促进间充质祖细胞浸润、软骨形成、成骨反应以及调控骨重塑来促进生长板损伤的修复。目的:总结血小板衍生生长因子BB在生长板损伤修复中的作用机制。方法:检索PubMed、维普、万方数据和中国知网数据库,中文检索词为“生长板损伤,骨桥形成,血小板衍生因子BB,修复”,英文检索词为“growth plate injury,bone bridge,PDGF-BB,repair”,最终筛选66篇文章进行综述。结果与结论:生长板损伤经历早期炎症、血管重建、纤维骨化、结构重塑等病理进程,伴随着软骨细胞、血管内皮细胞、干细胞、成骨细胞、破骨细胞多种细胞交叉对话。血小板衍生生长因子BB作为损伤早期炎症反应的重要因子通过介导多种细胞炎症反应调控损伤修复过程,靶向血小板衍生生长因子BB介导的炎症刺激可能通过改善破骨细胞、成骨细胞、软骨细胞功能活性延缓生长板损伤骨桥形成进程,实现生长板损伤修复。血小板衍生生长因子BB对生长板损伤部位的血管生成和骨修复组织形成以及未损伤生长板的软骨内骨延长功能具有重要作用,抑制血小板衍生生长因子BB启动的血管形成与软骨内成骨之间的偶联效应将有可能实现生长板损伤修复。

聚己内酯和β-磷酸三钙复合支架经血小板衍生生长因子BB修饰后的促血管生成作用

背景:组织工程技术的发展为骨缺损的修复重建提供了新的思路,但是血管化问题使组织工程骨应用于临床受到了制约。血小板衍生生长因子在促进骨细胞形成的同时也可促进骨组织中血管的形成。目的:观察聚己内酯/β-磷酸三钙/血小板衍生生长因子BB支架对骨髓间充质干细胞成骨分化及人脐静脉内皮细胞增殖、黏附的影响,以及修复骨缺损的效果。方法:①利用3D快速成形机制备聚己内酯/β-磷酸三钙支架(记为PCL/β-TCP支架),将支架浸渍于血小板衍生生长因子BB溶液中制备聚己内酯/β-磷酸三钙/血小板衍生生长因子BB支架(记为PCL/β-TCP/PDGF BB支架)。②体外实验:将骨髓间充质干细胞、人脐静脉内皮细胞分别接种于两种支架上,检测骨髓间充质干细胞的成骨分化情况,检测人脐静脉内皮细胞的增殖、黏附与成血管基因表达。③体内实验:取21只成年大鼠,建立双侧胫骨缺损模型,实验组植入PCL/β-TCP/PDGF BB支架,对照组植入PCL/β-TCP支架,空白组不植入支架,每组7只。术后12周,进行Micro-CT扫描、骨组织形态学观察及成骨与成血管基因检测。结果与结论:①体外实验:与PCL/β-TCP支架相比,PCL/β-TCP/PDGF BB支架可促进骨髓间充干细胞的成骨分化,促进人脐静脉内皮细胞的增殖与黏附,促进人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子、CD31 mRNA的表达。②体内实验:Micro-CT扫描显示,空白组可见明显的骨缺损,对照组、实验组均可见大量新生的骨组织,实验组修复效果更明显。苏木精-伊红染色、Masson和番红固绿染色显示,空白组没有明显骨组织形成;对照组可见大量成熟度较高的骨基质及相对较少的不成熟软骨组织;实验组可见大量的骨样组织及成熟度较高的软骨组织,大部分髓腔再通。RT-PCR检测显示,实验组骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子、碱性磷酸酶、骨钙素、血管内皮生长因子、CD31的mRNA表达量均高于对照组(P<0.05)。③结果表明:相比于PCL/β-TCP支架,PCL/β-TCP/PDGF BB支架可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化、人脐静脉内皮细胞的增殖、黏附并表达成血管相关基因,促进骨缺损的修复。

不同激活剂对富血小板血浆生长因子的影响

背景:生长因子是富血小板血浆在临床治疗中发挥作用的关键效应分子,不同激活剂激活富血小板血浆后生长因子浓度存在差异,是影响临床疗效的重要因素。目的:分析不同激活剂对富血小板血浆中生长因子质量浓度的影响。方法:招募12名健康志愿者,采集EDTA-K2抗凝静脉血,应用二次离心法制备富血小板血浆。比较静脉血与富血小板血浆中生长因子的质量浓度差异。将富血小板血浆分别与4种激活剂(生理盐水、凝血酶、葡萄糖酸钙、葡萄糖酸钙+凝血酶)按照体积比10∶1混匀,置于37℃恒温水浴箱孵育30 min,离心后提取上清液,检测生长因子质量浓度;利用血琼脂平板检测上清液中的细菌生长情况;采用Pearson相关分析不同激活剂与富血小板血浆中生长因子质量浓度的相关性,血小板计数值与富血小板血浆中生长因子质量浓度的相关性。结果与结论:(1)富血小板血浆中血小板衍生生长因子BB、血小板衍生生长因子AB、血管内皮生长因子、表皮生长因子的质量浓度分别是静脉血中对应生长因子质量浓度的8.7,22.2,2.3,2.8倍(P <0.05);(2)与生理盐水组比较,凝血酶组、葡萄糖酸钙组、葡萄糖酸钙+凝血酶组中血小板衍生生长因子BB、血小板衍生生长因子AB、血管内皮生长因子、表皮生长因子质量浓度升高(P <0.05);凝血酶组、葡萄糖酸钙组血小板衍生生长因子BB质量浓度高于葡萄糖酸钙+凝血酶组(P <0.05),凝血酶组血小板衍生生长因子AB质量浓度高于葡萄糖酸钙组、葡萄糖酸钙+凝血酶组(P <0.05),凝血酶组表皮生长因子质量浓度低于葡萄糖酸钙组、葡萄糖酸钙+凝血酶组(P <0.05);(3)血琼脂平板实验结果显示4组上清液中均无细菌生长;(4)Pearson相关分析显示,富血小板血浆中血小板衍生生长因子BB质量浓度与凝血酶存在正向强相关性(r=0.683,P <0.05),血管内皮生长因子质量浓度与凝血酶、葡萄糖酸钙、葡萄糖酸钙+凝血酶激混合剂存在正向强相关性(r=0.730,0.789,0.686,P <0.05);富血小板中血小板计数值与4种生长因子质量浓度均无相关性(P> 0.05);(5)结果提示,不同激活剂对富血小板血浆中生长因子浓度产生不同影响,建议临床根据不同生长因子质量浓度和治疗需求选择不同激活剂,以提高临床疗效。

血小板衍生生长因子BB在川崎病血小板增多中的作用及机制研究

目的通过体内外实验探究血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对川崎病(Kawasaki disease,KD)小鼠和人巨核细胞株Dami细胞生成血小板的作用及机制。方法ELISA检测KD及健康儿童各40例血清PDGF表达水平。C57BL/6小鼠构建KD模型,随机分为正常组、KD组、伊马替尼组,每组30只。检测各组血常规及PDGF-BB、巨核细胞集落形成单位(megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK)、巨核细胞标记物CD41表达。采用CCK-8、流式细胞术、实时定量PCR、Western blot检测PDGF-BB对Dami细胞生成血小板的作用和机制。结果PDGF-BB在KD患儿血清中高表达(P<0.001)。KD组小鼠血清PDGF-BB高表达(P<0.05)、CFU-MK及巨核细胞标记物CD41表达增加(P<0.001);伊马替尼组CFU-MK及CD41表达减少(P<0.001)。体外实验结果显示,PDGF-BB促进Dami细胞增殖、血小板生成、PDGFR-βmRNA及p-Akt蛋白表达(P<0.05);联合组(PDGF-BB 25 ng/mL+伊马替尼20μmol/L)血小板生成、PDGFR-βmRNA和p-Akt蛋白表达少于PDGF-BB组(P<0.05)。结论PDGF-BB可能通过与PDGFR-β结合,激活PI3K/Akt通路,促进巨核细胞增殖、分化及血小板生成;PDGFR-β抑制剂伊马替尼可减少血小板生成,为KD血小板增多的诊疗提供了新的策略。

重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)质控方法和质量标准的研究

目的:建立重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)的质控方法和质量标准。方法:以BALB/C 3T3细胞增殖实验及MTT染色法测定dIPDGF-BB的生物学活性,还原型SDS-PAGE确定B链分子量,SDS-PAGE和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按《中国生物制品规程》2000版规定进行。结果:用建立的方法对连续3批rhPDGF-BB原液和成品进行了检定,各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于重组人血小板衍生生长因子产品的常规检定。

重组人血小板衍生生长因子-BB对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞内黏着斑激酶表达的影响

目的观察血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞内黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达的影响,探讨PDGF-BB对正畸牙移动骨改建中破骨细胞的作用及其下游信号通路。方法 80只SD雄性大鼠上颌安装施加50 g力的正畸装置,牵引上颌第一磨牙近中移动,隔日于正畸牙局部黏膜注射10 ng的重组人血小板衍生生长因子-BB(recombinant human platelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB),对照组注射磷酸盐缓冲液,在加力后l、4、7、10、14 d处死动物,制备标本并测量牙齿移动距离,抗酒石酸酸性磷酸酶计数压力侧破骨细胞数量,免疫组织化学方法观察破骨细胞内FAK表达变化。结果 PDGF-BB明显促进压力侧破骨细胞增殖,加速正畸牙移动,除第1天实验组与对照组牙移动距离差异无统计学意义以外,其余均有统计学意义(P<0.05);各观察点实验组破骨细胞FAK表达均高于对照组,灰度值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性的PDGF-BB影响正畸牙移动骨改建过程。在大鼠正畸牙压力侧牙槽骨改建的过程中,FAK参与了破骨细胞信号转导的下游通路,其表达能被外源性的rhPDGFBB所调节。

血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:研究表明,小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,尚无血小板衍生生长因子BB是否可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的相关研究。目的:探讨血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法:①体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34的表达,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行血小板衍生生长因子BB干预实验;②第3代骨髓间充质干细胞经25μg/L血小板衍生生长因子BB诱导3 d,进行Ⅰ型胶原免疫荧光染色,然后采用碱性磷酸酶改良钙钴法和偶氮偶联法、茜素红法对细胞进行染色,鉴定成骨细胞的表面特征,最后采用RT-PCR检测Runx-2和Gli-2的mRNA水平。结果与结论:①经细胞免疫荧光染色,诱导后细胞的Ⅰ型胶原绿色荧光表达率>90%;②经碱性磷酸酶改良钙钴法染色,可见细胞胞质中有黑色条索状附着,说明这些细胞均表达有活性的碱性磷酸酶;经碱性磷酸酶偶氮偶联法染色,可见细胞胞浆中含有蓝色的有活性的碱性磷酸酶;经茜素红染色,可见细胞聚集在一起形成小的红色的钙结节;③经RT-PCR检测,血小板衍生生长因子BB诱导后Gli-2和Runx-2的mRNA表达均高于未诱导骨髓间充质干细胞(P<0.05);④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞经血小板衍生生长因子BB诱导后可以分化为具有功能的成骨细胞。

血小板衍生生长因子BB与慢性乙型肝炎患者肝纤维化的关系

目的 探讨血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)在慢性乙型肝炎患者肝纤维化发病机制中的作用。 方法 对43例慢性乙型肝炎患者行肝穿刺活检 ,肝组织按常规制成石蜡块 ,分别进行HE染色、苦味酸天狼红染色 ,以判断肝脏纤维化程度及炎症活动度 ;同时行PDGF -BB免疫组织化学染色 ,半定量分析PDGF-BB阳性细胞表达情况。 结果 随着肝纤维化程度和炎症活动度的加重 ,PDGF -BB在组织中的表达逐渐明显。 结论PDGF -BB是慢性乙型肝炎患者肝纤维化形成的重要的细胞因子 ,能反映肝纤维化进展状况。

人血小板衍生生长因子BB的原核高表达及其包涵体复性

目的:在原核系统内获得高表达的人血小板衍生生长因子BB(PGDF-BB),并对形成的包涵体进行复性。方法:对PGDF-BB核酸编码序列进行优化,构建pET-22b-PGDF-BB表达载体,以提高PCDF-BB的表达量;优化PGDF-BB包涵体复性条件,提高蛋白复性率和生物活性。结果:构建了pET-22b-PGDF-BB高效表达载体,原核表达的重组人PGDF-BB占细菌总蛋白的25%,PGDF-BB包涵体复性率达到15%。结论:对表达序列的优化设计可显著提高蛋白的表达量,复性方法的改良提高了蛋白的复性率和生物活性。

人血小板衍生生长因子BB亚型包涵体复性与纯化

目的:优化人血小板衍生生长因子BB亚型(PGDF-BB)包涵体复性方法与纯化条件,获得具有较好生物活性的重组PGDF-BB蛋白。方法:对PGDF-BB包涵体以梯度尿素进行变性,选择最佳包涵体变性浓度;比较不同复性条件下的复性率,稳定PGDF-BB包涵体复性方法;参照该蛋白的理化性质,选择适合PGDF-BB重组蛋白的纯化方法。结果:原核系统内实现了PGDF-BB的高表达;通过优化包涵体复性方法,重组蛋白的包涵体复性率可达40%以上;经过多个纯化方法相结合,PGDF-BB的纯度达到95%。结论:通过实验条件的优化,提高了PGDF-BB包涵体复性率,获得高纯度、高生物活性的重组PGDF-BB蛋白。

川续断干预正畸力作用下兔牙周组织中血小板衍生生长因子BB的表达

背景:有研究发现一些中草药在骨折愈合过程中可从不同途径加速骨组织的改建,促进骨折愈合。目的:观察中药川续断水煎液对家兔正畸牙移动及牙移动过程中血小板衍生生长因子BB表达的影响。方法:将27只家兔随机分为实验组(n=12)、对照组(n=12)和空白对照组(n=3,不做任何处置)。实验组与对照组建立双侧下颌第一磨牙近中移动正畸加力模型后,实验组每日灌服3g/kg川续断水煎液,对照组每日灌服等量生理盐水,加力后1,7,14,21d在测量牙齿移动距离后行血小板衍生生长因子BB免疫组织化学分析。结果与结论:加力后7,14,21d,实验组牙移动距离大于对照组(P<0.05)。正畸加力后,随天数增加实验组与对照组血小板衍生生长因子BB的表达均呈逐渐增强趋势,实验组加力后7,14,21d血小板衍生生长因子BB水平高于对照组(P<0.05)。提示川续断水煎液可促进家兔正畸牙齿移动,并上调血小板衍生生长因子BB的表达。

血清血小板衍生生长因子BB水平与慢性乙型肝炎的相关性分析

目的探讨血清血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)水平与慢性乙型肝炎(CHB)的相关性。方法对CHB患者血清PDGF-BB水平与其临床相关因素(年龄、性别、病史、血清HBVDNA水平、肝功能、肝纤维化指标(HA、CⅣ、PCⅢ、LN)和HBeAg状况进行相关性分析。结果 CHB患者血清PDGF-BB水平与其年龄、性别、病史、HBVDNA水平无相关性(P>0.05);与肝功能和肝纤维化指标指标显著相关(P<0.01);肝功能分级与血清PDGF-BB水平呈正相关(P<0.01);HBeAg阴性CHB血清PDGF-BB水平高于HBeAg阳性CHB(P<0.05)。结论 CHB血清PDGF-BB水平与肝脏炎症活动程度和HBeAg状态有显著相关性,能反映CHB肝功能损害的程度亦可反映CHB肝纤维化程度,可应用于CHB的肝功能和肝纤维化程度的评估。

高脂血症肾移植患者外周血血小板衍生生长因子BB及其受体mRNA表达及辛伐他汀治疗的影响

目的探讨肾移植术后高脂血症患者外周血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)及其受体PDGFβRmRNA的表达及辛伐他汀治疗的影响。方法根据患者肾移植术后6个月的血脂水平,从167例肾移植受者中随机选择60例作为研究对象,其中30例为血脂正常组(A组),30例为血脂增高组(B组),健康体检者30例作为对照组,逆转录聚合酶链反应检测各组外周血PDGF-BB及PDGFβRmRNA表达水平。血脂增高组给予辛伐他汀治疗,分别于1.5个月、3个月时复查血脂水平及PDGF-BB及PDGFβRmRNA表达水平。结果肾移植受者外周血PDGF-BB及PDGFβRmR-NA表达水平显著高于对照组,B组增高更为显著。辛伐他汀治疗1.5个月时,B组患者血脂水平及外周血PDGF-BB及PDGFβRmRNA表达水平显著降低,3个月时进一步降低。结论肾移植后高脂血症患者外周血PDGF-BB及PDGFβRmRNA表达水平显著增高,可能参与了移植后心血管疾病及慢性移植肾排斥的发生。辛伐他汀治疗可显著降低肾移植受者外周血PDGF-BB及PDGFβRmR-NA表达水平,此可能有助于减少或延缓移植后心血管疾病及慢性移植肾病的发生。

血管紧张素Ⅱ和血小板衍生生长因子BB:引起系膜细胞内游离钙浓度变化的异同

目的 :研究血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和血小板衍生生长因子BB(platelet derivedgrowthfactor BB ,PDGF BB)引起的肾小球系膜细胞 (MC)内游离钙浓度变化的异同。 方法 :以体外培养的MC为研究对象 ,激光共聚焦显微术结合Fura 3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。 结果 :AngⅡ和PDGF BB均可浓度依赖性地引起MC内游离钙浓度的升高 ,但二者的动态变化曲线存在显著不同。无钙缓冲液和钙通道阻滞剂均可抑制AngⅡ和PDGF BB引起的细胞内钙浓度变化 ,但其抑制的方式和程度均有所不同。 结论 :AngⅡ和PDGF BB通过不同的激发途径引起MC内游离钙浓度的升高。

血小板衍生生长因子BB亚型在毕赤酵母中的表达及纯化

目的:用毕赤酵母表达系统表达重组人血小板衍生生长因子BB亚型(PDGF-BB)。方法:采用PT-PCR从人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞中获得目的基因,克隆到表达载体p MEX9K中,质粒线性化后转化酵母表达菌株GS115,筛选后的酵母表达菌株经BMGY/BMMY培养基体系诱导表达后,通过疏水作用、离子交换、凝胶过滤纯化获得目的蛋白,采用SDS-PAGE、Western印迹、N端氨基酸序列和MTT增殖活性测定等方法检测目的蛋白性质及生物活性。结果:重组人PDGF-BB为分泌表达,表达量大于100 mg/L;经三步纯化,获得纯度高于95%且具有较高活性(5.0×105IU/mg)的目标蛋白。结论:利用毕赤酵母表达系统表达重组人PDGF-BB,表达产量高,成本低,工艺简单,易于工业化放大,有良好的市场前景。

不同力下大鼠磨牙牙周膜血小板衍生生长因子BB时空表达研究

目的研究大鼠磨牙牙周膜中血小板衍生生长因子BB(platelet-de rived growth factor-BB,PDGF-BB)在力改变时的表达变化及其意义。方法建立8周龄雄性SD大鼠力丧失和力过载的动物模型,采用免疫组织化学的方法检测在实验12h及3、7、14、30d牙周膜细胞中PDGF-BB表达的动态变化。结果 PDGF-BB在力过载磨牙近远中牙周膜中表达逐渐增强,7d时信号最强,为72.78±6.90,14d后表达显著减弱至42.84±9.53;力丧失后3d牙周膜细胞中PDGF-BB表达显著增强,7d时表达最强,为66.10±11.61,14d后逐渐恢复正常表达水平。结论 PDGF-BB在牙周膜改建过程中的表达变化与力变化密切相关,提示临床上治疗有牙周疾病的患牙时,为了取得长期稳定的疗效,应更多地考虑力的影响。

破骨细胞衍生的偶联因子鞘氨醇-1-磷酸及血小板衍生生长因子BB对成骨细胞的调节作用

背景:骨稳态的维持很大程度上取决于破骨细胞和成骨细胞之间的信号交流,以及骨吸收与骨形成的偶联,这种紧密的偶联作用对维护骨合成代谢的平衡至关重要。研究发现,破骨细胞分泌一些独立于骨吸收的合成信号分子,刺激新骨生成。目的:就破骨细胞衍生的偶联因子鞘氨醇-1-磷酸、血小板衍生生长因子BB对成骨细胞调节作用的研究现状进行综述。方法:由第一作者检索CNKI、PubMed等数据库,分别以“破骨细胞,成骨细胞,偶联因子,鞘氨醇-1-磷酸,血小板衍生生长因子,骨重建,迁移,趋化,骨形成”和“osteoclast,osteoblast,coupling factors,sphingosine-1-phosphate(S1P),platelet-derived growth factor(PDGF),bone remodelling,migrate,chemotaxis,bone formation”为检索词进行检索,审阅与破骨细胞衍生的偶联因子鞘氨醇-1-磷酸、血小板衍生生长因子BB对成骨细胞迁移、成骨分化调节作用的相关文献,根据纳入标准最终选取62篇文献进行综述。结果与结论:①破骨细胞衍生的偶联因子鞘氨醇-1-磷酸、血小板衍生生长因子BB指引成骨系细胞迁移至骨吸收陷窝;②并促进成骨系细胞的存活和成骨分化,促进新骨形成以填充骨缺损。

人牙周膜细胞在羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB环境中的增殖

背景:羧甲基壳聚糖或血小板衍生生长因子均可促进对体外培养人牙周膜细胞的增殖。目的:观察羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响。方法:取生长良好的第4或5代人牙周膜细胞,分组培养:对照组(仅含体积分数2%FBS的DMEM培养液)、10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖组、800mg/L羧甲基壳聚糖组。结果与结论:①MTT检测:与对照组比较,其余各组均能促进人牙周膜细胞增殖,且100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组细胞增殖高于其他组(P<0.05),100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板生性生长因子BB促增殖作用最显著(P<0.05)。②细胞周期检测:与MTT检测结果相符。③碱性磷酸酶活性:与对照组比较,除10μg/L血小板衍生生长因子BB组降低外,其余组均增强(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用可促进人牙周膜细胞增殖和骨向分化。

联合应用血管内皮生长因子及血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的血管化及增殖能力

背景:组织工程骨为修复极限骨缺损提供了新的选择,但只有先形成完善的功能性血管网,保证稳定的成骨和骨整合,才能取得良好的治疗效果。因此,血管化可以说是组织工程骨面临的最大挑战与难题。目的:探讨体外联合应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)对骨髓间充质干细胞增殖和成血管能力的影响。方法:体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别用不同质量浓度VEGF(20,40,60,80,100,120μg/L)、PDGF-BB(20,40,60,80,100,120μg/L)联合干预以及100μg/L VEGF单独干预、100μg/L PDGF-BB单独干预,CCK-8实验检测2种细胞因子促进细胞增殖的最佳质量浓度,然后在第7天和第14天通过RT-PCR方法检测血管生成素1、缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子等相关成血管基因的表达量。结果与结论:①加入生长因子后,细胞增殖能力明显提高,联合作用效果更优,最佳组合为80μg/L VEGF+80μg/L PDGF-BB;②VEGF、PDGF-BB都可以促进血管生成素1、缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子的mRNA表达,联合应用时效果最佳;③缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子mRNA表达随时间延长有所升高,差异有显著性意义(P<0.05);而血管生成素1、胰岛素样生长因子mRNA表达量随时间延长有所降低,差异有显著性意义(P<0.05);④体外实验结果证明,当VEGF和PDGF-BB质量浓度均为80μg/L时,能够持续稳定促进整个血管形成过程,且促进作用优于单独一种生长因子。

三七皂苷R1对血小板衍生生长因子BB诱导内皮细胞增殖的影响

目的探讨三七皂苷R1(NR1)对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的内皮细胞增殖的影响。方法①取内皮细胞并分为6组,空白组常规培养,PDGF-BB组加入PDGF-BB培养,PDGF-BB+10μmol/L NR1组、PDGF-BB+20μmol/L NR1组、PDGF-BB+40μmol/L NR1组、PDGF-BB+80μmol/L NR1组分别加入PDGF-BB和相应浓度NR1培养,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组内皮细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测各组内皮细胞凋亡情况。②取内皮细胞并分为3组,对照组常规培养,PDGF-BB组加入PDGF-BB培养,PDGF-BB+NR1组加入PDGF-BB和40μmol/L NR1培养,应用Western blot及qRT-PCR法检测各组中CyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白和mRNA表达情况。结果PDGF-BB组培养24 h和48 h细胞增殖率均明显高于空白组(P均<0.05);PDGF-BB+20μmol/L NR1组、PDGF-BB+40μmol/L NR1组、PDGF-BB+80μmol/L NR1组细胞增殖率均明显低于PDGF-BB组(P均<0.05),且呈时间和剂量依赖性降低。PDGF-BB+20μmol/L NR1组、PDGF-BB+40μmol/L NR1组、PDGF-BB+80μmol/L NR1组培养24 h和48 h细胞凋亡率均明显高于PDGF-BB组(P均<0.05),且呈时间和剂量依赖性增高。PDGF-BB组CyclinD1、PCNA蛋白及mRNA表达量均明显高于对照组(P均<0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达量均明显低于对照组(P均<0.05);而PDGF-BB+NR1组CyclinD1、PCNA蛋白及mRNA表达量均明显低于PDGF-BB组(P均<0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达量均明显高于PDGF-BB组(P均<0.05)。结论PDGF-BB可诱导内皮细胞增殖;NR1能抑制内皮细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制细胞周期蛋白CyclinD1和PCNA的表达,诱导促凋亡基因Bcl-2的表达有关。