裸鼠模型的人钠/碘转运体基因转染人大细胞肺癌介导放射性核素显像

目的在动物体内实验观察人钠/碘转运体(hNIS)基因转染人大细胞肺癌介导放射性核素显像是否可行。方法①利用重组质粒以脂质体转染法将hNIS基因转染入人大细胞肺癌H460细胞系中,获得稳定表达hNIS的细胞株(hNIS-H460)。②用hNIS-H460细胞株建立大细胞肺癌荷瘤裸鼠模型,进行放射性核素99mTcO4-显像和131I显像。结果①体外实验表明hNIS-H460细胞株可以摄取碘。②裸鼠大细胞肺癌(hNIS-H460)移植瘤的99mTcO4-和131I显像结果较清晰。结论转染后的hNIS-H460细胞具有一定的摄碘能力。裸鼠大细胞肺癌(hNIS-H460)移植瘤可以进行99mTcO4-和131I显像;99mTcO4-显像的质量优于131I显像。

人钠/碘同向转运体基因转染肺癌A549细胞介导放射性碘摄取实验研究

目的:研究重组人钠/碘同向转运体基因(hNIS)腺病毒介导肺癌A549细胞的碘摄取、外流和杀伤情况,为放射性碘治疗肺癌提供理论和实验依据。方法:用重组hNIS腺病毒(AdNIS)感染肺癌A549细胞,检测感染细胞内hNIS蛋白的表达;在体外培养的条件下研究其125I的摄取、外流情况以及131I的杀伤情况。结果:hNIS蛋白在实验组肺癌A549细胞中表达阳性且主要分布于细胞膜上;实验组细胞摄碘能力较对照组高;细胞摄碘后碘外流过程十分迅速;实验组细胞可被131I有效杀伤。结论:应用腺病毒为载体,可以有效的将hNIS基因转染至体外培养的肺癌A549细胞中,并介导肺癌细胞对放射性碘的摄取及选择性杀伤作用。

人钠/碘同向转运体基因cDNA的克隆与序列测定

为研究人钠/碘同向转运体(hNIS)的生物学性能和用于肿瘤放射性碘治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列,将其克隆至pUCm-T载体中。序列分析证实克隆 片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hNIS基因cDNA。

人钠／碘同向转运体基因转染胶质瘤细胞介导放射性碘治疗的研究

目的在体外细胞实验中证明转染人钠／碘同向转运体（hNIS）基因介导放射性碘治疗胶质瘤是有效的。方法以脂质体转染法、用重组质粒将hNIS基因转染至人胶质瘤细胞株U251中。经过C-418硫酸盐筛选获得稳定表达hNIS的细胞株（hNIS—U251），然后进行体外摄^125Ⅰ实验、NaClO4抑制实验、体外^125Ⅰ外流和内流实验，并绘制时间-放射性曲线。对经3700MBq／L^131Ⅰ处理的hNIS-U251细胞进行四甲基偶氮唑蓝（MTF）分析和流式细胞仪测定分析。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较用单因素方差分析（LSD法）。结果hNIS-U251细胞株可以摄取碘，其摄碘能力较U251细胞提高117倍左右[2种细胞所摄取。1分别为（50469．88±997．29）和（432．92±89．28）计数·min^-1]。经^131Ⅰ处理后，hNIS—U251细胞株的细胞增殖活性低于U251细胞株，两者S期细胞比率（SPF）差异有统计学意义（t=35．5，P〈0．001）；增殖指数（PI）差异有统计学意义（t=6．33，P〈0．05）。结论^131Ⅰ可以被hNIS-U251细胞摄取，而且可以有效地杀伤胶质瘤细胞。

hNIS转基因介导^(131)碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG。采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况。CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS。CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8min。131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01)。结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。

重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能

【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导入到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞,转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNIS mRNA水平,转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致。实验组转染后48h,在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNIS mRNA高水平表达,对照组基本无hNIS mRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰,实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后,能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能,为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础。

hNIS基因转染SW480细胞裸鼠模型的建立及核素显像

目的:观察人钠/碘转运体(h NIS)重组质粒(pc DNA3.1+-h NIS)脂质体法转染结肠癌细胞(SW480)的裸鼠模型介导放射性核素显像的可行性。方法:酶切鉴定pc DNA3.1+-h NIS,转染SW480细胞并检测h NIS基因及蛋白的表达,筛选稳定表达h NIS的SW480细胞,建立肿瘤裸鼠模型并进行放射性核素99mTc O4-显像。结果:pc DNA3.1+-h NIS转染SW480细胞后成功检测到h NIS基因及蛋白的表达,结肠癌裸鼠模型成功介导放射性核素99mTc O4-显像。结论:重组质粒pc DNA3.1+-h NIS可以实现结肠癌裸鼠模型的h NIS表达,使放射性核素显像和结肠癌放射性核素治疗成为可能。

hNIS和hTPO-1基因的同时克隆及测序

目的同时克隆人钠/碘同转运体(hNIS)和甲状腺过氧化物酶(hTPO-1)基因,为下一步共同转染肿瘤细胞介导放射性碘的摄取与有机化,延长放射性碘的停留时间,为治疗未分化甲状腺癌和非甲状腺癌提供更为有效的方法。方法运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),从人甲状腺组织总RNA中,同时全长扩增出hNIS和hTPO-1基因cDNA序列,并将它们分别克隆到pUCm-T载体上。结果与结论hNIS和hTPO-1基因cDNA,可同时成功克隆和测序。

脂质体介导人NIS基因转染肺癌A549细胞及其蛋白表达

目的研究人钠/碘同向转运体(NIS)基因转染肺癌细胞及其蛋白表达。方法鉴定质粒pcDAN3-hNIS中的插入基因NIS基因。培养的肺癌A549分为两组:实验组(转染pcDAN3-hNIS),对照组(转染pcDAN3)。脂质体介导NIS基因转染肺癌细胞,采用Western Blot免疫印迹法和免疫组化法检测肺癌细胞中NIS蛋白的表达。结果实验组的肺癌细胞有NIS蛋白的表达,而对照组无表达,两组比较差异有显著性(P=0.000)。结论转染人NIS基因的肺癌细胞可表达NIS蛋白,为探索放射性碘治疗肺癌的研究提供理论依据。

hTERT启动子调控hNIS基因介导肺癌细胞碘摄取和^131Ⅰ治疗的实验研究

目的构建含人端粒酶反转录酶（hTERT）核心启动子调控的人钠／碘同向转运体（hNIS）基因重组腺病毒，并靶向转染至肺癌A549细胞中特异性表达。探讨hTERT启动子调控的hNIS基因介导放射性碘治疗肿瘤的可能性。方法应用AdEasy系统构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS，同时构建巨细胞病毒（CMV）启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照，不含hNIS的重组腺病毒Ad-CMV作为阴性对照。应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性，摄碘实验检测表达的hNIS蛋白功能，细胞克隆形成实验评价^131Ⅰ对转染肿瘤细胞的毒性作用。结果成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS及Ad-CMV，并经PCR验证正确。RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad·hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞摄碘能力比阴性对照组Ad-CMV转染的细胞分别提高了23和31倍，且摄碘能力可以被NaClO4抑制。Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞均可被^131Ⅰ杀死，2组细胞成活率分别为（31．2±1．45）％和（23．6±4．08）％，而阴性对照组和未转染病毒组分别为（89．0±2．99）％和（91．2±4．63）％。结论hTERT启动子调控的hNIS重组腺病毒转染肿瘤细胞后，应用^131Ⅰ治疗有望成为一种新的基因靶向治疗手段。

hNIS基因转染介导碘-131杀伤肝癌细胞的研究

目的将hNIS基因转染到肝癌细胞使其具备主动吸收碘的功能,观察转基因肝癌细胞吸收碘的能力,并进一步观察其介导放射性碘杀伤肝癌细胞的可能性。方法重组含有hNIS的载体,并转染至肝癌细胞HepG2,利用稳定表达的转基因肝癌细胞进行吸碘能力测定,并应用MTT法测定碘-131杀伤肝癌细胞的效果。结果γ计数仪测定表达hNIS基因的肝癌细胞吸收碘的能力比对照组高10倍,MTT法测定结果显示表达hNIS基因的肝癌细胞抑制率明显高于对照组。结论转基因肝癌细胞具有浓聚碘的能力,并且可以介导碘-131杀伤肝癌细胞。