司美格鲁肽联合二甲双胍对2型糖尿病患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值、网膜素-1及成纤维细胞生长因子-21的影响

目的探讨司美格鲁肽联合二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)患者血清载脂蛋白B与载脂蛋白A1比值(ApoB/ApoA1)、网膜素-1(Omentin-1)、成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)水平的影响。方法选取86例T2MD患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组(二甲双胍治疗)和观察组(司美格鲁肽联合二甲双胍治疗)。比较2组治疗前后空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、血脂指标、胰岛素自身抗体(IAA)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)及ApoB/ApoA1、Omentin-1、FGF-21水平,以及不良反应发生情况。结果治疗后,观察组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组,高密度脂蛋白胆固醇水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组HOMA-IR、IAA低于对照组,HOMA-β高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组血清Omentin-1水平高于对照组,ApoB/ApoA1、FGF-21水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组发生1例腹泻,2例便秘,不良反应总发生率为6.98%;观察组发生低血糖、腹泻各1例,不良反应总发生率为4.65%;2组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论司美格鲁肽联合二甲双胍能有效控制T2MD患者血糖和血脂水平,提高Omentin-1水平,降低ApoB/ApoA1、FGF-21水平。

人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白hBD2-haFGF1的构建、表达及生物信息学分析

目的为开发新型抗痤疮药物,构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白。方法以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板,分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因。采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因。构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体,并转化入E.coli BL(21)进行诱导表达。通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析。结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因,SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因,成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b,经过IPTG诱导,hBD2-haFGF1融合蛋白可在E.coli BL(21)中有效表达,相对分子量为23 800。生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达,是一个不稳定的亲水性蛋白,具有较好的热稳定性。hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成,结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域。结论构建了hBD2-haFGF1融合基因,并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白,通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析,上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础。

线粒体融合素基因-2对人骶韧带成纤维细胞增殖及功能的影响

目的：研究外源性线粒体融合素基因-2（Mfn2）表达对骶韧带成纤维细胞的增殖及其合成前胶原蛋白功能的影响。方法：取新鲜骶韧带组织，用组织块法在体外培养出成纤维细胞。将第2～4代细胞分组：转染LV-Mfn2-GFP组（Mfn2＋组），转染LV-GFP组（Mfn2-组）和未转染组（对照组）。流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达，RT-PCR和Western blot检测Mfn2表达。细胞计数和cck-8法检测Mfn2对细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞周期分布。RT-PCR和Western blot检测细胞前胶原1 A1/1A2/3A1的表达。结果：转染慢病毒的成纤维细胞GFP蛋白表达率73.2％～79.1％，转染Mfn2＋组成纤维细胞稳定高表达Mfn2蛋白，显著高于Mfn2-组和对照组（P＜0.05，both）。cck-8实验提示，转染表达Mfn2基因96h后，成纤维细胞增殖明显受到抑制，Mfn2＋组细胞数显著低于 Mfn2-组和未转染组（P＜0.05 both）；DNA直方图分析法测定显示转染Mfn2基因的细胞大部分停滞于G0/G1期，Mfn2＋组G0/G1期细胞比例（60.7％±3.26％），显著高于 Mfn2-组（43.2％±3.32％）和对照组（40.8％±2.28％），（P＜0.05， both）。半定量RT-PCR和Western blot示Mfn2＋组成纤维细胞合成表达前胶原1A1/1A2/3A1显著低于Mfn2-组和对照组（P＜0.05，all）。结论：Mfn2基因在体外转染成纤维细胞后，抑制细胞增殖并使成纤维细胞前胶原蛋白表达下降，可能是导致骶韧带细胞外基质减少，影响韧带纤维数量和质量的重要原因。

血管紧张素Ⅱ受体阻断对成年大鼠心肌成纤维细胞ColⅠ和TIMP-1 mRNA水平的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2)在心肌成纤维细胞胶原代谢中的作用,以及AT2受体和AngⅡ1型受体(AT1)作用的差异。方法差速贴壁分离及培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,将细胞分为4组进行药物干预:AngⅡ组、AngⅡ+Losartan(AT1受体阻断剂)组、AngⅡ+PD123319(AT2受体阻断剂)组、AngⅡ+Losartan+PD123319组,应用半定量RT-PCR检测4组细胞中的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、组织蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA水平的表达。结果以β-actin作为内参照,AT1受体阻断使ColⅠ mRNA水平降至原水平的71.8%(P<0.05),AT2受体阻断降至81.5%(P<0.05),共阻断降至50.9%(P<0.05);AT1受体阻断使TIMP-1 mRNA水平降至原水平的88.1%(P<0.05),AT2受体阻断降至75.4%(P<0.05),共阻断后降至44.1%(P<0.05)。结论在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断下调ColⅠ和TIMP1 mRNA水平,说明AT2受体参与胶原的合成与降解代谢,有促进心肌纤维化的作用。

干扰素α-2b抑制瘢痕形成的研究与热点

背景:干扰素是一种类似多肽激素的细胞功能调节物质,生物活性广泛,具有抗病毒、抗增殖活性、抗肿瘤、免疫调节等功能。目的:综述干扰素α-2b药物在多个器官抑制瘢痕形成的作用,以期为临床治疗瘢痕形成提供理论依据。方法:以“干扰素α-2b,成纤维细胞,瘢痕,增生性瘢痕,瘢痕疙瘩”和“IFNα-2b,Interferonα-2b,fibroblasts,scar,hypertrophic scar,keloid”为检索词,从万方、维普、CNKI、PubMed、Web of Science、Elsevier Science Direct等数据库中进行检索筛选,检索时间为1950至2020年。最终纳入42篇文献进行综述。结果与结论:①干扰素α-2b能够抑制瘢痕的发生与发展,可减少细胞外基质胶原蛋白生成,抑制成纤维细胞增殖,也可作用于纤维化相关的细胞因子和基因靶点;②上述研究可为临床上应用干扰素α-2b治疗瘢痕形成提供理论依据。

8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。

抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6融合基因表达在人胆管癌异种移植小鼠的作用

目的探究抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6(FGFR2-CCDC6)表达在人胆管癌异种移植小鼠的抗肿瘤作用。方法选择购自美国模式培养物集存库(ATCC)的人正常肝内胆管上皮细胞HIBEC和稳定转染FGFR2-CCDC6表达质粒的人肝内胆管癌细胞系Hucct1, 分组为沉默FGFR2-CCDC6阴性对照(si-NC)组和沉默FGFR2-CCDC6(si-FGFR2-CCDC6)组。利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测融合基因表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FGFR2、成纤维细胞生长因子2(FGF2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。噻唑蓝(MTT)检测抑制FGFR2对细胞增殖的抑制作用。小鼠荷瘤模型探究抑制FGFR2表达对移植瘤体积的抑制作用。应用SPSS 21.0软件进行分析。结果 Hucct1中的FGFR2-CCDC6表达显著高于HIBEC(1.00±0.05比1.92±0.09, t=15.480, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均明显高于HIBEC(FGFR2:0.54±0.03比1.29±0.05, t=20.360, FGF2:1.32±0.06比1.87±0.09, t=9.207, p-ERK1:0.84±0.05比1.54±0.07, t=14.920, p-ERK2:1.42±0.06比2.11±0.11, t=9.391, 均P<0.05)。si-FGFR2-CCDC6组的FGFR2-CCDC6的mRNA表达水平显著低于si-NC组(1.00±0.06比0.39±0.03, t=19.540, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均显著低于si-NC组(FGFR2:1.32±0.05比0.77±0.04, t=13.080, FGF2:1.93±0.08比1.23±0.07, t=11.12, p-ERK1:1.48±0.07比0.73±0.06, t=15.260, p-ERK2:2.03±0.12比1.44±0.07, t=7.488, 均P<0.05);转染后24 h和48 h细胞增殖率明显低于si-NC组(24 h:0.74±0.06比0.48±0.04, t=6.245, 48 h:0.97±0.07比0.65±0.06, t=6.012, 均P<0.05)。小鼠荷瘤模型发现, si-FGFR2-CCDC6转染荷瘤组移植瘤体积明显小于si-NC参照组(598.00±50.00比476.00±39.00, F=12.530, P<0.05)。结论抑制FGFR2-CCDC6融合基因表达可抑制FGF2/FGFR2/p-ERK1/2通路的激活, 抑制细胞增殖和肿瘤生长, 进而发挥抑癌作用。

FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达。结果模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高。模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低。结论FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关。

FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,FGF-1),对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡及对半胱氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-8(Cysteinyl aspartate specific proteinase-8,Caspase-8)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为:模型组,Heparin(肝素)组,FGF-1组,FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,流式细胞术检测H9c2细胞凋亡率、ELISA法和蛋白印记分析(Western blot)分析检测H9c2细胞Caspase-3和Caspase-8的表达。结果与正常对照组比较,模型组H9c2细胞存活率显著降低(P<0.01);与模型组比较,FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率显著升高(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率,Caspase-3和Caspase-8的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡率,Caspase-3和Caspase-8的表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 FGF-1对TGF-β1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3和Caspase-8的表达有关。

瘦素对基因重组骨形态发生蛋白-2诱导裸鼠异位成骨效能的影响

运用骨形态发生蛋白（BMP）成骨，往往需要联合成纤维细胞生长因子（FGF-2）、血管内皮生长因子（VEGF）等。已经证明这些生长因子和BMP具有协同作用，是否还有其他细胞因子与BMP具有协同效应？本文验旨在观察瘦素（LEP）对rhBMP-2诱导裸鼠异位成骨效能的影响。

抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因的构建与表达

构建重组改构体aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融合基因,使其在大肠杆菌系统中融合表达,以期获得具有靶向FGFR高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白。利用PCR引物延伸的方法拼接得到带有G4S铰链的天蚕素—蜂毒素杂合肽CM与aFGF28-154的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET20b中,构建表达质粒pET-CM-aFGF28-154,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),氨苄青霉素抗性筛选重组转化子。IPTG诱导4 h后,菌液经超声破碎,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的18%。将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白,透析复性并用Heparin Sepharose CL-6B亲和层析,目的蛋白得到初步纯化,为进一步研究蛋白的生物学活性奠定了基础。

人hBD-2-haFGF融合基因原核表达的响应面优化

HBD-2-haFGF是一种具有痤疮治疗作用的新型融合蛋白。为提高重组大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF中hBD-2-haFGF基因的表达水平,本研究尝试优化其诱导表达条件。分别选取IPTG浓度、诱导温度、培养基pH和诱导时间进行单因素试验,在此基础上设计4因素3水平响应面实验,以蛋白表达量作为考察指标。经过响应面分析,响应面二次回归方程为y=55.33-1.59A+0.754B+0.26C+6.33D-0.56AB+5.42AC+9.66AD-2.12BC-0.93BD-2.84CD-4.73A^2-8.11B^2-1.74C^2-4.33D^2。BL21(DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF的最优表达条件为:诱导温度39.52℃,IPTG浓度0.60 mmol/L,pH值7.95,时间3 h,预期灰度值为62.893。通过本研究可为进一步大量诱导制备、纯化hBD-2-haFGF蛋白提供技术支持。

中枢神经细胞瘤临床病理分析

目的：了解中枢神经细胞瘤镜下形态及神经元特异核蛋白（NeuN）、突触素（SYN）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、少突胶质细胞转录因子乏（Olig-2）、上皮膜抗原（EMA）和Ki-67的表达。方法：选择8例中枢神经细胞瘤外科手术标本及1例会诊标本，采用HE染色镜下观察其形态特点；采用免疫组织化学方法检测NeuN、SYN、GFAP、Olig-2、EMA和Ki-67的表达。结果：中枢神经细胞瘤细胞由单一圆形细胞围绕分支状的毛细血管呈蜂窝状排列；免疫组织化学示肿瘤细胞SYN及NeuN均为阳性，Ki-67增殖指数为1％～2％，GFAP灶性阳性，Oligo-2和EMA阴性。结论：中枢神经细胞瘤具有一定的病理形态特征，免疫组化标记有助于诊断。

荷丹胶囊联合瑞舒伐他汀治疗老年高脂血症的临床研究

目的探讨荷丹胶囊联合瑞舒伐他汀钙治疗老年高脂血症临床疗效。方法选取2015年6月—2018年6月在航天中心医院老年病门诊进行治疗的100例高脂血症患者,根据用药不同分为治疗组(50例)和对照组(50例)。对照组口服瑞舒伐他汀钙片,10 mg/次,1次/d;治疗组在对照组治疗基础上口服荷丹胶囊,4粒/次,3次/d。两组均连续治疗8周。观察两组的临床疗效,比较两组治疗前后血脂指标、血清学指标和氧化应激指标的变化情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别是82%、96%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均显著下降,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均显著增高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组TC、TG、LDL-C水平低于对照组,但HDL-C水平高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组C反应蛋白(hs-CRP)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、成纤维细胞生长因子21(FGF-21)、摄食抑制因子-1(NSF-1)、瘦素(LEP)、白细胞介素-6(IL-6)、总氧化态(TOS)水平均较治疗前显著降低,而总抗氧化态(TAS)水平、对氧磷酶-1(PON1)表达均显著增高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组hs-CRP、ECP、FGF-21、NSF-1、LEP、IL-6、TOS水平明显低于对照组,而TAS、PON1水平明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论荷丹胶囊联合瑞舒伐他汀钙治疗老年高脂血症具有较好的临床疗效,可显著改善患者的血脂指标,降低血清炎性因子水平,改善机体氧化应激状态,具有较好的临床推广应用价值。