人防御素-5基因的克隆和真核表达载体的构建

目的对人防御素5(HD-5)基因进行克隆,构建真核表达载体HD5-pPICZαA。方法从人cDNA文库中PCR扩增HD-5基因片段,用EcoRⅠ和XbaⅠ分别双酶切HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA,用T4DNA连接酶连接目的基因片段和pPICZαA,然后转化到E.coli Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和序列鉴定。结果提取阳性克隆的重组质粒,EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后跑电泳获得预期条带;同时重组质粒经序列测定,证实HD-5基因正确插入pPICZαA中,插入位置、方向均正确。结论成功构建人防御素5基因的真核表达载体HD5-pPICZαA,为HD-5蛋白的真核真核表达奠定基础。

HR-HPV DNA、Pax1、HD-5与宫颈锥切术后残留、复发关系及联合预测效能

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV) DNA、配对和家族基因1(Pax1)、人防御素-5(HD-5)等检测对宫颈锥切术后残留、复发的预测价值。方法 回顾性分析2019-08—2021-06安阳市妇幼保健院妇产科行宫颈锥切术的114例高级别子宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的临床资料。根据术后随访1 a期间其中失访8例是否发生残留、复发,分为残留复发组(25例)、无残留复发组(81例)。比较2组术后1个月、3个月、6个月、12个月的HR-HPV DNA、Pax1、HD-5检测结果,采用Logistic回归分析血清指标与术后残留、复发的关系,受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析预测价值。结果 与无残留复发组比较,残留复发组术后1个月、3个月、6个月、12个月的HR-HPV DNA、Pax1、HD-5水平较高(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,术后3个月HR-HPV DNA、Pax1、HD-5与术后残留、复发相关(OR=11.753、13.048、9.293,P<0.05)。术后3个月HR-HPV DNA、Pax1、HD-5对残留、复发预测AUC分别为0.838、0.872、0.785,联合预测AUC为0.924,大于单一指标预测。结论 检测HR-HPV DNA、Pax1、HD-5可用于宫颈锥切术后残留、复发的评估,各指标联合检测对预测术后残留、复发的效果更好,有助于制定相应的治疗方案。