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人降钙素原定量检测方法学评价
被引量:
3
1
作者
鲁燕飞
姚尧
《现代检验医学杂志》
CAS
2015年第5期129-131,共3页
目的 评价深圳市晋百慧生物有限公司生产的人降钙素原(PCT)定量检测系统(简称晋百慧PCT定量检测系统)的检测性能.方法 以罗氏PCT检测系统为参比系统,晋百慧PCT定量检测系统为待评系统.在待评系统连续测定两浓度质控品(0.5 ng/ml,10...
目的 评价深圳市晋百慧生物有限公司生产的人降钙素原(PCT)定量检测系统(简称晋百慧PCT定量检测系统)的检测性能.方法 以罗氏PCT检测系统为参比系统,晋百慧PCT定量检测系统为待评系统.在待评系统连续测定两浓度质控品(0.5 ng/ml,10 ng/ml)20次计算其变异系数(CV)评价其重复性,连续测定20个工作日计算其CV评价其天间不精密度;根据EP6-A文件配置不同标本浓度(0,0.5,1,2,5,10,20,50 ng/ml)计算其线性范围.收集200例患者血清标本,根据EP9-A3文件在待评系统与参比系统进行比对试验判断两者的可比性.结果 待评系统重复性为不同浓度质控品的CV分别为3.59%,1.57%,天间不精密度分别为7.02%,3.82%;在0~50 ng/ml范围为线性.比对试验线性决定系数R2 =0.968 6(Pearson相关分析α=0.05,P<0.001),在有医学意义浓度0.5 ng/ml处相对偏差为9%.结论 晋百慧PCT定量检测系统精密度好,检测范围宽,与参比系统具有可比性,能满足临床检测要求.
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关键词
人降钙素原
定量检测
方法学评价
下载PDF
职称材料
高效检测人降钙素原化学发光免疫分析方法的建立与评价
被引量:
3
2
作者
羊婷婷
余易展
+3 位作者
刘培
王念超
卢彦
黄亚红
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2017年第4期306-310,316,共6页
目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;...
目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;将pET32a-PCT质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用Western blot法分析重组蛋白表达情况;用镍亲和纯化柱纯化重组蛋白,以此为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化后再用间接ELISA法筛选阳性单克隆细胞;将阳性单克隆细胞接种于小鼠腹腔内,制备腹水单抗,经Protein A/G纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,采用间接ELISA方法对抗体的特异性、灵敏度以及亲和力进行鉴定;用NaIO4氧化HRP法标记单克隆抗体,通过棋盘法筛选配对单克隆抗体,以筛选的配对抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心化学发光免疫分析的血清学检测体系,检测临床150例血清标本,其中PCT升高(>0.05ng/ml)120例,PCT阴性(<0.05ng/ml)30例。结果共筛选出6株抗人PCT蛋白的单克隆细胞,制备的腹水效价均大于4×10^(-6);通过棋盘法筛选得到2对能够进行双抗夹心配对的单抗,其中1对亲和力较高,其亲和力常数分别为2.39×10~8 L/mol和2.91×10~8 L/mol。双抗夹心化学发光免疫分析方法检测线性范围为0.06~8ng/ml,其中阳性检出率为96.6%,阴性符合率为100%,与临床检测数据相比,相关系数R^2=0.9737。结论建立的双抗夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强、稳定可靠,可用于细菌、寄生虫等病原体感染患者的PCT血清学定量检测。
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关键词
单克隆抗体
人降钙素原
(PCT)
双抗体夹心
定量检测
原文传递
题名
人降钙素原定量检测方法学评价
被引量:
3
1
作者
鲁燕飞
姚尧
机构
湖北省黄冈市中心医院检验科
黄冈职业技术学院医药卫生学院
出处
《现代检验医学杂志》
CAS
2015年第5期129-131,共3页
文摘
目的 评价深圳市晋百慧生物有限公司生产的人降钙素原(PCT)定量检测系统(简称晋百慧PCT定量检测系统)的检测性能.方法 以罗氏PCT检测系统为参比系统,晋百慧PCT定量检测系统为待评系统.在待评系统连续测定两浓度质控品(0.5 ng/ml,10 ng/ml)20次计算其变异系数(CV)评价其重复性,连续测定20个工作日计算其CV评价其天间不精密度;根据EP6-A文件配置不同标本浓度(0,0.5,1,2,5,10,20,50 ng/ml)计算其线性范围.收集200例患者血清标本,根据EP9-A3文件在待评系统与参比系统进行比对试验判断两者的可比性.结果 待评系统重复性为不同浓度质控品的CV分别为3.59%,1.57%,天间不精密度分别为7.02%,3.82%;在0~50 ng/ml范围为线性.比对试验线性决定系数R2 =0.968 6(Pearson相关分析α=0.05,P<0.001),在有医学意义浓度0.5 ng/ml处相对偏差为9%.结论 晋百慧PCT定量检测系统精密度好,检测范围宽,与参比系统具有可比性,能满足临床检测要求.
关键词
人降钙素原
定量检测
方法学评价
Keywords
human procalcitonin(PCT)
quantitative detection
performance evaluation
分类号
R446.112 [医药卫生—诊断学]
下载PDF
职称材料
题名
高效检测人降钙素原化学发光免疫分析方法的建立与评价
被引量:
3
2
作者
羊婷婷
余易展
刘培
王念超
卢彦
黄亚红
机构
南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2017年第4期306-310,316,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.J1210026)
江苏省自然科学基金项目(No.BK20161408)
文摘
目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;将pET32a-PCT质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用Western blot法分析重组蛋白表达情况;用镍亲和纯化柱纯化重组蛋白,以此为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化后再用间接ELISA法筛选阳性单克隆细胞;将阳性单克隆细胞接种于小鼠腹腔内,制备腹水单抗,经Protein A/G纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,采用间接ELISA方法对抗体的特异性、灵敏度以及亲和力进行鉴定;用NaIO4氧化HRP法标记单克隆抗体,通过棋盘法筛选配对单克隆抗体,以筛选的配对抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心化学发光免疫分析的血清学检测体系,检测临床150例血清标本,其中PCT升高(>0.05ng/ml)120例,PCT阴性(<0.05ng/ml)30例。结果共筛选出6株抗人PCT蛋白的单克隆细胞,制备的腹水效价均大于4×10^(-6);通过棋盘法筛选得到2对能够进行双抗夹心配对的单抗,其中1对亲和力较高,其亲和力常数分别为2.39×10~8 L/mol和2.91×10~8 L/mol。双抗夹心化学发光免疫分析方法检测线性范围为0.06~8ng/ml,其中阳性检出率为96.6%,阴性符合率为100%,与临床检测数据相比,相关系数R^2=0.9737。结论建立的双抗夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强、稳定可靠,可用于细菌、寄生虫等病原体感染患者的PCT血清学定量检测。
关键词
单克隆抗体
人降钙素原
(PCT)
双抗体夹心
定量检测
Keywords
monoclonal antibody
human procalcitonin (PCT)
double anti-sandwich
quantitative detection
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人降钙素原定量检测方法学评价
鲁燕飞
姚尧
《现代检验医学杂志》
CAS
2015
3
下载PDF
职称材料
2
高效检测人降钙素原化学发光免疫分析方法的建立与评价
羊婷婷
余易展
刘培
王念超
卢彦
黄亚红
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2017
3
原文传递
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