胰腺癌组织中人音猬因子相互作用蛋白基因CpG岛甲基化分析

目的研究胰腺癌组织中人音猬因子相互作用蛋白(HHIP)基因CpG岛甲基化状态,探索胰腺癌早期诊断的检测方法。方法在30例胰腺癌(PCa组)及其癌旁组织(CAT组)和13例慢性胰腺炎(CP组)组织中,分别应用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、巢式甲基化特异性聚合酶链反应(NMSP)和基因克隆测序的方法检测HHIPmRNA表达及其CpG岛甲基化状况。结果PCa组的HHIPmRNA表达为2.042±1.412,显著低于CAT组的3.710±3.488及CP组的4.485±2.434(P值分别<0.05、0.01),后两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。PCa组的甲基化阳性率为43.3%(13/30),显著高于CP组的7.7%(1/13)及CAT组的0(P值分别<0.05、0.01),后两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。PCa组中多个CG位点发生甲基化,而CP组中大部分及CAT组中的CG位点未发生甲基化。结论胰腺癌组织中HHIP基因CpG岛呈现高甲基化的状态,可能与胰腺癌的发生相关。

人音猬因子相互作用蛋白在肿瘤中的分子调控机制及临床价值的研究进展

HHIP(hedgehog-interacting protein)基因编码人音猬因子相互作用蛋白,位于染色体4q31.21-31.3。作为Hedgehog(Hh)信号通路的内源性拮抗剂,HHIP能够抑制Hh信号通路活化。在人类肿瘤中,Hh信号通路通常呈异常激活状态,HHIP在大多数类型的肿瘤组织中普遍低表达。HHIP表达水平与肿瘤患者总生存期呈正相关,可作为肿瘤患者的独立预后标志物。本文从HHIP在肿瘤中的生物学功能、作用机制及其临床价值方面对HHIP研究进展作综述。

人音猬因子相互作用蛋白基因与肺部疾病

人音猬因子相互作用蛋白基因编码一组跨膜糖蛋白——人音猬因子相互作用蛋白，其主要功能是负反馈调节抑制Hh信号通路活性。该基因与Hh信号通路在胚胎发育、细胞分化、肿瘤形成等有关，参与了各系统疾病的发生发展。本文就其与一些肺部疾病的关系作一综述。

人音猬因子相互作用蛋白基因与慢性阻塞性肺疾病

慢性阻塞性肺疾病是呼吸系统常见慢性疾病。该疾病的发病与环境及多基因变异有关。近年的研究显示,人音猬因子相互作用蛋白基因参与多个系统疾病的发生发展,尤其对于呼吸系统该基因与慢性阻塞性肺疾病发病密切相关,该基因上某些单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性相关,且在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织内存在该基因低表达。另外,该基因与FEV1和FEV1/FVC关系密切,对肺功能有保护作用。目前的研究提示该基因和音猬信号通路在肺胚胎发育、基因表达调控、细胞增殖、细胞凋亡和平滑肌修复等方面发挥着重要调控作用,为慢性阻塞性肺疾病发病机制的研究指明了方向。本文就人音猬因子相互作用蛋白基因与慢性阻塞性肺疾病相关性的研究进展作一综述。

布托啡诺通过下调布托啡诺调节音猬因子/胶质瘤相关癌基因同源物1通路抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的探讨布托啡诺调节音猬因子(SHH)/胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI1)信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将胶质瘤LN229细胞分为对照组、布托啡诺低剂量组、布托啡诺中剂量组、布托啡诺高剂量组以及布托啡诺高剂量+pc DNA3.1组、布托啡诺高剂量+pc-SHH组。MTT和Edu实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测Ki-67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase-3)、SHH和GLI1蛋白表达水平。结果布托啡诺可降低LN229细胞活力、增殖率,减少细胞迁移和侵袭个数(P<0.05)。布托啡诺可降低LN229细胞中SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平及Ki-67、MMP-2、SHH和GLI1蛋白表达,促进细胞凋亡和增高Cleaved-Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。过表达SHH可部分逆转布托啡诺对LN229细胞的抑制作用(P<0.05)。结论布托啡诺可以抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其机制可能与抑制SHH/GLI1信号通路有关。

CCCTC-结合因子与核周蛋白α4存在分子间相互作用并调控其基因表达

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpull-down实验表明CTCF与KPNA4之间存在相互作用;当CTCF敲降时,KPNA4基因的表达随之下降。结论:CTCF与KPNA4之间存在相互作用并调控其基因表达。

筛选hALR的相互作用蛋白基因(英)

为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因.筛出的阳性克隆基因序列被测出后,经GenBank查询,结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na+/K+ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列.这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因,为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础.

超音刺猬蛋白 转录因子叉头框转录因子M1及神经胶质瘤相关癌基因同源物1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探究刺猬因子(Hedgehog)信号通路分子超音速刺猬蛋白(Shh)及其下游转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)和神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)在宫颈癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法选取遂宁市中心医院2016年1月至2016年8月收治的50例宫颈癌患者宫颈黏膜组织作为观察组,选取30例同期收入的宫颈黏膜组织正常的阴道炎患者作为对照组,应用免疫组化检测两组对象宫颈黏膜组织中Shh、FoxM1、Gli1的表达情况,分析宫颈癌组织中Shh、FoxM1、Gli1蛋白表达与临床病理特征之间的关系。结果 Shh、FoxM1、Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率分别为86%、90%、92%,较正常宫颈组织升高,差异有统计学意义(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1蛋白与患者年龄、肿瘤大小、浸润深度均无显著相关性(P>0.05);Spearman相关性分析显示,Shh在宫颈癌中的表达与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05);FoxM1只与淋巴结转移相关(P<0.05);Gli1的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1三者之间互为正相关(P<0.05)。结论 Shh、FoxM1、Gli1在宫颈癌组织中呈高表达状态,Shh和Gli1蛋白与宫颈癌组织分化程度有关,而FoxM1蛋白只与宫颈癌是否发生淋巴结转移有关,此三者的检测,有助于宫颈癌的早期诊断,可作为预测宫颈癌发生发展的指标。

小鼠肿瘤致死因子α诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ亚单位的相互作用

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程,并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考.

在牙齿发育过程中骨形态发生蛋白、Wnt、成纤维细胞生长因子、音猬因子信号通路的作用及机制

背景:牙齿发育过程中,多种通路在上皮-间充质间传递信息,共同调控细胞的增殖、分化、迁移、存活和凋亡。其中主要为骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、Wnt、音猬因子通路。目的:对牙齿发育过程中骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、Wnt、音猬因子4种主要信号通路研究进展做一综述,为干细胞牙向分化研究提供参考。方法:由第一作者通过中国知网检索平台和PubMed数据库检索所需文献。检索时间为2004年至2017年,检索关键词分别为"骨形态发生蛋白,成纤维细胞生长因子,Wnt,音猬因子,牙齿发育,牙发生""Bone morphogeneticprotein, Fibroblastgrowthfactorpathway, Wntprotein, Sonichedgehog, Tooth development,Toothorganogenesis"。纳入与牙齿发育骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、Wnt、音猬因子信号通路相关的研究,选择近期发表且内容描述详实、严谨,观点明确的文章。结果与结论:骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、Wnt、音猬因子信号通路作用范围广,几乎涵盖了牙胚发育起始、形态发生及细胞分化等各个方面。此外,4种信号通路间联系紧密,彼此促进、相互制约,构成一复杂的网络。拮抗因子的逆向调控机制是该网络的重要组成部分,对牙齿最终准确形成至关重要。

骨形态发生蛋白2和音猬因子体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

背景:研究表明,骨形态发生蛋白2和音猬因子联合诱导干细胞的定向分化存在理论上的可能性,但目前联合诱导间充质干细胞的方向纷繁复杂,且众说纷纭。目的:观察骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外联合和单独应用促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在江苏大学临床医学院实验室完成。材料:6周龄SPF级SD大鼠10只,体质量140～160g,雌雄不拘,用于间充质干细胞的获得、培养和传代。重组人骨形态发生蛋白2、音猬因子为PeproTech公司产品。方法:将SD大鼠的间充质干细胞分离培养后分为4组:重组人骨形态发生蛋白2组:加入100mg/L重组人骨形态发生蛋白2;音猬因子组:加入20μg/L音猬因子;联合组:100mg/L重组人骨形态发生蛋白2联合20μg/L音猬因子作用于SD大鼠间充质干细胞;对照组:不加任何干预措施。主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;MTT法检测细胞培养第3,6,9,12天细胞增殖数和细胞碱性磷酸酶活性;以及成骨细胞表型的检测和Ⅰ型胶原蛋白免疫印迹分析,以比较各组诱导成骨能力的差异。结果:①间充质干细胞培养24h后部分贴壁,贴壁细胞呈圆形或椭圆形,第7天左右细胞铺满瓶底,多为梭形。条件培养基培养3d后,联合组细胞由长梭形转变为多角形。随后重组人骨形态发生蛋白2组细胞发生成骨样改变,音猬因子组细胞未见明显形态学改变。②相同时间点联合组、重组人骨形态发生蛋白2组、音猬因子组细胞吸光度均高于对照组(P<0.05)。联合组和重组人骨形态发生蛋白2组在各时间点碱性磷酸酶表达量均高于音猬因子组和对照组(P<0.05)。③间充质干细胞经诱导培养7d后,碱性磷酸酶细胞化学染色联合组和重组人骨形态发生蛋白2组呈阳性,联合组可见胞质中棕黄色颗粒,音猬因子组和对照组阴性。诱导培养14d后,Ⅰ型胶原免疫荧光染色音猬因子组和对照组均为阴性,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组为阳性,但联合组细胞数量明显增多,细胞间融合较好,重组人骨形态发生蛋白2组细胞融合欠佳。矿化沉积茜素红染色音猬因子组和对照组仍为阴性,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组为阳性,联合组细胞间可见红色的钙结节。④蛋白免疫印迹分析显示,与对照组相比,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组Ⅰ型胶原蛋白表达增加,联合组尤其明显,音猬因子组与之接近。结论:骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外能明显促进间充质干细胞向成骨细胞分化并且具有明显的协同相关性。

AFM观察小鼠心肌核DNA转录调控和蛋白质相互作用

用原子力显微镜(AFM)直接观察、体外转录、PAGE电泳等多种实验技术组合,发现小白鼠(Balb/c)心肌核DNA片段中非转录状态的活性基因仅两端的调控序列结合支架蛋白(不可解离蛋白),同时非共价键特异结合自己编码的蛋白质与特定辅助信息小分子所形成的复合体(可解离蛋白)等多种转录调控蛋白质,中间的编码序列无结合蛋白质。转录状态的基因除两端的调控序列特异结合上述两类蛋白质外,中间的编码序列还以非共价键特异结合可完全解离的转录活性因子等多种蛋白质。本工作展示了未来运用AFM观察和体外转录等技术组合研究基因表达与调控机制的前景,并为阅读人类基因组图谱中确定某一特定基因的位置奠定了理论基础。

碱性成纤维细胞生长因子促进血管性痴呆大鼠音猬蛋白的表达

目的：检测音猬蛋白（Shh）在血管性痴呆海马组织神经干细胞中的表达及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对其的影响.探讨bFGF影响神经干细胞增殖分化的分子调控机制.方法：采用大脑中动脉栓塞（MCAO）制作大鼠血管性痴呆模型,免疫组织化学检测海马神经干细胞BrdU、Shh的表达及bFGF的作用.结果：脑缺血再灌注第3天缺血海马神经元BrdU阳性细胞较假手术组明显增多,第7天达高峰.Shh反应产物脑缺血再灌注第3天较假手术组增多,随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第14天开始减少.注射bFGF后BrdU、Shh的表达较模型组明显增加.结论：bFGF促进神经干细胞的增殖及缺血脑组织Shh的表达,提示bFGF促进神经干细胞增殖作用可能由Shh信号介导.

音猬因子与胰岛素增强子结合蛋白在小鼠胚胎呼吸系统的早期表达

目的探讨音猬因子信号通路成员与胰岛素增强子结合蛋白在呼吸系统的早期表达与其发育的联系。方法胚龄9.0~13d小鼠胚胎呼吸系统各年龄段不小于3个,连续石蜡切片,用抗音猬因子（Shh）、抗patched1（Ptcl）、抗smoothened（Smo）、抗胰岛素增强子结合蛋白（ISL1）和抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体进行免疫组织化学染色。结果胚龄10d,Shh表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄11~12d,Ptc1表达在气管、支气管和肺内分支上皮。胚龄13d,Ptc1只表达在肺内分支上皮。胚龄9d,ISL1表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄10~12d,ISL1表达在前肠（气管）腹侧壁和支气管侧壁上皮及邻近的间充质内。胚龄13d,ISL1表达减弱,始终未见在肺内有阳性表达。胎龄12~13d,与气管后壁、支气管内侧壁上皮Ptc1表达减弱处相邻的间充质出现α-SMA阳性平滑肌细胞,其与对侧间充质ISL1阳性细胞的分布呈背-腹侧或内-外侧模式。气管腹侧及肺芽外侧间充质中可见ISL1与Smo共表达细胞。结论 ISL1在气管及肺芽的发育中可能与Shh信号系统协同发挥作用。

椎间盘脱出模型大鼠脊髓巢蛋白和音猬因子变化及电针效应

【目的】研究椎间盘脱出模型大鼠脊髓巢蛋白(Nestin)和音猬因子(SHH)变化及电针效应,分析神经组织代偿性修复的机理。【方法】大鼠随机分为空白组(n=9)、模型组(n=15)和电针组(n=15),在T13段脊髓左腹侧填塞硅胶片建立椎间盘脱出模型。模型建立后4、7、14d处死大鼠取压迫部位脊髓组织,荧光抗体法观察Nestin阳性细胞数量,ELISA法检测Nestin和SHH含量。【结果】14d时,与模型组相比,电针组运动机能评分极显著升高(P<0.01),SHH含量和Nestin阳性细胞数量极显著升高(P<0.01),Nestin含量显著升高(P<0.05)。【结论】本研究成功建立椎间盘脱出模型,脊髓受压后自我修复过程中可表达Nestin。电针干预后大鼠运动机能极显著改善,提示其与电针升高Nestin和SHH含量有关。

音猬因子和β-连锁蛋白在牦牛蹄缘不同位点毛囊形态发生中的时空表达

目的探讨牦牛蹄缘不同位点毛囊形态发生的规律及音猬因子（SHH）和β-连锁蛋白（β-catenin）的时空表达。方法选择41例胚龄（E）45-248d牦牛蹄缘样品，采用石蜡组织切片、HE染色对蹄缘不同位点毛囊的形态发生过程进行观察分析；用EnVison免疫组织化学法检测SHH和β-catenin的时空表达。结果牦牛蹄缘近蹄端毛囊的形态发生约开始于E45d，远蹄端为E55d，形成成熟毛囊的时间约为E120d；牦牛蹄缘近蹄端毛囊的形态发生先于远蹄端，由近蹄端至远蹄端毛囊的发育阶段、毛囊大小和下陷深度呈梯度由近至远依次递减；SHH和β-catenin在牦牛蹄缘毛囊表达的时间顺序近蹄端先于远蹄端；在牦牛蹄缘毛囊形态发生过程中，SHH和β-catenin在近蹄端和远蹄端毛囊表皮的表达强度均大于间充质；β-catenin在近蹄端间充质中的表达强度大于远蹄端。结论SHH和β-catenin在牦牛蹄缘毛囊形态发生的表皮-间充质相互作用中，以表皮为主导；不同位点毛囊形态发生的梯度是由SHH和β-catenin在表皮与间充质中的特殊作用和时空表达规律决定的。

基于GO的酵母膜系统蛋白相互作用规律研究

引进描述蛋白质相互作用倾向性参数(PIRB),基于GO(Gene Ontology)和相关的数据库中蛋白质功能注释,对酿酒酵母部分膜蛋白相互作用规律进行了研究,构建了基于PIRB的蛋白质相互作用网络图.结果表明各类膜蛋白质之间的相互作用具有明显的偏向性.对这种偏向性的生物学含义作了简要探讨.

同源结构域相互作用蛋白激酶2的研究进展

同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)是一个核内丝氨酸／苏氨酸激酶,作为辅助因子,广泛参与转录调控。HIPK2位于核斑,在Sp100和TP53INPls的辅助下能够磷酸化p53的46位丝氨酸,加速p53的乙酰化,拮抗MDM2对p53的抑制作用,强化p53的功能。通过磷酸化,HIPK2加速CtBP和c- Myb被蛋白酶体降解,引起细胞发生不依赖p53的凋亡或分化。许多肿瘤细胞低表达HIPK2,表明HIPK2 可能是一个重要的抑癌基因。