上皮细胞转化序列2通过调控p33生长抑制因子1表达影响食管鳞状细胞癌细胞的体外转移活性

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)与p33生长抑制因子1(p33ING1)的表达水平对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞转移活性的影响。方法采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测食管鳞癌组织和癌旁组织中ECT2和p33ING1的表达情况。将人食管鳞癌细胞系KYSE140细胞分为4组:空白组、阴性对照组(pcDNA 3.1 NC)组、过表达组(pcDNA 3.1 ECT2)和抑制表达组(si ECT2)。采用MTT法和细胞集落形成实验研究细胞的增殖和生长能力,Transwell实验和划痕实验研究细胞的侵袭和迁移能力,并用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测ECT2对p33ING1蛋白的影响。结果在食管鳞癌组织中ECT2表达增加,p33ING1表达降低。过表达ECT2能够显著增加KYSE140细胞的生长、集落形成、迁移以及侵袭能力,并能降低KYSE140细胞的凋亡率和p33ING1的表达;此外,抑制ECT2表达后能够逆转上述变化。结论ECT2高表达能够促进食管鳞癌KYSE140细胞的生长、转移,并抑制其凋亡,其机制可能与ECT2能够抑制p33ING1表达相关。

纽约食管鳞状上皮癌抗原1在原发性肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨纽约食管鳞状上皮癌抗原1(NY-ESO-1)在原发性肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义,以期为临床治疗该疾病提供参考依据。方法回顾性分析2013年1月至2019年12月于安徽医科大学安庆医学中心接受手术治疗的71例HCC患者的临床资料,并搜集其术后石蜡包埋的肝癌组织与癌旁组织标本,分别作为HCC组、癌旁组;同期回顾性分析30例肝血管瘤或肝内胆管结石患者的临床资料,并取其术后石蜡包埋的正常肝组织标本,作为正常组。采用免疫组织化学染色法检测3组患者组织中NY-ESO-1蛋白表达情况;分析NY-ESO-1蛋白表达与HCC患者临床病理特征的关系;使用Cox比例风险回归模型分析HCC患者预后的危险因素。结果HCC组NY-ESO-1蛋白表达阳性率显著高于癌旁组、正常组;NY-ESO-1蛋白阳性表达患者中肿瘤直径≥5 cm、Ⅱa~Ⅱb分期、Edmondson分级Ⅲ/Ⅳ级、Ki-67高表达、微血管侵犯(MVI)为M1/2级患者占比均显著高于NY-ESO-1蛋白阴性表达患者;NY-ESO-1蛋白表达阳性患者的总存活率显著低于NY-ESO-1蛋白表达阴性患者;Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、Ⅱa~Ⅱb分期、Edmondson分级Ⅲ/Ⅳ级、Ki-67高表达、MVI为M1/2级、NY-ESO-1阳性均是影响HCC患者预后的危险因素(HR=4.106、2.184、5.579、13.967、3.296、2.735)(均P<0.05)。结论NY-ESO-1在HCC组织中呈高表达,且肿瘤直径≥5 cm、Ⅱa~Ⅱb分期、Edmondson分级Ⅲ/Ⅳ级、Ki-67高表达、MVI M1/2级、NY-ESO-1阳性均是影响HCC患者预后的危险因素,临床上可针对上述因素采取相应措施,改善患者预后。

应用Het-1A细胞系研究CDDO-Me对食管黏膜上皮屏障的保护作用

目的观察CDDO-Me对食管黏膜屏障的保护效应,探讨CDDO-Me作为黏膜屏障增强剂的可行性。方法分别以不同pH值的酸(pH4、pH5、pH6)处理Het-1A细胞系,处理时间为5、10、30、60 min,检测各组Het-1A细胞系跨上皮电阻抗(TEER)值的变化;以含不同浓度的CDDO-Me(0、0.25、0.5、1、2.5、5μmol/L)预刺激Het-1A细胞系,再以酸处理Het-1A细胞系,观察TEER值的变化。结果pH为4、5、6时,不同处理时间对Het-1A细胞的TEER作用比较差异均有统计学意义(P<0.01),随着处理时间(10、30、60 min)的延长,TEER下降幅度越大。处理时间为10、30、60 min时,各组间差异均有统计学意义,以pH4组60 min时TEER下降最明显(P<0.01)。CDDO-Me预刺激后以pH4酸处理Het-1A细胞系,12、24、48 h时,不同浓度CDDO-Me预刺激组TEER比较差异均有统计学意义(P<0.05),24 h时,随着刺激浓度的增加,各组TEER逐渐升高,以5μmol/L组最明显(P<0.05);浓度为0.5、1、2.5、5μmol/L时,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论酸损害食管上皮屏障功能,与酸度和作用时间有关;CDDO-Me对于酸对食管上皮屏障的损害有保护作用。

Fascin 1基因在永生化食管上皮细胞癌变中的表达

背景与目的:Fascin1蛋白为一种与F-肌动蛋白结合的55kDa细胞骨架蛋白,从人畸胎瘤中克隆fascin1基因。食管上皮细胞癌变机制至今不甚明了,为此,对永生化食管上皮细胞株SHEE(Shantouhumanembryonicesophagealepithelialcellline)和由SHEE恶性转化而来的食管癌细胞株SHEEmt之间的差异表达基因在蛋白质和mRNA两个水平上进行检测分析,以期为揭示食管鳞状上皮细胞癌变机制提供新思路。方法:采用双向凝胶电泳技术分析SHEE与SHEEmt之间的蛋白质差异表达情况,以基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)对部分差异表达蛋白质点进行鉴定,以逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionploymerasechainreaction,RT-PCR)对目标基因进行mRNA转录水平上的检测,并对RT-PCR产物进行序列测定分析。结果:在SHEE向SHEEmt的恶性转化中有9个基因出现差异表达,其中fascin1基因在蛋白质水平升高3.64倍,mRNA水平升高16.17倍。结论:fascin1基因可能与SHEE向SHEEmt的恶性转化有关。

食管鳞状上皮细胞癌中Keap1、Nrf2和HO-1的表达及临床病理意义

目的检测食管鳞状上皮细胞癌中Keap1、Nrf2和HO-1的表达,并探讨氧化应激通路与食管鳞状上皮细胞癌相关临床病理因素间的关系。方法采用免疫组化SP法检测89例结直肠腺癌及21例癌旁正常食管黏膜组织中Keap1、Nrf2和HO-1的表达。结果 Keap1、Nrf2和HO-1在食管鳞状上皮细胞癌中阳性率均明显高于正常食管黏膜组织,差异有显著性(P<0.05);三者表达与食管鳞状上皮细胞癌淋巴结转移明显相关(P<0.05);Nrf2和HO-1的表达与食管鳞状上皮细胞癌浸润深度有关(P<0.05);Keap1和Nrf2表达呈负相关,Nrf2和HO-1表达呈正相关(P<0.05)。结论氧化应激Keap1-Nrf2信号传导通路参与食管鳞状上皮细胞癌的发生、发展过程,对指导食管鳞状上皮细胞癌的临床治疗和判断预后有重要指导意义。

伏马菌素B_1对人正常食管上皮细胞细胞周期相关基因mRNA表达的影响

本研究采用体外实验,分离鉴定人正常食管上皮细胞,用RT-PCR方法测定伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)对细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27mRNA表达的影响。结果表明:FB1作用人正常食管上皮细胞后可以在转录水平上影响Cyclin D1、Cyclin E、P16、P21、P27基因的表达,导致Cyclin D1mRNA高表达,Cyclin E、P16、P21、P27基因mRNA低表达。提示,细胞周期相关基因的异常表达与癌症密切相关,该研究从体外实验进一步证实FB1可能与人类食管癌的发生有关。

HIF-1α在食管上皮细胞中的诱导表达及对光动力疗法的影响

目的:探讨食管上皮Het1A细胞经诱导表达HIF1α后对光动力学效应的影响。方法:HIF1α的稳定高表达采用氯化钴(CoCl2)化学诱导法,并应用光敏剂5ALA处理细胞,光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)光照射采用波长>600nm的红光光源,细胞存活活性以MTS法测定,应用Westernblot测定HIF1α蛋白质水平,RNA干扰采用脂质体转染法,并利用TdT流式细胞法测定细胞凋亡率。结果:Het1A细胞经100μmol/L的CoCl2孵育4h后可诱导HIF1α蛋白的高表达;PDT后高表达HIF1α的细胞具有较高的细胞存活活性,且细胞凋亡率由未诱导时的16%降低至4%;不同浓度CoCl2诱导的HIF1α蛋白质水平与PDT后细胞存活活性相一致;siRNA转染阻断HIF1α的诱导表达,细胞又恢复了对PDT的应答能力。结论:HIF1α在Het1A细胞中的高表达使PDT效果下降;HIF1α部分通过抑制PDT引起的细胞凋亡而抵御PDT效应。提示HIF1α可作为治疗靶基因,降低肿瘤组织HIF1α表达水平可能有助于改善PDT临床疗效。

TREM1在食管癌中的表达意义及促进食管癌转移的相关机制研究

目的分析髓样细胞触发受体1(triggering receptors expressed on myeloid cells-1,TREM1)在食管癌中的表达情况以及与患者总体生存率的关系,并探究其对食管癌KYSE30细胞迁移能力的影响。方法通过生物信息学及临床标本分析TREM1在肿瘤组织中的表达情况及与患者预后的关系;选择KYSE30细胞,将细胞分为阴性对照(NC)组、阴性对照+脂多糖(NC+LPS)组、干扰TREM1组、干扰TREM1+脂多糖组。采用Transwell实验比较不同组别细胞增殖和迁移能力的变化;采用Western blot法检测不同组别间上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)比较不同组别细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的变化;过表达TREM1的同时干扰IL-6,比较此时EMT相关蛋白的变化。结果TREM1在食管癌组织和患者血清中表达丰度较高,并与患者的淋巴结转移和总体生存率有关;TREM1可以促进KYSE30细胞的侵袭和转移,相关机制可能是通过促进IL-6的表达进而启动食管癌细胞EMT。结论TREM1在食管癌组织中高表达并通过上调IL-6促进肿瘤EMT从而有利于食管癌的侵袭和转移,导致患者预后不良。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人食管上皮细胞TAP-1和LMP-2表达的影响

目的：探讨不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）处理,体外原代培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的变化。方法：采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24小时,体外培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2分子表达的变化规律及其量-效关系。结果：不同浓度（50、100、1 000、2 000μg/L）DON处理人食管上皮细胞24小时后,DON各处理组食管上皮细胞TAP-1蛋白的Western blot半定量检测结果分别为0.47±0.22、0.28±0.16、0.24±0.18和0.21±0.19,统计分析表明DON 100、1 000、2 000μg/L处理组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。相关分析表明,在0~2000μg/L浓度范围内,随DON处理浓度增高,食管上皮细胞TAP-1蛋白的表达量逐渐降低（r=-0.595,n=4,P〈0.01）。RT-PCR结果发现,经不同浓度DON处理食管上皮细胞TAP-1mRNA的相对表达量虽然呈现先升高后降低的趋势,但与对照组相比无统计学差异。DON各处理组LMP-2蛋白的Western blot半定量检测结果分别为2.25±1.03、3.31±1.35、1.90±1.19和2.12±0.22均高于空白对照组（0.91±0.21）,其中100μg/L处理组相对表达量最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR结果,DON 100μg/L处理组的LMP-2 mRNA的相对表达量最高为2.23±0.56,明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余处理组差异无统计学意义。结论：DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞的TAP-1蛋白的表达,但对TAP-1的mRNA未见显著影响。DON（100μg/L）可以促进食管上皮细胞LMP-2蛋白和mRNA表达,其余各浓度未见明显影响。

基于TALE技术的哈萨克族食管上皮DNA甲基转移酶1高表达细胞株模型的构建

目的:构建哈萨克族食管上皮细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)高表达细胞株模型。方法:将构建的WV0133、WV0132和WV072质粒转染至哈萨克族食管上皮细胞,利用嘌呤霉素对DNMT1高表达细胞进行筛选,并通过荧光显微镜、实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blot法检测细胞转染情况和目的基因DNMT1的表达情况。结果:WV0133和WV0132质粒转染组细胞DNMT1m RNA表达水平是正常细胞组的1.786倍和2.721倍,DNMT1蛋白表达水平是正常细胞组的2.734倍和3.100倍,均显著高于正常细胞组(P<0.01)。其中,WV0132质粒转染组细胞DNMT1 m RNA和蛋白表达水平较高。结论:成功构建了哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞株模型,为深入研究食管癌的发生机制提供了研究工具。

甲基硝基亚硝基胍对哈萨克族正常食管上皮细胞LRRFIP1、ALDH1L1基因甲基化及其表达的影响

目的探讨N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对哈萨克族(哈族)正常食管上皮细胞LRRFIP1、ALDH1L1基因甲基化及其表达的影响。方法将体外培养的哈族正常食管上皮细胞暴露于含0、0.75、1.5、3μg/mL MNNG的培养基中24 h,分别为对照组、0.75μg/mL组、1.50μg/mL组、3.00μg/mL组。用甲基化特异性聚合酶链(MSP)法检测LRRFIP1、ALDH1L1基因甲基化状态,用RT-PCR和Western Blot法检测LRRFIP1、ALDH1L1基因mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度组细胞LRRFIP1基因甲基化状态没有改变;各组细胞LRRFIP1基因mRNA表达水平分别为(1.021±0.237)、(2.828±0.350)、(1.453±0.179)、(1.952±0.223);与对照组比较,0.75μg/mL组和3.00μg/mL组表达均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,1.50μg/mL和3.00μg/mL组LRRFIP1蛋白表达水平均升高,分别为(4.233±0.048)、(4.519±0.033)、(5.377±0.057),差异有统计学意义(P<0.05);高浓度组细胞ALDH1L1基因有从部分甲基化向完全甲基化转变的趋势,各组ALDH1L1基因mRNA表达水平分别为(1.023±0.254)、(5.046±0.603)、(2.259±0.030)、(7.616±1.910),与对照组比较各浓度组均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);各组细胞ALDH1L1蛋白表达水平分别为(0.725±0.014)、(0.913±0.033)、(1.142±0.010)、(1.334±0.047),与对照组比较各浓度组均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 MNNG可促进哈族正常食管上皮细胞ALDH1L1基因甲基化及LRRFIP1、ALDH1L1表达的升高。

ERCC1蛋白表达及其基因多态性与食管鳞状上皮细胞癌患者生存期关系

目的:研究ERCC1蛋白表达及其基因多态性与食管鳞状上皮细胞癌患者生存期关系。方法:从我院2016年1月至2017年2月时间段内肿瘤科收治的患者当中选择45例食管鳞状上皮细胞癌患者为主要研究对象,所有患者均在术后接受辅助化疗治疗,分别采用免疫组化分析和聚合酶链式反应,来研究ERCC1蛋白表达及其基因多态性与食管鳞状上皮细胞癌患者生存期关系。结果:蛋白表达阳性患者23例,生存期(29.8±2.4)个月;蛋白表达阴性22例,生存期为(30.1±2.3)个月,数据对比后分析P>0.05,不具有统计学意义。ERCC1基因在C8092A位点上时,CC、CA、AA、患者生存时间具有统计学意义(P<0.05);而在C118T位点上时,基因CC、CT和TT患者的生存时间无统计学意义(P>0.05)。结论:ERCC1蛋白表达与患者的生存期并不存在明显联系,而在分析患者的基因多态性情况之后可看出,患者C8092A位点上的基因多态性情况与其生存期存在一定程度的关系,对关键位点进行分析较为重要。

叶酸在MNNG影响哈萨克族食管上皮细胞DNMT1酶活性及表达中的作用

目的:探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)影响哈萨克族食管上皮细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)活性及表达中的作用,为食管癌的防治提供理论依据。方法:采用3因素3水平(3×3)析因设计将体外培养的哈萨克族食管上皮细胞分别暴露于不同浓度叶酸(0.000、0.400、0.800μg/m L)和MNNG(0.000、0.750、1.500μg/m L)的培养液中作用48、72和96 h后,采用ELISA法检测DNMT1酶活性;采用RT-PCR的方法检测DNMT1 m RNA表达水平;采用Western blot法检测DNMT1蛋白的表达水平。结果:不同浓度叶酸、MNNG作用细胞不同时间后,在固定MNNG浓度和时间因素下,随着叶酸浓度的增加DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐降低(P均<0.01);固定叶酸浓度和时间,随着MNNG浓度的增加DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐升高(P均<0.01);固定MNNG和叶酸浓度,随着干预时间的延长DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐升高(P均<0.01);叶酸浓度与MNNG浓度之间、MNNG浓度与作用时间之间均存在交互作用(P<0.01)。不同叶酸浓度与不同MNNG浓度之间、不同叶酸浓度与不同作用时间之间、不同MNNG浓度与不同作用时间之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:叶酸浓度降低对MNNG影响哈萨克族食管上皮细胞DNMT1酶活性及表达有一定的激发作用,对食管癌的发生有一定的促进作用,而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用。

Keap1与食管鳞状上皮细胞癌淋巴结转移和浸润深度的关系

目的分析Keleh样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keleh-like ECH-associated protein 1,Keap1)的表达水平与食管鳞状上皮细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)淋巴结转移和浸润深度的关系。方法采用免疫组化SP法检测ESCC患者的癌组织和癌旁组织中Keap1的表达水平,通过单因素和多因素分析及趋势χ2检验分析其与ESCC淋巴结转移和浸润深度的关系。结果 Keap1高表达与淋巴结转移(OR=3.945,95%CI:1.485~9.147)和浸润深度(OR=4.683,95%CI:1.692~10.275)有关;Keap1高表达是ESCC淋巴结转移的危险因素(Waldχ~2=23.579,P<0.01),趋势χ~2检验结果显示,ESCC患者淋巴结转移的风险随Keap1表达水平的升高而升高(χ~2=5.173,P=0.023);Keap1的表达是ESCC侵及浆膜的危险因素(Waldχ~2=26.587,P<0.01),趋势χ2检验结果显示,ESCC侵及浆膜的风险随Keap1表达水平的升高而升高(χ~2=9.788,P=0.002)。结论 Keap1的表达与ESCC的发生、发展有关,Keap1的表达可促进ESCC的淋巴结转移和浸润。

IL-1β引起食管鳞状细胞癌细胞上皮-间质转化的实验研究

目的研究白细胞介素1-β(IL-1β)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法在细胞培养基中加入IL-1β,观察IL-1β处理48h后ESCC细胞形态及EMT相关标志物的变化,另以加入PBS的ESCC细胞为阴性对照组。结果 IL-1β处理后ESCC细胞由上皮样形态转变为间质样形态。qRTPCR与Western blot结果显示,IL-1β处理后上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达减少,间质标志物波形蛋白(Vimentin)和Slug表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-1β可引起ESCC细胞发生EMT。

UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1(UBQLN1)及上皮-间质转化(EMT)标志分子在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织(均P<0.05);ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织(P<0.05),而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织(均P<0.05);ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关(r=-0.5173,P<0.001),而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关(r=0.7803、0.6856,P<0.001)。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。

DNMT1高表达在MNNG诱导哈萨克族食管上皮细胞恶性转化中的作用

目的:利用已构建的哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞模型,探讨DNMT1高表达在MNNG诱导食管上皮细胞恶性转化中的作用,为研究食管癌发病机制提供理论依据。方法:以MNNG为诱导剂,MTT法和克隆形成实验确定MNNG的恶性转化剂量;对哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞和正常上皮细胞采用隔代染毒的方式进行染毒,每次染毒1 h,软琼脂集落形成实验观察不同染毒和传代次数的细胞集落形成情况;裸鼠成瘤实验观察哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞及其转化细胞的恶变程-5度。结果:MTT法和克隆形成实验发现MNNG转化浓度为1.50×10 mol/L,软琼脂集落形成实验发现染毒14次第27代的哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞在软琼脂上有细胞集落形成,并且随着MNNG染毒剂量、次数和细胞传代次数的增加,出现细胞形态不规则等恶性转化特点,接触抑制逐渐消失,耐受性逐渐增强,生长速度逐渐增加,而正常上皮细胞未出现阳性结果,细胞固缩死亡。接种哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞的裸鼠出现局部肿块,但病理鉴定仅为结构紊乱,并未出现鳞癌,而接种转化细胞的裸鼠出现肿瘤,经病理鉴定为鳞癌。结论:成功构建了哈萨克族食管上皮DNMT1高表达细胞恶性转化模型,DNMT1高表达可促进MNNG致细胞恶性转化,加快其恶变速率和恶变程度。

木犀草素与叶酸对黄曲霉毒素B1致食管上皮细胞毒性及MTHFR基因高甲基化的影响

目的:研究木犀草素(luteolin,LUT)与叶酸(folic acid,FA)对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)诱导损伤的人正常食管上皮细胞(human normal esophageal epithelial cells,HEEC)MTHFR基因甲基化的影响。方法:不同浓度(0、13、25、50、100、200μmol/L)AFB1染毒HEEC 24、48、72 h,CCK-8法检测细胞活力;将HEEC分为空白对照组、AFB1染毒组(200μmol/L)、LUT干预组(160μmol/L)、FA干预组(20、200μmol/L)以及联合干预组(160μmol/L LUT+20μmol/L FA、160μmol/L LUT+200μmol/L FA),处理24 h后CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blot检测MTHFR蛋白的表达水平,MassARRAY甲基化检测MTHFR基因启动子区甲基化的情况。结果:不同浓度的AFB1染毒HEEC 24、48、72 h均可以抑制细胞增殖,而经LUT和FA干预后,与AFB1染毒组相比,LUT及联合干预组细胞周期阻滞显著减少(P<0.05),细胞抑制率及凋亡率显著降低(P<0.05),MTHFR蛋白表达上调有所改善(P<0.05)。且LUT与FA及二者联合对MTHFR基因启动子区高甲基化水平均有降低作用(P<0.05)。结论:AFB1对HEEC有毒性作用,表现在增殖抑制、周期阻滞,促进凋亡,上调了MTHFR蛋白的表达,LUT干预可减弱这些损伤,对AFB1所致毒性起到一定的保护作用。AFB1提高了MTHFR基因启动子区甲基化水平,导致表观遗传的改变。LUT与FA及联合作用可以降低该甲基化水平,改善该表观遗传的改变。

过表达miR-145-5p通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10细胞的恶性生物学行为

目的:探究miR-145-5p对食管鳞状细胞癌TE-10细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)等恶性生物学行为的分子机制。方法:q PCR法检测miR-145-5p在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p与胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的靶向调控关系,Western blotting检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达,CCK-8法和Transwell检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果:miR-145-5p在3株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10细胞中表达最低(P<0.01或P<0.05)。过表达miR-145-5p可显著抑制TE-10细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程(P<0.01或P<0.05)。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p靶向下调IGF1R表达(P<0.01)。回复实验进一步证实,与单独过表达IGF1R相比,同时过表达miR-145-5p和IGF1R能显著缓解IGF1R对TE-10细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程的促进作用(P<0.01或P<0.05)。结论:过表达miR-145-5p通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。

放疗对食管鳞癌患者血清SCC、CEA、CRFRA21-1、TAG72、CA199、T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨放疗对食管鳞癌患者血清鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell cancer,SCC)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen21-1,CRFRA21-1)、肿瘤相关糖蛋白72(tumor associated glycoprotein,TAG72)、糖类抗原199(cancer antigen 199,CA199)水平及T淋巴细胞亚群的影响。方法:选择2013年1月~2016年1月在江阴市人民医院确诊的60例食管鳞癌患者为实验组,另外同期选择40例健康体检者为对照组。实验组患者给予6MV X线放射治疗。检测并比较实验组患者放疗前和放疗后1个月、对照组健康者血清SCC、CEA、CRFRA21-1、TAG72、CA199水平及外周血CD4+、CD8+细胞所占的比值。结果:治疗前,实验组患者血清SCC、CEA、CRFRA21-1水平均明显高于对照组健康者,差异具有统计学意义(均P<0.05);治疗后,实验组患者血清SCC、CEA、CRFRA21-1水平均明显低于治疗前,但实验组患者上述各肿瘤标志物水平均明显高于对照组健康者,差异具有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,实验组患者外周血CD4^+、CD4^+/CD8^+所占比值明显低于对照组健康者,CD8^+细胞所占比值明显高于对照组健康者,差异具有统计学意义(均P<0.05);治疗后,实验组患者外周血CD4^+、CD8^+细胞所占比值及CD4^+/CD8^+比值与治疗前比较差异无统计学意义(均P>0.05),且实验组患者外周血CD4^+、CD4^+/CD8^+细胞所占比值明显低于对照组健康者,CD8^+比值明显高于对照组健康者,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:放疗能明显降低食管鳞癌患者血清SCC、CEA、CRFRA21-1、水平,但对T淋巴细胞亚群水平影响不明显。