细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a信号通路对人骨骼肌成肌细胞衰老的诱导及对线粒体膜电位的调控

目的观察细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a（INK4a）信号通路对线粒体功能的影响。方法重组慢病毒载体pLVX-p16^INK4a被构建出并感染第3代人骨骼肌成肌细胞，用实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）法与Western blot鉴定p16^INK4a基因转录与蛋白表达，7d后，用衰老相关β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老程度。同时，用JC-1染料染色和流式细胞仪分别检测线粒体膜电位水平。结果成功转染了p16^INK4a的成肌细胞出现明显衰老表型，其细胞线粒体膜电位为（-40．287±12．663）mV，较阳性对照（CV）及阴性对照（NC）组的（-9．267±1．332）mV和（-6．967±2．031）mV明显下降（P=0．000），而p16^INK4a蛋白和mRNA相对表达量分别为45．25±8．21和33．89±7．87，明显高于CV组的10．18±2．69和5．26±1．92及NC组的9．41±1．70和7．16±1．86（P=0．000）。结论INK4a信号通路的上调导致了人骨骼肌成肌细胞的衰老，INK4a通路是人骨骼肌成肌细胞衰老的直接诱因；另外，INK4a通路能对线粒体通路产生作用，使线粒体膜电位下降．激发线粒体通路．间接加速成肌细胞的衰老。