青藤碱通过调控STAT3及NF-κB信号通路对多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨青藤碱对骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法将培养好的U266细胞用不同浓度青藤碱(0、0.5、1、2 mmol/L)处理,空白对照组加入0.5%浓度的DMSO。用CCK-8检测U266细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡;Western blot法检测各组细胞的增殖相关蛋白、凋亡相关蛋白、信号转导与转录激活因子(STAT3)及基因结合核因子(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,青藤碱处理组U266细胞凋亡率增加,增殖能力降低,抗凋亡相关蛋白Bcl-2及Mcl-1表达水平下降、cleaved caspase-3、cleaved PARP表达水平上调,STAT3、NF-κB信号通路活性降低,表现为p-STAT3、p-IκBα的表达水平下降。结论青藤碱通过下调STAT3及NF-κB信号通路活性,促进骨髓瘤U266细胞凋亡。

巢式MSP检测砷剂诱导人多发性骨髓瘤U266细胞系p16基因去甲基化及转录

本研究探讨用高灵敏度的DNA甲基化检测方法及DNA克隆测序分析法检测三氧化二砷(As2O3)的去甲基化作用,并对其可能的去甲基化作用机制进行分析。采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specificPCR,n-MSP)、DNA克隆测序分析法检测As2O3作用前后U266细胞株p16基因甲基化状态,应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达,以生长曲线、MTT法、集落形成实验检测As2O3对骨髓瘤细胞生长和增殖的抑制作用。利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞系U266周期的影响。结果表明:①未处理组U266细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变,而经As2O3作用的U266细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,这说明U266细胞存在p16基因甲基化,As2O3作用后p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因不表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/组和2.0μmol/组p16基因表达阳性条带灰度值与β-肌动蛋白比值分别为(0.22±0.10)、(0.59±0.11)、(0.68±0.09),阳性对照灰度比值为(0.77±0.13),差异有非常显著的统计学意义(P<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制骨髓瘤细胞生长,G0-G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0-G1期,抑制骨髓瘤细胞的增长。

三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制。用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2μmol/LAs2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞procaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化。结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化。结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,最终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制。

C反应蛋白对多发性骨髓瘤细胞系U266增殖机制的研究

为了观察C反应蛋白(CRP)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖活性的作用机制,将液氮冻存的U266细胞复苏后,悬浮培养,第3天收集细胞备用,分别以不同浓度CRP(0、5、10、20mg/L)培养24小时,采用血液分析仪检测细胞增殖情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测凋亡相关蛋白survivin和HSP90α的表达。结果发现:CRP处理的细胞组增殖率及survivin、HSP90α的表达量均高于对照组(p<0.05),20mg/LCRP组作用最显著;survivin、HSP90α之间表达具有显著相关性(r=0.737,p<0.0001)。结论:CRP是通过调节凋亡抑制蛋白Survivin及HSP90α的表达发挥促进U266细胞增殖的作用。

20(S)-人参皂苷Rg3体外对多发性骨髓瘤U266细胞系的增殖抑制作用

目的探讨天然化合物20(S)-人参皂苷Rg3体外对多发性骨髓瘤U266细胞系的抑制作用。方法利用MTT、流式细胞仪检测20(S)-人参皂苷Rg3对细胞周期的影响及诱导凋亡作用;应用Western印迹技术检测加药后U266细胞凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果 20(S)-人参皂苷Rg3作用U266细胞系24、48 h的IC50值分别为(71.07±2.63)μmol/L、(44.06±3.98)μmol/L,在一定浓度范围内可抑制U266细胞系的增殖,并呈时间和浓度依赖性(P<0.05);可促进U266细胞系凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05);细胞周期检测,与对照组比较,G0/G1期百分比增多(P<0.05),同时S期百分比逐渐减少(P<0.05),而G2/M期百分比没有明显的变化(P>0.05);药物处理U266细胞系24 h后,Western印迹检测示随药物浓度的增加,procaspase-3表达轻度下降,cleaved caspase3显著表达上升(P<0.05)。结论在一定的浓度范围内,20(S)-人参皂苷Rg3可抑制U266细胞系的增殖,且能够诱导U266细胞系凋亡,呈剂量依赖性,诱导U266细胞凋亡可能是通过上调cleaved caspase-3的表达引起的;20(S)-人参皂苷Rg3还可以影响U266细胞系的G1/S期,使细胞阻滞在G1期,而对G2/M期无明显影响,可能是其抑制肿瘤的作用机制之一,使其成为潜在的治疗多发性骨髓瘤的新制剂。

丙戊酸钠抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及组蛋白乙酰化调控的研究

本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对U266细胞增殖的抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。采用CCK-8法检测VPA对U266细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测VPA作用前后U266细胞周期的变化,半定量RT-PCR检测VPA作用后U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)mRNA的表达变化,Western blot方法检测VPA作用后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果表明,VPA对U266细胞增殖的抑制作用呈时间-浓度依赖性;2.5mmol/L的VPA处理细胞48小时后,细胞周期检测显示G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降,细胞被阻滞在G0/G1期(p<0.05);RT-PCR证实VPA能够抑制HDAC1 mRNA的表达水平;Western blot方法证实不同浓度VPA作用细胞48小时后HDAC1蛋白水平降低,组蛋白H3、H4乙酰化表达水平提高。结论:VPA能够抑制U266细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达

背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)是一类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi(MS-275)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系。方法:将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Western blot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的裂解情况。结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期。MS-275作用U266细胞48h时的IC50为1.39μmol/L;2μmol/L的MS-275作用U266细胞24h后,G0/G1期细胞占66.39%,36h后G0/G1期细胞占89.80%。瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化。Western blot检测结果显示,MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切。结论:MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关。

SU11248对骨髓瘤细胞U266增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨SU11248对骨髓瘤细胞U266的生物学效应的影响及其作用机制。方法:应用MTT法检测SU11248对U266细胞增殖能力的影响;用流式细胞技术检测细胞的DNA倍体及细胞周期变化、用凝胶电泳分析DNA片段化、用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测SU11248对U266细胞凋亡的影响;以RT-PCR法检测3.0μg/mlSU11248作用U266细胞后c-myc、hTERT、Bcl-2、BaxmRNA表达变化。结果:SU11248可明显抑制U266细胞增殖(P<0.05),呈现剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为3.0μg/ml。SU11248可将U266细胞阻滞于G0/G1期,并呈现剂量依赖性;能诱导U266细胞呈现典型的DNA梯状带;促进细胞原位凋亡。3.0μg/mlSU11248作用后,U266细胞c-myc、hTERT、Bcl-2mRNA表达水平呈时间依赖性降低,而BaxmRNA表达水平呈时间依赖性增强。结论:SU11248能抑制U266细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调U266细胞Bcl-2、c-myc和hTERT的表达及上调Bax的表达有关。

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞毒作用研究

目的:研究狗舌草提取物对266细胞的细胞毒作用。方法:U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用CCK-8试剂检测细胞毒作用。结果:狗舌草提取物对266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为3.2mg.L-1。结论:狗舌草提取物对266细胞有体外细胞毒作用。

美伐他汀对人多发性骨髓瘤细胞系U2 66体外增殖与凋亡的影响

为了探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG CoA)还原酶抑制剂对多发性骨髓瘤 (MM)细胞增殖与凋亡的调控作用及机制 ,应用MTT比色法、光镜形态学观察、流式细胞术、DNA凝胶电泳及RT PCR研究了美伐他汀(mevastatin )对MM细胞系U2 6 6细胞体外增殖与凋亡的影响。结果显示 ,美伐他汀以剂量及时间依赖方式抑制U2 6 6细胞增殖 ;细胞周期分析显示美伐他汀诱导U2 6 6细胞G0 -G1 期阻滞 ,但对 p2 7蛋白及mRNA的表达无影响 ;在美伐他汀作用下U2 6 6细胞出现核染色质凝聚、核固缩、核碎裂等凋亡形态改变 ,PI- AnnexinⅤ + 细胞增多 ,线粒体跨膜电位 (△ψm)下降 ,DNA凝胶电泳出现梯形条带 ,bcl 2mRNA表达下调。加入外源性甲羟戊酸 (meva lonate,MVA)可完全逆转美伐他汀对U2 6 6细胞增殖与凋亡的效应。结论 :美伐他汀可通过MVA途径 ,诱导G0-G1 期阻滞抑制增殖、下调bcl 2表达及降低线粒体膜电位触发U2 6 6细胞凋亡。

人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用

本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体（以下简称人单抗）的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I?或其轻重链的合成及分泌。目前已传代至136代,细胞中的人染色体稳定。经与人胃痛周围淋巴结的淋巴细胞再次杂交,获得两株人鼠人杂交瘤即HGO3和HMG7,在体外传代已6个月,抗体分泌稳定。其中HGO3分泌抗胃癌的人单抗。HMG7是经体外致敏人淋巴细胞与FMC-1融合获得的一株杂交瘤,能分泌针对鼠抗人胃癌单抗MG7的人单抗。两株杂交瘤1×106细胞在24小时内的抗体分泌量达25μg～50μg/ml.初步认为FMC-1是一值得推荐用于人单抗制备的种间骨髓瘤细胞系。

FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡的机制研究

目的:探讨FTY720对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法:FTY720 2.5、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,流式细胞术Annexin-V-FITC/PI染色检测细胞凋亡。应用FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞0、6、16及24 h,检测细胞凋亡率。二甲基亚砜(DMSO)及FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞24 h,DAPI染色5 min,将细胞滴于载玻片上,在荧光显微镜下观察细胞核形态。FTY720 5μmol/L单用或/和泛Caspase抑制剂Z-VAD-fmk 12.5、25、50μmol/L合用处理U266细胞,CCK-8方法检测细胞生存率。FTY720 0、2.5、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,使用Western bolt方法检测Cleaved Caspase-3的表达。FTY720 0、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,应用Western blot检测M CL-1、survivin、BCL-2、BID、BAX、BAK和P-ERK的表达。结果:FTY720明显增加U266细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性(r=0.98,r=0.97,P<0.05),在荧光显微镜下可观察到,FTY720处理的细胞的细胞核出现核固缩及碎裂,发生凋亡的改变,而在DM SO组未观察到此现象。Z-VAD-fmk可逆转FTY720引起的细胞凋亡,呈浓度依赖性(r=0.97,P<0.05)。FTY720可引起U266细胞M CL-1、Survivin、BCL-2表达下降,同时引起BID裂解,而对BAX,BAK,P-ERK的表达没有影响。结论:FTY720可引起U266细胞凋亡,该凋亡为Caspase-3依赖性死亡。FTY720诱导产生的凋亡是通过下调抗凋亡蛋白MCL-1、survivin、BCL-2及激活促凋亡蛋白BID实现的。

2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖与凋亡的影响

为了探讨2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖及凋亡的影响,并观察其与地塞米松、反应停、三氧化二 砷、唑仑膦酸钠等药物联合时的协同作用,采用台盼蓝染色法检测细胞活力,应用BrdU掺入法检测浆细胞标记指 数(PCLI),DNA片段原位末端标记(TUNEL法)检测凋亡细胞。药物协同作用判断标准按金氏公式计算Q值。结 果表明,7株骨髓瘤细胞系NCI-H929、HS-sultan、KM3、SKO-007、CZ-1、U266、LP-1经1、4、8、12、16μmol／L 2-甲氧基 雌二醇分别作用12、24、36和48小时后细胞活力明显受抑制,呈现时间剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P <0.05)。各细胞系对2-甲氧基雌二醇敏感性不同,其IC50介于(20.8±0.27)μmol／L与(34.1±0.57)μmol／L之 间。1、4、8、12、16μmol／L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时可诱导骨髓瘤细胞系凋亡,凋亡率介于 9％-33％之间,呈现时间和剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P<0.05)。经12μmol／L 2-甲氧基雌二醇作用 24小时后浆细胞标记指数(PCLI)由作用前平均(30.14±4.28)％下降到作用后的(14.71±6.27)％,差异显著(P <0.05)。2-甲氧基雌二醇与药物联合作用后计算Q值介于1.13-1.43之间,具有协同作用。结论:2-甲氧基雌二 醇可抑制骨髓瘤细胞生长,并可诱导骨髓瘤细胞凋亡,与地?

橘皮化合物5⁃ATAN诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

目的探讨橘皮提取物(5⁃ATAN)对多发性骨髓瘤细胞U266增殖和凋亡的影响及其机制。方法用6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的5⁃ATAN处理对数生长期U266细胞24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞色素C、BCL⁃2、BAX、pro⁃caspase 3、pro⁃caspase 9及cleaved⁃caspase 3、cleaved⁃caspase 9、PARP、Bad、p⁃Bad的表达。结果5⁃ATAN对U266细胞的增殖有抑制作用,呈剂量依赖性(P<0.05);细胞凋亡率随药物浓度的增加显著增加(P<0.05),线粒体膜电位随5⁃ATAN浓度的增加显著降低(P<0.05)。抗凋亡蛋白Bcl⁃2、p⁃Bad及pro⁃caspase 3、pro⁃caspase 9及PARP的表达逐渐降低;细胞色素C及促凋亡蛋白Bax、cleaved⁃caspase 3、cleaved⁃caspase 9、PARP(89KDa)的表达逐渐升高(P<0.05)。结论5⁃ATAN抑制多发性骨髓瘤的增殖,促进其凋亡,可能与线粒体凋亡信号通路的激活有关。

重组IL-4、IFN_γ对人骨髓瘤细胞系KM_3增殖的调控

我们在本实验中发现重组IL-4和IFN_γ可抑制但不能完全阻止人骨髓瘤细胞系KM_3的增殖。当IL-4为200～2000u/ml或者IFN_γ为100～1000u/ml时,它们对KM_3细胞的抑制与剂量有关。它们作用于KM_3细胞后,细胞培养上清中LDH活性无明显变化,而IL-6活性明显下降,这与抗IL-6单克隆抗体对KM_3细胞增殖的影响类似。本实验结果提示:人骨髓瘤细胞系KM_3的增殖部分与IL-6的自分泌有关。重组IL-4和IFN_γ可通过降低KM_3细胞的IL-6自分泌而抑制其增殖,它们有希望成为IL-6依赖性骨髓瘤的免疫治疗剂。

龙葵总提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的作用

目的:研究龙葵总提取物对U266细胞的细胞毒作用及其机制。方法:U266细胞株与龙葵总提取物共同培养,用CCK 8试剂检测细胞毒作用;用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果:龙葵总提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为117mg/L;龙葵总提取物影响U266细胞周期,G0 /G1 期细胞减少,S期、G2 /M期细胞增加,凋亡细胞增加。用AnnexinV/PI染色及TFAR19染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与龙葵总提取物有剂量依赖关系。结论:龙葵总提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。

2-甲氧基雌二醇增强骨髓瘤细胞U266对硼替佐米敏感性的相关机制研究

本研究旨在探索2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米对人骨髓瘤细胞株U266的协同抑制增殖和诱导凋亡作用及其可能机制。2-ME2、硼替佐米单用以及二者联合分别处理U266细胞,用CCK8方法检测细胞增殖活力,caspase3/7活性法检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期的变化,荧光实时定量PCR检测P21、BAX、BCL-2等mRNA水平变化。结果表明:相比于2-ME2和硼替佐米单用,2-ME2联合硼替佐米处理U266细胞后,细胞增殖明显抑制(p<0.05),细胞凋亡增加(p<0.05),细胞周期阻滞于G1-S期;在mRNA水平,P21及BAX表达上调,BCL-2表达下调。结论:2-ME2联合硼替佐米能更有效地抑制U266细胞增殖和诱导凋亡,具有协同作用,其机制可能与其诱导P21及BAX表达上调有关。

马法兰和阿霉素耐药人骨髓瘤细胞系的建立

目的:建立对马法兰和阿霉素耐药的人骨髓瘤细胞系。方法:在人骨髓瘤细胞系RPMI8226培养体系中分别加入1.0×10-8M的阿霉素(DOX)和1.0×10-6M的马法兰(LP),每周3次换液,DOX于10月后增加至1.0×10-7M,LP于47周后增加至5×10-6M。MTT法测定敏感细胞系和耐药系8226/DOX的IC50值,在耐LP细胞系8226/LP中加入丁硫氨酸亚砜胺(BSO)阻断谷胱甘肽的合成,MTT法测定细胞系8226/S、8226/LP细胞及8226/LP+BSO细胞的IC50值。HE染色普通光学显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞表面P-糖蛋白、CD38、CD45、CD19。台盼蓝拒染法测出8226/S、8226/DOX、8226/LP细胞的生长曲线。结果:所培养耐药细胞系8226/DOX、R8226/LP具有亲母细胞系的生物学特点,形态相似,均为CD38+CD45-CD19-表达细胞,倍增时间与亲母细胞系相近。比较IC50,8226/DOX对DOX的耐药约15倍于亲母细胞系。8226/LP对LP的耐药约7倍于亲母细胞系,而经过BSO阻断,其敏感性明显增加。结论:建立的骨髓瘤细胞系RPMI8226/LP、RPMI8226/DOX可作为骨髓瘤耐药研究的有效模型。

三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞U266自噬及凋亡作用研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导多发性骨髓瘤细胞U266自噬及凋亡的作用。方法选取多发性骨髓瘤细胞株U266细胞,随机分为对照组、0.3μg/ml组、0.6μg/ml组和1.2μg/ml组,分别为0.9%氯人钠溶液和0.3μg/ml、0.6μg/ml、1.2μg/ml As2O3,采用MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,透射电镜观察各组细胞自噬,Western blot检测Beclin-1、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结果随As2O3浓度增加,U266细胞增殖抑制情况越严重,1.2μg/ml组培养24 h、48 h和72 h时OD值分别为(0.382±0.097)、(0.534±0.111)和(0.604±0.121),明显低于0.3μg/ml组、0.6μg/ml组和对照组(P<0.05);0.3μg/ml组、0.6μg/ml组、1.2μg/ml组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),其中1.2μg/ml组细胞凋亡率为(25.43±3.88)%,明显高于0.3μg/ml组、0.6μg/ml组(P<0.05);1.2μg/ml组可见较多特征性的自噬小体;0.3μg/ml组、0.6μg/ml组、1.2μg/ml组Beclin-1相对表达量高于对照组(P<0.05),而Caspase-3、Bcl-2相对表达量低于对照组(P<0.05),其中1.2μg/ml组Beclin-1相对表达量高于0.3μg/ml组、0.6μg/ml组(P<0.05),而Caspase-3、Bcl-2相对表达量低于0.3μg/ml组、0.6μg/ml组(P<0.05)。结论As2O3诱导多发性骨髓瘤细胞U266自噬及凋亡,存在剂量依赖关系,可能与调控Beclin-1、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达有关。

熊果酸对多发性骨髓瘤细胞株U266的凋亡作用及机制

目的探讨三萜类化合物熊果酸(ursoIic acid,UA)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株U266的凋亡诱导作用及分子机制。方法用熊果酸处理U266细胞,Cell Counting Kit-8法检测细胞增殖抑制情况;用20μmol/L熊果酸处理U266细胞24 h,瑞氏法染色后在光学显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin-Ⅴ标记,在流式细胞仪上检测细胞凋亡率变化;用实时荧光定量PCR方法及Western blot方法检测FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC及p53的表达变化。结果经熊果酸处理后,U266细胞的增殖受到抑制,光学显微镜下可观察到细胞形态不规则样改变,胞膜小泡状形成,细胞质内空泡增多,细胞核染色质浓缩、固缩;流式细胞术检测Annexin-Ⅴ阳性细胞比例随用药浓度增加及用药时间延长而增加;细胞内FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC的mRNA和蛋白质表达随用药浓度增加及用药时间延长呈显著下降趋势,而p53的mRNA及蛋白表达逐渐增高。结论熊果酸可抑制U266细胞的增殖并诱导其凋亡,体外有抗多发性骨髓瘤细胞作用,为多发性骨髓瘤选择新的靶向治疗方案提供实验依据。