土贝母苷甲对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨土贝母苷甲(下称苷甲)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:PGCL3细胞经不同剂量苷甲处理24、48、72h,MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用重组基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Transwell小室趋化运动模型研究苷甲对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测苷甲对PGCL3细胞分泌Ⅳ型胶原酶(MMP-2)能力及活性的影响。结果:苷甲明显抑制PGCL3细胞的生长,且呈剂量依赖关系,作用24、48、72h的IC50分别为15.70、14.20和13.32μmo.lL-1。苷甲1.25、2.50、5.00μmol·L-1处理PGCL3细胞24h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为28.7%、41.0%、57.5%;对PGCL3细胞迁移能力的抑制率分别为21.6%、35.2%、53.7%。苷甲降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且呈一定的剂量依赖关系。结论:苷甲抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其对PGCL3细胞的侵袭和粘附的影响可能与其降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率有关。

土贝母皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞侵袭行为的影响

目的:土贝母[Bolbostemma paniculatum(Max-im.)Franquet]是一种传统中药。我们以前的研究结果已证实从土贝母块茎中分离得到的土贝母皂苷(下称皂苷)有强抗肿瘤效果和诱导肿瘤细胞调亡作用。本研究旨在探讨皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用粘附相关基底膜成分分析试验、重组基底膜侵袭试验、Transwell室趋化运动模型研究皂苷对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测皂苷对Ⅳ型胶原酶分泌及活性的影响。结果:皂苷明显抑制PGCL3细胞的生长,且其效果呈剂量依赖关系。皂苷作用PGCL3细胞24、48、72 h的IC50值分别为16.77、14.62、14.46μmol.L-1。皂苷1.25、2.50、5.00μmol.L-1处理PGCL3细胞24 h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为20.6%、30.6%、46.8%,对PGCL3细胞运动能力的抑制率分别为14.2%、24.7%、42.5%。皂苷降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及Ⅳ型胶原酶活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且其效果呈一定的剂量依赖关系。结论:皂苷抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力;皂苷对PGCL3细胞粘附和侵袭的影响与其降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及其活性有关。

DAPK1基因转染对高转移性肺癌细胞PGCl_3的影响

背景与目的:死亡相关蛋白激酶DAPK1失活是影响非小细胞肺癌患者生存的独立因子,过表达的DAPK1可以诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移,但抑制转移的机制尚未完全清楚。本文探讨DAPK1基因抑制高转移性肺癌PGCl3细胞生长及转移的可能机制。方法:利用基因重组技术构建含DAPK1基因开放读码框(ORF)的真核表达载体pcDNA3.1-DAPK1,用脂质体LipofectAMINE2000介导转染PGCl3细胞系,检测转染后PGCl3细胞的生长曲线、体外软琼脂克隆形成率、体外侵袭、运动和粘附能力的变化,同时检测了胶原酶活性,p53,bcl-2基因表达的变化。结果:转染DAPK1基因的细胞生长比空白组及pcDNA3.1转染组减缓;体外软琼脂克隆形成率下降P<0.05;pcDNA3.1-DAPK1转染组体外侵袭能力是空白组的68.5%,而pcDNA3.1转染组是空白组的88.0%;pcDNA3.1-DAPK1转染组运动能力是空白组的87.3%,pcDNA3.1转染组是空白组的95.7%;pcDNA3.1-DAPK1转染组粘附能力是空白组的62.7%,pcDNA3.1转染组是空白组的91.2%;各组的胶原酶变化不明显;pcDNA3.1-DAPK1转染组p53基因表达升高,bcl-2基因下调。结论:DAPK1基因的过表达可以在一定程度上逆转PGCl3细胞的恶性表型,使PGCl3细胞生长受抑制,体外侵袭、运动和粘附能力下降,p53基因表达的上调及bcl-2基因表达下调。

大黄素抑制人高转移巨细胞肺癌PG细胞的肿瘤转移相关性质

目的:研究大黄素对人高转移巨细胞肺癌PG细胞转移相关性质的影响。方法:MTT法检测大黄素对多种恶性肿瘤细胞的增殖抑制作用;BoydenChamber法检测大黄素对PG细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法(Zymography)检测大黄素对PG细胞Ⅳ型胶原酶分泌的影响;流式细胞术检测大黄素对PG细胞周期的影响Westernblot法检测大黄素作用后PG细胞周期相关蛋白的表达。结果:大黄素可抑制来源于不同组织多种肿瘤细胞的增殖,其IC50值在15～70μmol/L。40μmol/L和80μmol/L大黄素处理PG细胞24h,可使细胞侵袭能力分别降低到对照组的76.9%和57.4%,同时可使细胞MMP2和MMP9的分泌量显著下降,大黄素对PG细胞同基底膜的粘附能力没有明显影响。20μmol/L和40μmol/L大黄素作用于PG细胞24h后,可使细胞周期明显阻滞于G2/M期,伴随着S期的相应减少,进一步分析周期相关蛋白的表达,大黄素作用后可使PG细胞cyclinB1蛋白表达明显下降,而对p34cdc2的表达没有明显影响。结论:大黄素能抑制肿瘤细胞转移相关性质,提示其具有抗转移潜能。

丹参酮ⅡA对乏氧环境下人高转移性巨细胞肺癌细胞表面β1-整合素及E-cadherin表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对低氧培养的人高转移性巨细胞肺癌(PG)细胞表面黏附分子E-cadherin、β1-整合素表达的影响。方法 PG细胞复苏,按干预药物不同分为丹参酮ⅡA高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组,分别置于常氧和低氧环境下培养,48 h后应用流式细胞术测定黏附分子E-cadherin、β1-整合素在各组PG细胞表面表达情况。结果低氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素荧光强度随丹参酮ⅡA浓度的增高而逐渐减弱,但表达β1-整合素的阳性细胞率接近100%,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮ⅡA浓度的增加,其阳性细胞数增加,但表达E-cadherin的荧光强度很弱,无统计学意义。常氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素的荧光强度随着丹参酮ⅡA浓度的增高逐渐减弱,表达β1-整合素的阳性细胞率接近100%,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮ⅡA浓度的增加,其阳性细胞数减少,但表达E-cadherin荧光强度很弱,没有统计学意义。结论在常氧环境下,丹参酮ⅡA通过下调E-cadherin和β1-整合素表达来抑制PG细胞的浸润转移;在低氧环境下,通过下调β1-整合素来抑制PG细胞的转移而上调E-cadherin表达来增加PG细胞的浸润转移能力。

半边旗提取物5F对人高转移肺癌细胞PGCl3侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F（以下简称5F）对人高转移肺癌细胞PGCl3转移相关能力的影响。方法MTT法检测5F对PGCl3细胞的增殖抑制作用；Transwellchamber法检测5F对PGCl3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响；细胞粘附实验检测5F对PGCL3细胞粘附能力的影响。结果：5F对PGCL3细胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用，当药物浓度为12．5、25、50、100μmol／L作用细胞24小时，抑制率分别为：（5．74±0．20）％、（9．91±0．58）％、（15．02±0．42）％、（36．50±1．15）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后，能明显抑制细胞体外侵袭基底膜成分matrigel的能力，其抑制率分别为：（30．62±0．42）％、（55．30±4．53）％、（76．21±3．21）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后，能明显抑制细胞的趋化运动能力。其抑制率分别为：（18．91±1．43）％、（43．72±2．84）％、（59．614-4．01）％。当用上述浓度的药物处理细胞5h后，测定其在1h内与matrigel的粘附能力。结果表明：5F能使PGCL。

nm23-H_1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性。结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P<0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01)。结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。

金宁方代谢产物抑制肺癌细胞增殖的研究

目的:研究金宁方代谢产物对人高转移肺癌细胞95-D增殖的抑制作用。方法:收集金宁方饲喂SD大鼠的血清,采用噻唑蓝(MTT)法,观察不同浓度的金宁方代谢产物对人肺癌细胞95-D生长增殖的抑制效果。结果:不同浓度的金宁方代谢产物对人高转移肺癌细胞95-D的增殖均有抑制作用,抑制率产生在24-48 h。15%浓度(实验的最高浓度)在48 h达到最佳抑制细胞生长的生物学作用,其抑制率约为47%。金宁方的各主要药效单体都具有抑制95-D细胞增殖的作用,其中草酸铵(ammonium oxalate,Am O)作用最明显,能够调控caspase3和8表达而促进95-D细胞凋亡。结论:金宁方代谢产物能抑制人高转移肺癌细胞95-D的体外增殖,其可能在肺癌的治疗中具有一定的价值。

非小细胞肺癌患者六种血清指标的变化及其检测价值

目的探讨血清半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、高迁移率族蛋白A2(HMGA2)、神经纤毛蛋白-1(NRP-1)、癌胚抗原(CEA)、鳞癌相关抗原(SCC-Ag)及细胞角蛋白-19片段(CYFRA 21-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的水平变化及临床意义。方法回顾性选取2019年3月至2022年3月滁州市第一人民医院诊治或检查的79例NSCLC患者(NSCLC组)、39例良性肺部疾病患者(良性对照组)及50例健康体检者(健康对照组),比较三组血清Galectin-3、HMGA2、NRP-1、CEA、SCC-Ag及CYFRA 21-1水平的差异,分析Galectin-3、HMGA2、NRP-1和常规肿瘤标志物与NSCLC临床病理特征关系及对淋巴结转移、临床分期预测价值。结果NSCLC组血清Galectin-3、HMGA2、NRP-1、CEA、SCC-Ag、CYFRA 21-1表达高于良性对照组、健康对照组(P<0.05)。血清Galectin-3、HMGA2、NRP-1、CYFRA 21-1、CEA水平与NSCLC患者的肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、临床分期,呈全部或部分相关(P<0.05),SCC-Ag与病理类型有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,Galectin-3、HMGA2、NRP-1、CEA、CYFRA 21-1是影响NSCLC淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期的独立危险因素(P<0.05)。血清Galectin-3、HMGA2、NRP-1、CEA、CYFRA 21-1预测NSCLC淋巴结转移的AUC分别为0.950、0.878、0.745、0.771和0.706,预测NSCLC临床分期Ⅲ~Ⅳ期的AUC分别为0.934、0.865、0.755、0.695和0.698。结论NSCLC患者血清Galectin-3、HMGA2、NRP-1及常规肿瘤标志物CEA、SCC-Ag、CYFRA 21-1水平均明显升高,且Galectin-3、HMGA2、NRP-1均与淋巴结转移、临床分期有关,可作为NSCLC淋巴结转移及临床分期的新型预测指标。