沉默血管内皮钙黏蛋白基因对人高转移肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移的影响

目的探讨沉默血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)基因对人高转移肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移的影响。方法将携带3种不同抑制靶点的VE-cadherin基因沉默重组质粒GV248-shRNA-VEcadherin(1)、(2)、(3)分别转染至人高转移肝癌HCCLM3细胞,同时设阴性对照组(转染空载体质粒GV248-shRNANC)和空白对照组(未转染)。采用qRT-PCR及Western blot法分别检测各组细胞中VE-cadherin基因mRNA转录及蛋白的表达水平,同时筛选出最有效的靶点。MTT法测定各组细胞的体外增殖能力;Transwell小室试验检测各组细胞的迁移能力。结果与空白对照组及阴性对照组比较,3组转染VE-cadherin-shRNA干扰质粒的HCCLM3细胞的VE-cadherin基因mRNA转录及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),其中GV248-shRNA-VE-cadherin(1)的VEcadherin基因抑制率最高(P<0.05),筛选为最佳靶点;最佳靶点干扰组HCCLM3细胞的增殖及迁移能力均明显降低(P<0.05)。结论沉默VE-cadherin基因可显著抑制人高转移肝癌HCCLM3细胞的增殖及迁移。

高转移潜能肝癌HCCLM3细胞中侧群细胞的分离及其干细胞特性鉴定

目的:检测高转移潜能肝癌HCCLM3细胞株中侧群(side population,SP)细胞比例,分选SP细胞并探讨其生物学特性。方法:4种肝癌细胞株的转移潜能大小依次为HCCLM3>MHCC97H>MHCC97L>Huh7,分别予以荧光染料Hoechst33342染色,以加入维拉帕米的拮抗组为对照,流式细胞术检测SP细胞比例;从HCCLM3细胞中分选SP细胞和主群(main population,MP)细胞,采用悬浮球培养、Transwell侵袭实验及裸鼠成瘤实验判断HCCLM3 SP细胞是否具备肿瘤干细胞生物学特性;RT-PCR检测SP及MP细胞中干细胞相关基因的表达。结果:HCCLM3细胞中SP细胞比例为(16.9±1.8)%,显著多于MHCC97H、MHCC97L、Huh7中SP细胞比例[(8.4±0.7)%、(4.6±0.5)%、(1.0±0.2)%,均P<0.05]。HCCLM3细胞中,SP细胞悬浮球形成明显高于MP细胞[(25.3±5.1)%vs(11.2±2.6)%,P<0.05],SP细胞的侵袭能力显著高于MP细胞(P<0.05),SP细胞的裸鼠皮下成瘤能力也明显高于MP细胞。HCCLM3细胞的SP细胞中干细胞相关基因ABCG2、CD13、CD44、Nanog、Sox2及Klf4 mRNA平均表达水平分别是MP细胞的5.64、2.26、2.10、3.78、2.37、2.92倍(均P<0.05)。结论:肝癌HCCLM3细胞的SP细胞中富集了肝癌干细胞,这可能与其较高的转移潜能有关。

α干扰素对人高转移肝癌细胞系HCCLM3血管形成因子表达的影响

目的:研究IFN-a对高转移潜能的人肝癌细胞系HCCLM3 细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和白介素-8(IL-8)表达的影响,探索IFN-a抗肿瘤血管形成的机制. 方法:将HCCLM3细胞在高糖DMEM培养液(Dulbecco’S modified Eagle medium)和加入了不同剂量(30,300或3 000 kU/L)IFN-α的DMEM培养液中孵育72 h.ELISA法检测IFN-α干预组与对照组(未加入IFN-α)中VEGF, bFGF,MMP-2,MMP-9和IL-8的表达情况. 结果:HCCLM3细胞空白对照组中VEGF,MMP-2, bFGF和IL-8的表达浓度分别为2556±122.6,4400±1000, 28.05±5.1和1 160±69.4 ng/L.同时IFN-α为300 kU/L时, VEGF,MMP-2,bFGF和IL-8的浓度分别为2 476.5±125.7 (P<0.05),2 400±600(P<0.01),25.8±1.6和1 0791±5 ng/L; IFN-α为3 000 kU/L时,VEGF,MMP-2,bFGF和IL- 8的浓度分别为2 289.5+119.5(P<0.01),2 000±500 (P<0.01),25.1±2.9和1 087.9±83.9 ng/L.各组中均未检测到MMP-9的表达. 结论:IFN-α对HCCLM3细胞VEGF和MMP-2蛋白的表达均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.bFGF,IL- 8和MMP-9的表达浓度在IFN-α各剂量组与对照组间无显著性差别.IFN-α对肝癌细胞中VEGF租MMP-2表达水平的下调在其抗肝癌血管形成机制中发挥重要作用.

光谱CT鉴别动脉期高强化肝转移瘤与肝细胞癌的价值

目的探讨双层探测器光谱CT在鉴别动脉期高强化肝转移瘤(APHEHM)和肝细胞癌(HCC)中的价值。方法回顾性收集2021年12月—2023年6月临床或病理确诊的53例动脉期高强化肝脏恶性肿瘤者,将其分为APHEHM组(n=23)和HCC组(n=30),计算光谱参数,包括标准化虚拟单能量图像(VMI)、肿瘤/肝实质的标准化无水碘(NINW-L)、标准化碘密度(NID-L)以及标准化有效原子序数(NZeff-L),并计算肿瘤/腹主动脉的标准化有效原子序数(NZeff-A)。通过受试者工作特征(ROC)曲线和Cohen|d|分析其鉴别效能和临床意义。结果动脉期中APHEHM在以肝实质为对照的40 keV、50 keV、60 keV下的标准化VMI CT值[NCT-L(40keV),NCT-L(50keV),NCT-L(60keV)]、NINW-L、NID-L、NZeff-L以及NZeff-A均小于HCC,差异均具有统计学意义(P<0.05)。动脉期下的NINW-L曲线下面积(AUC)最大,为0.752,以2.985为阈值鉴别两者最佳,敏感度和特异度分别为63.3%、87.0%。结论动脉期下的NCT-L(40keV)、NINW-L和NID-L可作为临床上鉴别APHEHM和HCC的重要指标。

过表达Glypican-3对高转移性肝癌细胞HCCLM3生物学行为的影响

旨在构建s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体,研究过表达s GPC3/GPC3对HCCLM3人高转移性肝癌细胞生物学行为的影响。采用PCR法获得编码s GPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表达载体pc DNA3.0-GFP中,经脂质体介导转染HCCLM3肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测GPC3的表达情况;CCK-8法、克隆平板形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术分别检测s GPC3/GPC3对HCCLM3生物学行为的影响。酶切分析、测序鉴定结果表明s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示s GPC3/GPC3在HCCLM3中成功过表达。与正常组和转染空载体相比,过表达s GPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05),迁移率显著下降,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率增加。同时,过表达s GPC3对细胞的影响显著优于GPC3(P<0.05)。s GPC3/GPC3表达上调抑制高转移性肝癌细胞HCCLM3生长和迁移,促进细胞凋亡以及周期再分布,在高转移性肝癌发生发展过程中起重要作用。

肿瘤外周酸性微环境促进肝癌HCCLM3细胞的转移

目的:探讨肿瘤外周酸性微环境对肝癌HCCLM3细胞转移的影响。方法:将肝癌细胞HCCLM3分别培养在不同pH值(pH7.4、pH7.0和pH6.6)的细胞培养液中,通过细胞体外迁移实验和体外侵袭实验分析HCCLM3细胞在迁移和侵袭能力方面的改变,通过Western印迹、明胶酶谱及原位酶谱法分析HCCLM3细胞在基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)合成、分泌和激活方面的变化。结果:当细胞外周微环境向酸性变化时,HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力均明显增强(P<0.01),虽然细胞内MMP-2的合成未发生明显改变,但细胞分泌的MMP-2及MMP-2的激活均明显增强(P<0.01)。结论:细胞外周酸性微环境可以上调细胞MMP-2的分泌及激活,并促进肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭和迁移能力,提示肿瘤外周酸性微环境对肝癌细胞HCCLM3的转移具有促进作用。

小檗碱干预高糖环境下人肝癌细胞株HCCLM3细胞的作用研究

目的观察小檗碱对高糖环境下人肝癌细胞株HCCLM3细胞增殖的抑制、自噬作用。方法将传至3—4代HCCLM3细胞随机分为空白对照组和低糖组、中糖组、高糖组(各组分别加入含有1000、2000、4000、8000 mg·L^-1的葡萄糖培养液)及小檗碱A组、小檗碱B组、小檗碱C组、二甲双胍(MET)组(高糖组不给予任何干预措施,小檗碱A、B、C 3组分别加入小檗碱含药培养液5、10、20 μmol·L^-1,MET组加入MET含药培养液 10 μmol·L^-1)。CCK-8检测HCCLM3细胞的增殖率、增殖抑制率,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α的水平,实时荧光定量PCR (qPCR)检测HCCLM3细胞NF-κB mRNA、Beclin1 mRNA的表达水平。结果中糖、高糖2组24 h时HCCLM3细胞增殖率均高于空白对照组(均 P <0.05)。小檗碱A、B、C 3组和MET组24、48、72 h时HCCLM3细胞增殖抑制率均高于高糖组(均 P <0.05),小檗碱A、B、C 3组24、48、72 h时HCCLM3细胞增殖抑制率均高于MET组(均 P <0.05)。小檗碱A、B、C 3组和MET组HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α水平及HCCLM3细胞NF-κB mRNA表达水平均低于高糖组(均 P <0.01),小檗碱A、B 2组HCCLM3细胞上清液IL-6、TNF-α水平均高于MET组(均 P <0.05),小檗碱A组HCCLM3细胞NF-κB mRNA表达水平高于MET组、Beclin1 mRNA表达水平低于MET组(均 P <0.01),小檗碱B、C 2组HCCLM3细胞Beclin1 mRNA表达水平均低于MET组、小檗碱C组 HCCLM3细胞上清液TNF-α水平低于MET组( P <0.05或 P <0.01)。结论 BBR对高糖环境下HCCLM3细胞增殖具有抑制作用,它可能是通过调控核因子NF-κB降低IL-6、TNF-α的表达,进而上调Beclin1基因表达水平,促进自噬产生抗肿瘤作用。

大黄酚对肝癌HCCLM3细胞增殖与转移作用研究

目的探讨大黄酚对肝癌HCCLM3细胞增殖与转移的抑制作用及其作用机制.方法采用克隆形成抑制实验和CCK-8实验检测大黄酚对HCCLM3细胞增殖的影响;通过Hoechst染色与Annexin V-FITC/PI检测大黄酚对HCCLM3细胞凋亡的影响;采用JC-1、TMRM染色检测大黄酚对HCCLM3细胞线粒体膜电位的影响;通过划痕实验与Transwell实验分析大黄酚对HCCLM3细胞转移的作用,采用Western blotting检测大黄酚对HCCLM3细胞凋亡相关蛋白PARP、cleaved caspase-3、BAX、Bcl-2及转移相关蛋白N-cadherin、MMP9、MMP2等的影响;采用DHR活性氧检测试剂盒检测大黄酚对HCCLM3细胞活性氧(ROS)产生的影响.结果大黄酚可有效抑制HCCLM3细胞增殖(P<0.05),并具有剂量效应关系;JC-1与TMRM染色结果显示:大黄酚能明显降低HCCLM3细胞线粒体膜电位(P<0.05);划痕实验与Transwell实验结果显示:大黄酚能显著抑制HCCLM3细胞转移(P<0.05);ROS实验发现:大黄酚能显著增加细胞活性氧水平(P<0.05),从而杀伤肿瘤细胞;Westen blotting结果显示:大黄酚可促进PARP、cleaved caspase-3、BAX表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2及转移相关蛋白N-cadherin、MMP9、MMP2表达.结论大黄酚能有效抑制人肝癌细胞增殖和转移,通过线粒体途径导致HCCLM3细胞凋亡.

T细胞因子3(TCF3)在肝癌中高表达并促进肝癌的侵袭和转移

目的探讨T细胞因子3(TCF3)在肝细胞肝癌组织中的表达情况及其与肝癌患者预后的相关性,探索TCF3对肝癌细胞侵袭、迁移和转移能力的影响。方法利用肿瘤公共数据库和免疫组织化学染色方法,检测TCF3在肝癌组织的mRNA和蛋白表达,同时分析TCF3表达与肝癌患者预后的关系。Western blot法检测不同人肝癌细胞系中的TCF3的表达情况,并通过慢病毒感染技术分别构建TCF3上调、下调稳转细胞系,采用Transwell^(TM)实验检测TCF3对肝癌细胞体外侵袭迁移能力的影响,采用裸鼠肝脏原位移植瘤转移实验探究TCF3对肝癌细胞体内转移能力的影响。结果肝癌组织TCF3 mRNA表达显著高于正常肝组织,且TCF3 mRNA的高表达与肝癌患者总体生存率的降低密切相关;在120例肝癌组织中,TCF3蛋白表达水平显著高于癌旁组织,并且TCF3表达阳性患者较阴性患者术后总体生存率显著降低,而术后复发率显著增高;体外Transwell^(TM)实验表明,上调PLC/PRF/5肝癌细胞中TCF3的表达水平能促进其侵袭迁移能力,而下调HCCLM3细胞中TCF3的表达水平则能抑制其侵袭迁移能力;裸鼠肝脏原位移植瘤转移实验表明,上调TCF3能促进PLC/PRF/5细胞的体内转移,下调TCF3则减弱HCCLM3细胞的体内转移能力。结论TCF3在肝癌中的表达显著升高,TCF3的高表达与肝癌患者不良预后密切相关,TCF3能够显著促进肝癌细胞的侵袭、迁移和转移。

重组人血管内皮抑素体外对肝癌HCCLM6细胞转移侵袭的影响

目的研究重组人血管内皮抑素在体外对人肝癌HCCLM6细胞粘附、迁移及侵袭的抑制作用。方法分别以25、50、100、200、400μg/ml的重组人血管内皮抑素在体外处理HCCLM6细胞,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,利用transwell小室及matrigel胶体外检测药物对细胞迁移、侵袭及粘附的影响。结果重组人血管内皮抑素作用HCCLM6细胞72h后对细胞增殖存在一定的抑制作用;重组人血管内皮抑素可明显抑制HCCLM6细胞与matrigel的黏附、对人工基底膜的侵袭力和迁移力,且抑制作用均呈剂量依赖性。结论重组人血管内皮抑素具有直接抑制人肝癌细胞体外侵袭转移和增殖作用,其机制有待进一步探讨。

人参皂甙Rg3在小鼠肝癌淋巴结转移模型中诱导细胞凋亡的作用

目的:观察人参皂甙Rg3对小鼠肝癌淋巴结转移模型中肿瘤细胞凋亡的诱导作用,探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤淋巴结转移的机制。方法:建立小鼠肝癌淋巴结转移模型;光镜和透射电镜下观察各组(Rg3预防组、Rg3治疗组、Rg3与顺铂联合治疗组、顺铂治疗组及对照组)中原发瘤及转移瘤组织的形态学结构改变,并通过流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡。结果:Rg3预防组及治疗组电镜下(5份样品)可见较多细胞凋亡小体的形成(5/5,4/5);顺铂治疗组的形态改变以细胞破坏为主,凋亡的细胞较少;联合治疗组细胞的凋亡和坏死程度相当。流式细胞学检测分析结果为:Rg3预防组、治疗组及联合治疗组均见细胞凋亡的特征峰(5/5),而顺铂治疗组为1/5,对照组未见凋亡峰(0/5)。结论:人参皂甙Rg3抗肿瘤细胞淋巴结转移的作用与诱导细胞凋亡有关。

人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞株侵袭和转移的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用及其相关机制。方法:选择人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞和建株人脐静脉内皮细胞株ECV304作为研究对象,通过细胞抑制实验(MTT法)、细胞粘附试验和免疫组化方法系统地观察人参皂苷Rg3体外对SMMC-7721细胞及ECV304细胞生长的抑制作用、SMMC-7721细胞与纤维粘连蛋白(FN)粘附以及表达nm23、CD44、VEGF基因蛋白的影响。结果:人参皂苷Rg3能够显著地抑制肝癌细胞株SMMC-7721细胞及内皮细胞株ECV304的生长,抑制SMMC-7721细胞与FN粘附及CD44、VEGF的表达,而增强nm23基因的表达。结论:人参皂苷Rg3具有抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用,机制可能与其能够抑制肝癌细胞侵袭活力、调节与肝癌细胞侵袭与转移密切相关的基因表达和抗肿瘤血管形成有关。

骨髓间充质干细胞对高低转移潜能肝癌细胞影响的实验研究

目的观察人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高低转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H和MHCC97-L)侵袭能力和增殖能力的影响。方法 Transwell法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞侵袭能力的影响,下室加入培养基和hMSC,上室加入高低转移潜能肝癌细胞悬液,共培养36 h,酶标仪吸光度(optical density,OD)值检测及细胞计数法观察侵袭能力的变化。CCK-8法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞增殖能力的影响。PCR检测共培养前后转移相关因子骨桥蛋白(OPN)、唾液酸蛋白(BSP)、α-V基因、增殖相关基因TGFβ1和PDCD4的表达差异。结果 (1)侵袭能力检测结果:与对照组比较,镜下观察实验组高低转移潜能肝癌细胞迁移数量明显减少,OD值两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。MHCC97-H与hMSC共培养后OPN、BSP表达明显下降(P<0.05),而α-V表达无明显变化(P>0.05)。MHCC97-L与hMSC共培养后OPN、BSP、α-V表达均显著下降(P<0.05)。(2)增殖能力检测结果:与对照组比较,实验组高低转移潜能肝癌细胞OD值明显增高(P<0.05),实验组TGFβ1基因表达上调(P<0.05),而PDCD4基因表达在两组间差异无统计学意义(P>0.05),在MHCC97-L实验组PDCD4基因表达上调(P<0.05)。结论 hMSC使高低转移潜能肝癌细胞的侵袭能力下调,增殖能力增强。

DAPK1基因转染对高转移性肺癌细胞PGCl_3的影响

背景与目的:死亡相关蛋白激酶DAPK1失活是影响非小细胞肺癌患者生存的独立因子,过表达的DAPK1可以诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移,但抑制转移的机制尚未完全清楚。本文探讨DAPK1基因抑制高转移性肺癌PGCl3细胞生长及转移的可能机制。方法:利用基因重组技术构建含DAPK1基因开放读码框(ORF)的真核表达载体pcDNA3.1-DAPK1,用脂质体LipofectAMINE2000介导转染PGCl3细胞系,检测转染后PGCl3细胞的生长曲线、体外软琼脂克隆形成率、体外侵袭、运动和粘附能力的变化,同时检测了胶原酶活性,p53,bcl-2基因表达的变化。结果:转染DAPK1基因的细胞生长比空白组及pcDNA3.1转染组减缓;体外软琼脂克隆形成率下降P<0.05;pcDNA3.1-DAPK1转染组体外侵袭能力是空白组的68.5%,而pcDNA3.1转染组是空白组的88.0%;pcDNA3.1-DAPK1转染组运动能力是空白组的87.3%,pcDNA3.1转染组是空白组的95.7%;pcDNA3.1-DAPK1转染组粘附能力是空白组的62.7%,pcDNA3.1转染组是空白组的91.2%;各组的胶原酶变化不明显;pcDNA3.1-DAPK1转染组p53基因表达升高,bcl-2基因下调。结论:DAPK1基因的过表达可以在一定程度上逆转PGCl3细胞的恶性表型,使PGCl3细胞生长受抑制,体外侵袭、运动和粘附能力下降,p53基因表达的上调及bcl-2基因表达下调。

土贝母苷甲对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨土贝母苷甲(下称苷甲)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:PGCL3细胞经不同剂量苷甲处理24、48、72h,MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用重组基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Transwell小室趋化运动模型研究苷甲对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测苷甲对PGCL3细胞分泌Ⅳ型胶原酶(MMP-2)能力及活性的影响。结果:苷甲明显抑制PGCL3细胞的生长,且呈剂量依赖关系,作用24、48、72h的IC50分别为15.70、14.20和13.32μmo.lL-1。苷甲1.25、2.50、5.00μmol·L-1处理PGCL3细胞24h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为28.7%、41.0%、57.5%;对PGCL3细胞迁移能力的抑制率分别为21.6%、35.2%、53.7%。苷甲降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且呈一定的剂量依赖关系。结论:苷甲抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其对PGCL3细胞的侵袭和粘附的影响可能与其降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率有关。

MicroRNA-144-3p对肝癌细胞增殖、侵袭转移的影响及其机制

目的探讨microRNA-144-3p(miR144-3p)对Hep G2细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法选取对数生长期的Hep G2细胞,加入不同浓度的miR144-3p(1μM、10μM、20μM)进行处理,同时设置对照组(加入miRNA无关序列)。培养48 h后检测细胞增殖、侵袭、凋亡情况,并进行肝癌衍生生长因子(HDGF)的表达检测。结果 miR144-3p处理48 h后,miR144-3p能够呈剂量依赖性地抑制细胞增殖,能够呈剂量依赖性地增加细胞凋亡指数,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。miR144-3p在1~20μM浓度范围能显著抑制Hep G2细胞的穿透能力,呈剂量依赖关系(P<0.05)。miR144-3p能够呈剂量依赖性抑制HDGF的mRNA与蛋白表达水平,其表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 miR144-3p能抑制肝癌Hep G2细胞的增殖、侵袭与转移,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制HDGF基因与蛋白表达有关。

OPN转染BMSCs对高转移潜能肝癌细胞的影响

目的观察经骨桥蛋白(osteopontin,OPN)转染人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对高转移潜能肝癌细胞(high metastatic potential hepatocellular carcinoma cells,MHCC97-H)增殖、侵袭能力的影响。方法构建OPN慢病毒载体,转染BMSCs。CCK-8法检测与BMSCs共培养前后MHCC97-H的增殖能力,共培养48 h,检测OD值。Transwell法检测BMSCs与MHCC97-H细胞共培养后细胞侵袭情况,共培养48 h,结晶紫染色,细胞计数。PCR法检测共培养前后MHCC97-H转移相关因子OPN、αV、β3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达。结果 BMSCs基因转染成功,OPN高表达。MHCC97-H与BMSCs细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经OPN转染的BMSCs细胞对MHCC97-H细胞增殖无明显作用(P>0.05)。经OPN转染的BMSCs细胞对MHCC97-H细胞侵袭具有明显的促进作用(P<0.05)。经OPN转染的MHCC97-H细胞OPN表达明显降低,而αv、β3、MMP-2表达明显升高(P<0.01)。结论 BMSCs具有促进MHCC97-H细胞增殖的作用,OPN基因转染的BMSCs细胞具有促进MHCC97-H细胞侵袭的作用。外源性OPN抑制内源性OPN表达,外源性OPN通过激活MMP-2活性促进肿瘤侵袭。

土贝母皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞侵袭行为的影响

目的:土贝母[Bolbostemma paniculatum(Max-im.)Franquet]是一种传统中药。我们以前的研究结果已证实从土贝母块茎中分离得到的土贝母皂苷(下称皂苷)有强抗肿瘤效果和诱导肿瘤细胞调亡作用。本研究旨在探讨皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用粘附相关基底膜成分分析试验、重组基底膜侵袭试验、Transwell室趋化运动模型研究皂苷对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测皂苷对Ⅳ型胶原酶分泌及活性的影响。结果:皂苷明显抑制PGCL3细胞的生长,且其效果呈剂量依赖关系。皂苷作用PGCL3细胞24、48、72 h的IC50值分别为16.77、14.62、14.46μmol.L-1。皂苷1.25、2.50、5.00μmol.L-1处理PGCL3细胞24 h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为20.6%、30.6%、46.8%,对PGCL3细胞运动能力的抑制率分别为14.2%、24.7%、42.5%。皂苷降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及Ⅳ型胶原酶活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且其效果呈一定的剂量依赖关系。结论:皂苷抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力;皂苷对PGCL3细胞粘附和侵袭的影响与其降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及其活性有关。

人参皂苷Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用

背景与目的:人参皂苷(Rg3)有抑制肿瘤细胞生长的作用,顺铂为诱导肿瘤凋亡的化疗药物,中西医结合治疗肿瘤日益受到重视。本研究探讨Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用。方法:采用我院自建的高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM进行实验研究。实验分成6组:①空白对照组:只加新鲜的全培养液;②Rg3低浓度组:10μg/mlRg3培养液;③Rg3中浓度组:20μg/mlRg3培养液;④Rg3高浓度组:40μg/mlRg3培养液;⑤顺铂单药对照组:含10μg/ml顺铂的培养液;⑥顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组:含10μg/ml顺铂+20μg/mlRg3培养液。分别观察各组对细胞核分裂指数、细胞集落形成率的影响。结果:随着Rg3浓度增高及Rg3和DDP的联合应用细胞核分裂指数下降,以联合用药组下降最明显(F=5.498,P=0.011)。空白对照组和Rg3高浓度组,顺铂单药组及顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有非常显著性(P=0.011,0.007和0.001);Rg3低、中浓度组分别与顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有显著性(P=0.010和0.015)。细胞集落形成率随着Rg3浓度增高而下降(F=100.69,P=0.000),高浓度的Rg3、DDP和联合用药组三者结果相近(P=0.887)。Rg3高浓度组、顺铂单药组合顺铂+Rg3(中浓度)组与空白对照组、Rg3低浓度组和Rg3中浓度组相比,及Rg3高浓度组与其他各组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论:Rg3对高转移人卵巢癌细胞有一定的杀伤作用,能有效抑制细胞核分裂、细胞集落形成,但未发现Rg3和顺铂联合用药会相加或协同作用。

肝癌高低转移细胞株差异表达基因的初步研究

目的 :肝癌高低转移细胞株的基因表达谱的比较。方法 :应用cDNAmicroarray技术 ,对肝癌高低转移细胞株的基因表达谱进行比较 ,并应用RT PCR对部分差异表达的基因进行了验证。结果 :肝癌高转移细胞株与低转移细胞株相比 ,有 384个基因存在差异表达 ,其中 1 2个是位于染色体 8p上。选取 4个基因用RT PCR验证 ,结果与cDNAmicroarray结论基本一致。 结论 :肝癌高低转移细胞株基因表达存在明显差别。染色体