Ad-GFP-nm23-H1体内外抑制人高转移肺巨细胞癌株95D生长和转移作用的研究

目的观察Ad-GFP-nm23-Hl抑制人高转移肺巨细胞癌株95D细胞生长和转移的作用,为后期nm23-Hl基因和腺病毒载体用于95D及其他肿瘤的基因治疗提供一定的理论和方法。方法应用MTT法及Transwell小室法分别检测95D细胞经Ad-GFP-nm23-Hl作用后的细胞体外增殖活性、黏附能力以及侵袭力的变化。同时应用人高转移肺巨细胞癌株95D裸鼠移植瘤模型,研究Ad-GFP-nm23-Hl对此移植瘤生长的抑制作用。结果108PFU/ml、109PFU/ml、1010PFU/ml处理组,可以明显抑制95D细胞的增殖、黏附和侵袭能力,其抑制作用呈剂量-效应关系。109PFU/ml的Ad-GFP-nm23-Hl对移植瘤的抑瘤率为38.23%,较对照组差异显著。结论Ad-GFP-nm23-Hl对人高转移肺巨细胞癌株95D细胞的生长和转移以及95D实体瘤具有抑制作用。

人肺巨细胞癌高和低转移株中相关转录因子分析

目的 :为了阐明人肺巨细胞癌高转移株 (95D)细胞高表达uPA、低转移株 (95C)细胞低表达uPA的原因 ,分析两株细胞中有关的转录因子的差异。方法 :uPA基因启动子不同片段与Luciferase报告基因的融合基因真核表达质粒分别平行转染 95C、95D细胞 ,比较活性 ;用EMSA分析 95D、95C细胞中与寡核苷酸探针特异结合的转录因子差异 ;用RT PCR分析两株细胞中相应转录因子mRNA相对表达水平。结果 :三个不同长度的uPA基因启动子在 95D细胞中的活性均相应高于 95C细胞中的活性 ,分别是 95C细胞的 1 32、1 6 6和 1 6 1倍 ,EMSA表明95D细胞中与AP1、AP2、NFκB及SP1探针结合的转录因子量均高于 95C细胞中 ;RT PCR表明AP2、NKκB及SP1转录因子mRNA表达水平分别是 95C细胞的 1 5 7、1 77和 1 2 8倍。结论 :转录因子AP1、AP2、NKκB及SP1在95D细胞中含量高于 95C细胞可能是uPA在 95D与 95C细胞中表达差别的原因之一。

肺巨细胞癌高低转移株差异表达基因的鉴定

目的从两株同源但转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定差异表达基因。方法应用抑制消减杂交(SSH)技术,对来源相同、转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株PLA801C和PLA801D进行了两次实验。第1次SSH实验以PLA801C株为实验方,第2次实验以PLA801D株为实验方。将获得差异表达的片段点在氨基化的玻片上做成基因芯片,利用荧光标记的探针与芯片杂交,选取差异表达克隆,并利用RNA狭缝杂交或Northern杂交对若干片段进行验证。结果在低转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有16条;在高转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有79条。测序后经过同源性分析,大部分序列均与已知序列高度同源,主要编码以下几类蛋白(1)细胞因子及其受体相关蛋白;(2)激酶及其相关蛋白;(3)其他蛋白,包括酶类、热休克蛋白、受体蛋白、细胞骨架蛋白、线粒体蛋白和癌基因编码产物等;(4)一些未知功能的蛋白或是从核酸序列推出来的假想蛋白。结论HSP70、AXL受体酪氨酸激酶和1433ζ等多种已知基因表达情况的改变,可能影响肺癌的转移过程,此外还发现了一些可能的肿瘤转移相关新基因。