人高迁移率族蛋白1基因的克隆和表达

目的 :克隆人高迁移率族蛋白 1(HMG 1)编码基因 ,构建重组表达载体并对其诱导表达 .方法 :通过RT PCR方法扩增出人外周血单个核细胞中HMG 1的编码基因 ,克隆于载体pGEM Teasy,测序分析后亚克隆于表达载体 pGEX 4T 2 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导 4h后可表达Mr 约 5 6 0 0 0的融合蛋白GST HMG1.结果 :克隆了人HMG 1的编码基因 ,构建了融合蛋白的重组表达质粒 pGEX HMG1,表达的融合蛋白产物经凝胶薄层扫描检测 ,占全菌总蛋白的 0 .2 3.结论 :获得了人HMG 1编码基因及其原核表达产物 ,对研究人HMG

丝裂原活化的蛋白激酶在高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放炎性细胞因子中的作用

目的研究重组人高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导内皮细胞释放趋化因子白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的规律及其与脂多糖(LPS)的协同作用;探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在上述作用中的地位。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测不同浓度重组HMGB1(0~75ng/ml),或者HMGB1(15ng/ml)刺激后不同时间点人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌IL-8、MCP-1的水平变化以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激后IL-8、MCP-1的水平变化;探讨MAPK信号通路在HMGB1诱导内皮细胞释放趋化因子中的作用时首先加入抑制剂SB203580(20mol/L)、PD98059(20mol/L)和JNKinhibitorII(50nmol/L)预处理细胞1h,再加入HMGB1和LPS刺激。结果在HMGB1蛋白刺激后3~6h,IL-8和MCP-1水平开始增加,12~24h持续增高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-8和MCP-1水平也明显升高,与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01)。如果用LPS(10ng/ml)和...

解毒祛瘀法干预脓毒症热毒炽盛证的疗效及对人高迁移率族蛋白1影响的研究

目的观察解毒祛瘀法干预脓毒症热毒炽盛证的疗效以及对人高迁移率族蛋白1(HMGB1)的影响。方法将90例脓毒症热毒炽盛证患者随机分为治疗组45例、对照组45例。治疗组在西医综合治疗的基础上加用解毒祛瘀中药,对照组在西医综合治疗的基础上加用中药安慰剂。比较2组临床疗效,发热、呼吸道症状及消化道症状积分,血清HMGB1值。结果治疗组45例中,临床控制11例(24.4%),显效12例(26.7%),有效18例(40.0%),无效4例(8.9%),总有效率为91.1%;对照组45例中,临床控制4例(8.9%),显效12例(26.7%),有效20例(44.4%),无效9例(20.0%),总有效率80.0%。经秩和检验,Z=-2.232,P=0.026,P<0.05,说明治疗组疗效优于对照组。2组治疗前后症状积分重复测量方差分析结果显示,便秘的组别和观察时间的交互作用有统计学意义(P<0.05),其余症状的交互作用均没有统计学意义(P>0.05)。2组组间比较显示:治疗组咳嗽、喘息、腹胀、便秘积分均较对照组下降,差异有统计学意义。血清HMGB1治疗后治疗组较本组治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论解毒祛瘀法可以提高脓毒症热毒炽盛证患者的疗效,改善发热、咳嗽、喘息、腹胀和便秘等症状,其机制可能与解毒祛瘀法降低脓毒症患者血清HMGB1水平有关。

人高迁移率族蛋白B1在风湿免疫性疾病中的研究进展

人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是细胞核内典型的非组蛋白。HMGB1在细胞和组织中分布十分广泛,受到炎症刺激后能从坏死或损伤细胞被动释放,并可诱导树突状细胞上调其成熟的表面抗原。本文详细介绍了HMGB1的结构、功能特点及HMGB1在系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、肌炎、系统性硬化症、干燥综合征等风湿免疫性疾病中的表达情况。随着对HMGB1研究的不断深入,HMGB1在风湿性疾病诊断、治疗等中的潜力将进一步得到发展。

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的 观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法 用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。

人高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体和C反应蛋白与脑外伤术后肺部感染严重程度的相关性及对预后的评估价值

目的探讨人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、C反应蛋白(CRP)与脑外伤术后肺部感染严重程度的相关性及对预后的评估价值。方法前瞻性选取2016年5月至2018年5月于长治医学院附属和平医院接受治疗的182例脑外伤术后肺部感染者,根据肺部感染CURB-65评分系统标准将患者分为轻度组(74例)、中度组(60例)和重度组(48例),并根据术后30 d临床结局分为生存组(151例)和死亡组(31例)。比较不同感染程度患者血清HMGB-1、RAGE、CRP水平并分析与肺部感染严重程度的相关性。通过Logistic回归分析明确影响患者死亡的危险因素,以受试者工作特征曲线(ROC)评价HMGB-1、RAGE和CRP对脑外伤术后肺部感染者死亡的预测价值。结果重度组患者HMGB-1水平为(10.22±2.35)μg/L,分别高于中、轻度组[(3.89±1.01)μg/L和(2.00±0.40)μg/L],差异有统计学意义(t=18.821、29.502,P均<0.001);重度组患者RAGE水平为(9.01±2.05)ng/L,分别高于中、轻度组患者[(5.89±1.20)ng/L和(2.12±0.22)ng/L],差异有统计学意义(t=9.870、28.722,P均<0.001);重度组患者CRP水平为(50.33±10.32)mg/L,分别高于中、轻度组患者[(32.33±8.52)mg/L和(15.20±3.52)mg/L],差异有统计学意义(t=9.930、27.010,P均<0.001)。中度组患者血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均高于轻度组(t=14.744、26.504、15.729,P均<0.001);血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均与肺部感染CURB-65评分呈正相关(r=0.696、0.763、0.851,P均<0.001)。182例患者的病死率为17.03%(31/182)。死亡组患者呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症占比均显著高于生存组,年龄、HMGB-1、RAGE、CRP、降钙素原(PCT)水平均高于生存组(P均<0.05)。Logistic回归分析年龄、呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症、HMGB-1、RAGE、CRP和PCT均为导致患者死亡的危险因素(OR=2.016、2.423、2.252、1.853、2.606、2.199、1.919、1.904,P均<0.05)。ROC曲线分析显示血清HMGB-1、RAGE和CRP预测脑外伤术后肺部感染者死亡的敏感性分别为78.02%、82.42%和85.16%,特异度分别为56.04%、69.78%和71.98%,曲线下面积(AUC)分别为0.756、0.801和0.882。结论血清HMGB-1、RAGE和CRP水平与脑外伤术后肺部感染严重程度呈正相关,且均为导致患者死亡的危险因素,对于预测患者的死亡有较高的临床价值。

猪肺磷脂注射液联合经鼻间歇正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征的临床疗效及其对血清人高迁移率族蛋白B1、重组人巨噬细胞移动抑制因子水平的影响

目的 分析猪肺磷脂注射液联合经鼻间歇正压通气(NIPPV)治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的临床疗效及其对血清人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、重组人巨噬细胞移动抑制因子(MIF1)水平的影响。方法 选取2015年7月—2018年8月山东省立第三医院第二新生儿病房收治的NRDS患儿80例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组40例。两组患儿均给予常规治疗及NIPPV,观察组患儿同时给予猪肺磷脂注射液;两组患儿均连续治疗2周。比较两组患儿临床疗效,辅助通气时间及氧疗时间,治疗前后动脉血气分析指标〔包括动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、动脉血氧饱和度(SaO2)〕及血清HMGB1、MIF1水平,并观察两组患儿治疗期间不良反应发生情况。结果 (1)观察组患儿临床疗效优于对照组(P<0.05)。(2)观察组患儿辅助通气时间、氧疗时间短于对照组(P<0.05)。(3)治疗前两组患儿PaO2、PaCO2、SaO2比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患儿PaO2、SaO2高于对照组,PaCO2低于对照组(P<0.05)。(4)治疗前两组患儿血清HMGB1、MIF1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患儿血清HMGB1、MIF1水平低于对照组(P<0.05)。(5)两组患儿治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 猪肺磷脂注射液联合NIPPV治疗NRDS的临床疗效确切,可有效改善患儿动脉血气指标及通气状况,降低血清HMGB1、MIF1水平,有利于减轻患儿炎性反应及肺组织损伤程度,且安全性较高。

雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林对胃溃疡患者ET-1、HMGB1、MMP-9、ERK1/2、PGE_(2)水平的影响

目的探讨雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林对胃溃疡患者内皮素-1(ET-1)、人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、前列腺素E2(PGE_(2))水平的影响。方法选择2018年12月至2021年3月我院收治的76例胃溃疡患者作为研究对象,采用随机数字表法将其分为A组和B组,各38例。A组接受奥美拉唑+克拉霉素+甲硝唑治疗,B组接受雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林治疗。比较两组的临床病情控制效果、ET-1、HMGB1、MMP-9、ERK1/2、PGE_(2)水平及胃肠道症状评定量表(GSRS)、胃黏膜损伤改良Lanza评分。结果B组的临床病情控制总有效率高于A组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的ET-1、HMGB1、MMP-9、ERK1/2、PGE_(2)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗14 d后,B组的ET-1、HMGB1、MMP-9水平低于A组,ERK1/2、PGE_(2)水平高于A组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的GSRS、Lanza评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗14 d后,B组的GSRS、Lanza评分低于A组(P<0.05)。结论雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林治疗胃溃疡患者能够取得更佳的效果,有效改善ET-1、HMGB1、MMP-9、ERK1/2、PGE_(2)水平,控制胃肠道症状,修复消化道黏膜损伤。

人HMGB1酸性尾端对其抗菌活性的影响

为研究人高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1,HMGB1)酸性尾端对其抗菌活性的影响,提取人外周血单个核细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到编码人HMGB1的cDNA及其缺失酸性尾端的突变体cDNA(mcDNA),原核表达载体pQE-80L分别表达重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及缺失酸性尾端的突变体蛋白(mrhHMGB1),经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化两种蛋白.通过试管稀释法、琼脂扩散法两种体外抗菌实验观察,并比较rhHMGB1及mrhHMGB1抗菌活性的差异.实验结果显示,rhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为JM109>ATCC25922>DH5α,而mrhHMGB1对大肠杆菌JM109、ATCC25922、DH5α则均无抗菌活性.实验结果表明,人HMGB1的酸性尾端对其抗菌活性的发挥至关重要,此研究为进一步探讨人HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.

连续性血液净化治疗脓毒症的效果观察

目的观察连续性血液净化(CBP)对脓毒症患者的临床效果。方法随机选择我院收治的25例脓毒症患者为对照组(常规治疗),另外选择25例脓毒症患者为观察组(在常规治疗基础上加CBP治疗)。对比两组患者的机械通气时间、APACHEⅡ评分、人高迁移率族蛋白-1(HMG-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果观察组机械通气时间明显短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后APACHEⅡ评分、HMG-1、TNF-α水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CBP可以缩短脓毒症患者机械通气时间,降低APACHEⅡ评分,HMG-1及TNF-α的水平,值得临床上推广应用。

清肾方联合西药治疗活动期狼疮性肾炎的研究

目的观察清肾方联合西药治疗活动期狼疮性肾炎的临床疗效。方法将60例活动期狼疮性肾炎患者随机分为2组,对照组30例采用波尼松+环磷酰胺治疗,治疗组在对照组治疗基础上给予清肾方加减治疗。观察2组临床疗效,比较治疗前后SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分、中医证候积分量化表(SLEFI)评分及实验室检查指标[血沉、24 h尿蛋白、血清白蛋白(ALB)、尿红细胞、补体C3、补体C4、血清Ig G、C反应蛋白(CRP)、人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素(IL)-17及抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(ds-DNA)阳性率]的差异。结果治疗组临床总有效率明显高于对照组(P<0.05)。治疗后2组SLEDAI积分、SLEFI评分及实验室各检查指标均较治疗前明显改善(P均<0.05),且除尿红细胞、ANA及ds-DNA阳性率外其余指标治疗组改善情况均明显优于对照组(P均<0.05)。治疗组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论清肾方联合西药治疗活动期狼疮性肾炎能明显改善患者临床症状及相关实验室指标,提高临床疗效,且安全性好。

COPD患者NLRP3炎症小体及TNF-α、HMGB1的表达及相互关系

目的分析核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路,早期炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α),人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者中的表达及相关性。方法选择2017年9月至2019年2月我院呼吸内科收治的AECOPD患者48例为观察组,健康者30例为对照组,采用实时荧光定量PCR技术检测NLRP3炎症小体组分NLRP3、ASC、Caspase1及其活化因子IL-1β、IL-18的mRNA表达,采用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18、TNF-α、HMGB1。结果观察组NLRP3mRNA、IL-18mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);观察组血清中IL-1β、IL-18、TNF-α、HMGB1含量高于对照组(P<0.05);观察组NLRP3mRNA表达与IL-18mRNA表达呈负相关(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β、HMGB1之间表达呈正相关(P<0.05);病程>10年患者Caspase1 mRNA、血清IL-18和TNF-α的水平高于病程≤10年患者(P<0.05);Caspase1 mRNA与病程不相关(P>0.05),血清中IL-18及TNF-α与病程正相关(P<0.05),确诊年龄,移动度(右)与病程负相关(P<0.05);病程、移动度对Caspase1 mRNA不相关(P>0.05);移动度对血清IL-18和TNF-α不相关(P>0.05),病程与血清IL-18和TNF-α呈正相关(P<0.01)。结论NLRP3炎症小体相关指标、TNF-α及HMGB1参与AECOPD的炎症过程。血清中IL-1β、TNF-α和HMGB1可作为AECOPD的临床炎症诊断指标。病程越长,AECOPD体内Caspase1 mRNA、血清中TNF-α、IL-18含量越高,提示感染性炎症越明显。