土槿乙酸对人黑素瘤细胞增殖抑制作用研究

目的 研究土槿乙酸 (PAB)对人黑素瘤细胞 (L i Br)生长的抑制效应 ,并探讨其作用机制。方法 用不同浓度的 PAB加入体外培养 L i Br细胞中 ,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化 ;用 MTT法检测 PAB的细胞毒作用 ;用 Hoechest33342和 PI双荧光染色法检测细胞凋亡。用免疫细胞化学方法 ,观察 L i Br细胞基因表达的变化。结果 PAB明显抑制 L i Br细胞生长 ;IC50 值为 2 .5× 10 - 5mol/ L;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系 ;凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关。免疫细胞化学检测显示 p2 1WAF1 表达增强。结论 PAB能有效抑制L i Br细胞的增殖。

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响。结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用。结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一。

驱虫斑鸠菊对人黑素瘤细胞增殖酪氨酸酶及黑素生成影响的研究

探讨驱虫斑鸠菊对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶的作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定药物对细胞增殖的影响;采用酶学方法研究药物对酪氨酸酶活性的影响;475nm比色法测定黑素含量。结果表明驱虫斑鸠菊可以增强A375人黑素瘤细胞增殖,提高酪氨酸酶和黑色素合成能力。说明驱虫斑鸠菊治疗白癜风是通过增强酪氨酸酶活性及促进黑素合成而发挥作用的。

苦参碱对人黑素瘤细胞系增殖抑制的体外研究

目的 :研究苦参碱 ( Matrine,Mat)对人黑素瘤细胞系生长的抑制效应 ,并探讨其作用机制。方法 :用不同浓度的 Mat加入体外培养人黑素瘤 ( L i Br)细胞中 ,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化 ;用 MTT法检测 Mat的细胞毒作用 ;用 Hoechest3 3 3 42和 PI双荧光染色法检测细胞凋亡比率。结果 :Mat明显抑制 L i Br细胞生长 ;IC50 值为 0 .8mg/ ml;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系 ;凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关。结论 :Mat能有效抑制 L i

芍药苷对人黑素瘤细胞株A375增殖凋亡的影响

目的:研究不同浓度芍药苷(PF)对人黑素瘤细胞A375增殖抑制及早期凋亡的影响。方法:将体外培养的人黑素瘤细胞株A375分为6组,5个实验组分别加入不同浓度PF(2、1、0.5、0.1、0.01 mg/mL),对照组不加PF。光镜下观察细胞密度及形态、MTT法测定细胞增殖抑制率,Annexin V/PI染色法检测细胞早期凋亡率。结果:镜下观察可见随着PF浓度的增加,黑素瘤细胞株A375数量降低,贴壁能力渐差,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩。与对照组相比,不同浓度PF处理A375细胞24 h、48 h和72 h后,PF对细胞有浓度依赖性的增殖抑制作用(P<0.05),但未见明显的时间依赖性(P>0.05)。不同浓度PF干预24 h时A375细胞的早期凋亡率,对照组和各实验组差异无统计学意义(P<0.05)。结论:PF能抑制人黑素瘤细胞株A375的增殖,这种抑制作用呈浓度依赖性而非时间依赖性,但对A375细胞早期凋亡率无明显影响。

驱虫斑鸠菊对人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及其基因表达水平的调节作用研究

目的:探讨驱虫斑鸠菊对人 A375黑素瘤细胞株分泌酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞内酪氨酸酶基因表达水平的影响。方法:采用酶学方法研究驱虫斑鸠菊对酪氨酸酶活性的影响;采用475 nm 比色法测定黑素含量;采用 TRIzol 试剂盒提取总 RNA,再用半定量逆转录聚合酶链反应扩增 cDNA,检测酪氨酸酶基因表达水平。结果:驱虫斑鸠菊可以增强 A375人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑色素合成能力,还可增强酪氨酸酶基因表达。结论:驱虫斑鸠菊可能从基因水平增强酪氨酸酶活性,促进黑素合成。

肿瘤特异性凋亡基因对人黑素瘤细胞凋亡诱导作用的机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin gene)在诱导人黑素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、蛋白印迹法(western blot)、锥虫蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间对人黑素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明,apoptin基因瞬间转染的人黑素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:JNK信号通路的活化可能在apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因(apoptin gene)诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化caspase-3 发挥作用,用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性。结果表明,apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组(P<0.01);转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于其它各组(P< 0.01)。结论:apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。

依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导人黑素瘤细胞自噬

目的:研究依巴斯汀对人黑素瘤细胞自噬的影响及机制。方法:体外培养人黑素瘤细胞A375和M14,采用CCK-8增殖实验检测细胞活力,并计算IC50;利用mCherry-EGFP-LC3B双荧光指示系统检测自噬流;采用Western blot验证自噬相关蛋白LC3,Beclin1及信号通路蛋白的表达。结果:依巴斯汀可显著抑制人黑素瘤细胞的活力;依巴斯汀明显诱导人黑素瘤细胞中自噬小体和自噬溶酶体的产生;依巴斯汀显著上调人黑素瘤细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值以及Beclin1的表达,同时抑制AKT/mTOR信号通路的活化,降低p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR。结论:依巴斯汀通过抑制AKT/mTOR通路诱导人黑素瘤细胞自噬的发生。

丹参酮ⅡA诱导人黑素瘤细胞A375自噬的小鼠模型研究

目的探讨丹参酮ⅡA是否通过诱导自噬的作用机制抑制人黑素瘤细胞A375的增殖。方法将人黑素瘤细胞A375制备的模型小鼠24只随机分为对照组、紫杉醇组(尾静脉注射,8mg/kg,隔天1次,持续28天)和丹参酮ⅡA低、高剂量组(25mg、50mg 1次/d,持续28天),每组6只。实验结束后,随即处死小鼠,手术剥取瘤块称重。采用RT-PCR测定小鼠瘤组织中自噬相关基因Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-ⅡmRNA水平;Western印迹法检测Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达水平。结果丹参酮ⅡA可显著降低人黑素瘤细胞A375制备的模型小鼠肿瘤质量系数,抑瘤率达56.70%;可显著上调瘤组织中自噬相关基因Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及其蛋白的表达,较模型组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA通过诱导人黑素瘤细胞A375的自噬机制,从而抑制其增殖,延缓肿瘤生长。

补骨脂注射液联合NB-UVB对人黑素瘤A375细胞增殖及黑素合成的影响

目的通过观察补骨脂注射液联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)对人黑素瘤A375细胞的增殖、黑素的合成以及酪氨酸酶活性的影响,探讨两者协同治疗白癜风的可能机制。方法选择一定浓度的补骨脂注射液(稀释后浓度为0.5%)联合一定剂量的NB-UVB(22m J/cm2)共同作用于人黑素瘤A375细胞后,通过MTT法观察其对人黑素瘤A375细胞细胞增殖的影响,Na OH裂解法测定黑素的含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性的变化。结果补骨脂注射液+NB-UVB组中A375细胞培养至48h,72h后检测到的细胞增殖情况与单一补骨脂注射液组、NB-UVB组及空白组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。补骨脂注射液+NB-UVB组均显示可上调细胞内酪氨酸酶的活性及黑素的生成量,且与各实验干预组及空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的补骨脂注射液(稀释后浓度为0.5%)联合一定剂量的NB-UVB(22m J/cm2)可以协同促进人黑素瘤A375细胞的增殖,上调细胞酪氨酸酶活性,从而达到促进黑素合成的效果。

蒺藜皂苷对人黑素瘤A375细胞增值、粘附及黑素合成的作用

目的观察不同浓度的蒺藜皂苷对人黑素瘤A375细胞增值、粘附及黑素合成的作用.方法：选取人黑素瘤A375细胞为细胞模型,并以蒺藜皂苷进行干预,采用CCK-8法测定细胞活力,粘附实验测定细胞粘附力,氢氧化钠法测黑素含量,流式细胞术测ICAM-1含量.结果：不同浓度的蒺藜皂苷处理后,其细胞活力、细胞粘附力、黑素含量均有所增加,ICAM-1含量降低,其中以100、200 ug/mL效果好.结论：蒺藜皂苷能够促进人黑素瘤A375细胞增值、粘附及黑素合成,从而对白癜风患者发挥一定的治疗作用.

紫铆花素对人黑素瘤细胞A375生物活性及线粒体膜电位的影响

目的观察紫铆花素对人黑素瘤细胞A375细胞增殖、细胞周期、酪氨酸酶活性、黑素合成及线粒体膜电位的影响。方法用不同浓度紫铆花素处理人黑素瘤细胞A375 48h后,采用MTT法测定黑素细胞增殖率;流式细胞仪测定黑素细胞周期和线粒体膜电位变化;L-DOPA法测定黑素细胞酪氨酸酶活性及Na OH裂解法测定黑素含量变化。结果与对照组相比,0.1~5.0μg/m L浓度范围紫铆花素与人黑素瘤细胞A375共孵育48h后,能明显促进人黑素瘤细胞A375增殖,具有不同程度提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成及调节细胞周期和线粒体膜电位的作用。结论紫铆花素对体外培养的人黑素瘤细胞A375起促进细胞增殖、提高酪氨酸酶活性、增加黑素合成的作用,其作用可能与紫铆花素对细胞周期和线粒体膜电位的调节有关。

Celecoxib抑制人黑素瘤A375细胞增殖及对Cox-2/MMP-1蛋白表达的影响

目的研究Celecoxib(塞来考昔)对人黑素瘤A375细胞增殖抑制、凋亡诱导和周期阻滞作用及对A375细胞表达Cox-2和分泌型MMP-1蛋白的影响。方法MTT法测定Celecoxib对A375细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡及周期阻滞作用;细胞爬片SABC免疫细胞化学检测Celecoxib对A375细胞Cox-2蛋白表达的影响,ELISA法分析Celecoxib对A375细胞分泌型MMP-1蛋白表达的影响。结果80μmol/L的Celecoxib明显抑制人黑素瘤A375细胞增殖,并诱导凋亡(凋亡率35.91%)和G2/M期阻滞,减少A375细胞表达Cox-2蛋白和分泌型MMP-1蛋白。结论人黑素瘤A375细胞表达Cox-2蛋白和MMP-1蛋白,Celecoxib是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。

维A酸CD437和阿维A抑制人黑素瘤A375细胞的比较

目的探讨合成的维A酸CD437与阿维A对体外培养的人黑素瘤A375细胞的增殖抑制、凋亡诱导、周期阻滞作用及对Bax/bcl-2蛋白表达的影响。方法MTT法测定CD437及阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测两种药物诱导细胞凋亡及周期阻滞;细胞爬片SABC免疫细胞化学分析两种药物对细胞Bax/bcl-2蛋白表达的影响。结果干预24h后,10-5mol/L维A酸CD437和阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制率(PIR)和凋亡率分别为58.6%和43.25%,28.03%和17.13%(P<0.05),CD437促A375细胞G0/G1期阻滞,而阿维A无此作用;两药均上调A375细胞Bax蛋白表达和下调bcl-2蛋白表达,但CD437组与阿维A组差异无显著性。结论与阿维A相比较,CD437更有效抑制人黑素瘤A375细胞的增殖及更明显的凋亡诱导和G0/G1期阻滞作用;在辅助治疗黑素瘤方面,CD437比阿维A可能更具潜力。

BCR-ABL1抑制剂与MEK抑制剂联用治疗耐药性慢性粒细胞白血病

抑制引起慢性粒细胞白血病（CML）的致癌激酶BCR-ABL1是临床上靶向治疗的成功典范,但在临床治疗中却频繁出现耐药性突变。一项新的研究表明,抑制耐药性BCR-ABL1突变可能会适得其反地将致癌信号激活,提出了克服耐药的协同战略。研究人员对几种蛋白抑制剂对表达致癌基因NRASQ61L的人黑素瘤细胞的影响进行了研究,结果发现，BCR—ABLl抑制剂伊马替尼、尼洛替尼和达沙替尼反而高度激活RAF．MEK．ERK激酶通路的致癌信号。这也发生于KRAS突变激活的细胞中。

鼠尾草酸通过减少β-catenin表达抑制人黑素瘤A375细胞增殖

目的研究鼠尾草酸(CA)对人黑素瘤A375细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制,为寻找新的黑素瘤临床治疗药物奠定一定的理论基础。方法 A375细胞传代培养后分为正常组、10μmol/L CA组(10μmol/L CA处理24h)、20μmol/L CA组、50μmol/L CA组,FH535 (β-catenin抑制剂)组(20μmol/L FH535处理24h)。MTT法检测细胞抑制情况;平板细胞克隆形成实验检测克隆形成情况;流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡变化; RT-PCR法检测A375细胞中β-catenin、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、淋巴增强因子1(LEF1)、原癌基因(C-myc) mRNA的表达; Western blot检测A375细胞中β-catenin、CyclinD1、LEF1、C-myc蛋白表达。结果与正常组相比,CA各组、FH535组细胞抑制率增加,CA各组呈时间、剂量依赖性增加(P <0. 05); CA各组、FH535组克隆形成数量均降低,CA各组克隆形成数量呈剂量依赖性降低(P <0. 05)。流式细胞仪检测显示与正常组相比,CA各组、FH535组G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,CA各组G1期细胞比例呈剂量依赖性升高,S期细胞比例呈剂量依赖性降低(P <0. 05); CA各组、FH535组细胞凋亡率升高,CA各组凋亡率呈剂量依赖性升高(P <0. 05)。与正常组相比,CA各组、FH535组β-catenin、CyclinD1、LEF1、C-myc mRNA、蛋白表达降低,CA各组呈剂量依赖性降低(P <0. 05)。结论 CA可能通过抑制β-catenin的表达,引起细胞周期G1期阻滞,进而抑制人黑素瘤A375细胞增殖。

高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成及TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达的影响

目的探讨不同质量分数高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成以及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸相关蛋白-2(TRP-2)mRNA的影响。方法选取人黑素瘤A375细胞,随机分为空白对照组、阳性对照组、90%高良姜素组和99%高良姜素组,其中阳性对照组、90%高良姜素组和99%高良姜素组各分为1.0,5.0和10.0 mmol/L组,每组给予相应浓度的含8-甲氧基补骨脂素、90%高良姜素和99%高良姜素的培养液,对照组给予等体积的培养液,采用MTT法测定细胞增殖情况,Na OH裂解法检测黑素合成情况,RT-PCR检测细胞TYR mRNA等表达情况。结果相同浓度下,90%高良姜素组和99%高良姜素组A值均高于阳性对照组(均P<0.05),且两组比较差异无统计学意义(P>0.05);10.0 mmol/L浓度下,90%高良姜素组和99%高良姜素组黑素水平分别为(170.12±0.07)%和(121.41±0.07)%,明显高于浓度为1.0 mmol/L和5.0 mmol/L浓度组(P<0.05);相同浓度下,90%高良姜素组黑素水平明显高于99%高良姜素组(P<0.05);在1.0 mmol/L浓度下,99%高良姜素组能显著上调TYP和TRP-2 mRNA表达,分别为(0.65±0.08)和(0.72±0.30),明显高于空白对照组以及相同浓度下90%高良姜素组(P<0.05);在5.0 mmol/L浓度下,99%高良姜素组能显著上调TYP,TRP-1,TRP-2 mRNA表达,分别为(0.61±0.07)、(0.61±0.11)和(0.67±0.27),明显高于空白对照组以及相同浓度下90%高良姜素组(P<0.05)。结论高良姜素对人黑素瘤A375细胞黑素合成及TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA表达有所影响,其中99%高良姜素促进细胞黑素合成的能力弱于90%高良姜素,值得进一步研究。

癌特异性新抗原

比利时路德维希癌研所的Thierry Boon及其同事声称,已在人黑素瘤细胞中分离到3种未曾见于正常细胞中的相关基因。特别是其中一种基因的蛋白产物能诱导一种细胞毒性T细胞的抗肿瘤反应。这一发现一旦被证实,将找到第一种认定为只特异于癌细胞的抗原,今后亦将有希望用它作为疫苗来诱导免疫系统破坏肿瘤。 Boon氏是在本月初一次由通用汽车公司发起的会议上介绍其研究结果的。他所发现的抗原看来是由上述三种相关基因(Boon氏称之为Mage)的一个表达出来的。研究者宣称该抗原(Mage-1基因的产物)能激活杀伤性T细胞,这种细胞负责催毁肿瘤组织。对皮肤、肝脏、肺和其它正常人组织进行检测。

皮肤科学基础

诱导皮肤免疫抑制和表没食子儿茶素没食子酸酯光保护作用;中波紫外线对皮肤免疫系统影响的某些研究进展（综述）;全反式维甲酸和阿达帕林对中波紫外线诱导的melan-α黑素细胞黑素合成的影响;人黑素瘤细胞A375MIA／CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定;过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究……