α-倒捻子素通过HMGB1促炎通路诱导人黑色素瘤A375细胞的凋亡

目的研究α-倒捻子素对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移和凋亡的影响及HMGB1介导的炎症反应在给药过程中的作用。方法利用含有不同药物浓度(0、10、15、20μM)的DMEM培养基培养人黑色素瘤A375细胞,CCK-8试剂盒检测每组细胞活力及药物毒性,并使用光学显微镜观察用药后细胞形态变化;划痕实验检测每组用药后人黑色素瘤A375细胞的迁移能力;使用TUNEL染色检测用药后人黑色素瘤A375细胞的凋亡情况;细胞免疫荧光实验用来观察HMGB1蛋白用药前后的表达变化;免疫印迹实验检测药物处理后人黑色素瘤A375细胞内HMGB1及其相关炎症通路蛋白的表达情况。结果α-倒捻子素对A375细胞存在明显毒性,且显著抑制A375细胞的增殖及迁移,并呈现剂量依赖的效果;TUNEL染色证明,α-倒捻子素显著诱导A375细胞凋亡;细胞免疫荧光和免疫印迹实验表明,α-MG组HMGB1及炎症相关蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论α-倒捻子素可显著抑制人黑色素瘤A375细胞的生长,激活HMGB1相关炎症通路,诱导人黑色素瘤A375细胞发生凋亡。

甘草素通过调控miRNA抑制人黑色素瘤A375细胞的侵袭转移

目的 :探讨甘草素对人黑色素瘤A375细胞侵袭转移的抑制作用及与miRNA相关调控机制。方法 :不同浓度甘草素处理24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活情况,确定甘草素对细胞无毒作用剂量;通过划痕试验和Transwell小室迁移、侵袭试验分别观察细胞的非定向迁移力和定向迁移侵袭力;miRNA芯片筛选差异表达的miRNA,q PCR方法验证hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的下调表达;Western blot检测PTEN、p-AKT、AKT、MMP2和TIMP2蛋白表达。结果:10~100μmol/L剂量甘草素处理A375细胞24 h对细胞无明显损伤作用,划痕试验、Transwell小室迁移试验、侵袭试验显示甘草素能抑制A375细胞侵袭转移;甘草素可下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的表达,上调PTEN、TIMP2表达水平,降低p-AKT、MMP2的表达水平。结论:甘草素通过下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487表达,进而上调PTEN和TIMP2靶基因的表达水平,阻碍p-AKT信号通路并降低MMP2蛋白表达,从而发挥抑制人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的作用。

赤芍总苷对人黑色素瘤A375细胞迁移及侵袭活性的影响

目的观察赤芍总苷(total paeonyglucosides,TPG)对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,探讨TPG抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的相关机制。方法体外培养黑色素瘤细胞,分别加入5、15、20、25 mg/LTPG,细胞划痕实验测定迁移力;Transwell小室侵袭实验测定侵袭活性。RT-PCR和Western bolt方法检测黑色素瘤细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-2 mRNA和蛋白的表达。结果 TPG能显著抑制黑色素瘤A375细胞的迁移和侵袭,与对照组比较,TPG组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达明显下降,TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论 TPG可通过下调MMP-2、MMP-9,上调TIMP-2,调节MMP-TIMP平衡,发挥抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的作用。

黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的:探讨黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞株体外增殖的抑制作用。方法:选用人黑色素瘤A375细胞进行体外培养,以不同浓度的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞,连续6天使用倒置显微镜进行观察,计数,绘制生长曲线;以不同浓度(0.1～50μmol/L)的黄芩苷分别处理黑色素瘤A375细胞细胞24、48、72h后,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:生长曲线及MTT法显示黄芩苷对黑色素瘤A375细胞有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测到细胞在黄芩苷作用后,细胞凋亡率增加。结论:黄芩苷对人黑色素瘤A375细胞具有明显抑制作用,细胞凋亡可能是其机制之一。

赤芍总苷抑制人黑色素瘤A375细胞株增殖作用的研究

目的观察赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及其作用机制。方法黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200 mg/L TPG,对照组加等量0.9%氯化钠注射液,孵育48 h。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定细胞生长抑制率,用RT-PCR、Western blot法分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及其蛋白的表达水平。结果不同浓度(12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG刺激后,对黑色素瘤细胞均具有明显的增殖抑制作用。100 mg/L TPG作用黑色素瘤细胞48 h,PCNA mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著下降,而P21、P27、P53的mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论TPG抑制黑色素瘤A375细胞增殖,与下调PCNA表达及上调P21、P27、P53表达有关。

miR-146a对人黑色素瘤A375细胞增殖和侵袭的影响及作用机制

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)对人黑色素瘤A375细胞增殖与侵袭能力的影响及可能机制。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-146a模拟物或抑制剂转染入黑色素瘤A375细胞,使miR-146a过表达或低表达,采用MTT检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化。根据生物信息学软件预测FBXL10为miR-146a的下游靶基因,双荧光素酶报告分析进行验证。分别采用实时qPCR与Western blotting检测转染后各组A375细胞FBXL10 mRNA与蛋白的表达水平。结果与对照组比较,miR-146a模拟物能够显著抑制A375细胞增殖和侵袭能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告分析结果显示,FBXL10为miR-146a的下游靶基因,miR-146a过表达可显著降低FBXL10蛋白与mRNA的表达水平;miR-146a抑制剂的作用则与之相反。结论miR-146a过表达能够抑制A375细胞增殖和侵袭能力,其作用机制可能与降低FBXL10表达相关。

β-榄香烯诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的研究

β-榄香烯是我国自主开发的二类非细胞毒性抗肿瘤药物,具有广谱、高效、低毒等优点,对肝癌、肺癌等多种恶性肿瘤均有较好的治疗效果,但对人皮肤肿瘤的研究尚无报道。基于此,就β-榄香烯对人恶性黑色素瘤A375细胞的抗肿瘤活性展开研究,发现β-榄香烯能够显著抑制A375细胞增殖(P<0.01),并在一定范围内呈浓度和时间依赖性,主要表现为β-榄香烯能够诱导细胞发生凋亡。进一步对相关凋亡蛋白进行Western-blot检测,发现β-榄香烯通过抑制细胞内AKT信号通路途径,调控Bcl-2家族蛋白,降低Bcl-2的表达,显著增加Bad的表达量,并激活部分caspase系列蛋白质的剪切活化,从而抑制A375细胞增殖,诱导细胞凋亡。

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

加热处理后人黑色素瘤A375细胞对NK和DC细胞免疫活性的影响

目的:研究经加热处理的人黑色素瘤细胞A375对外周血单个核细胞来源的自然杀伤(NK)细胞及树突状细胞(DC)免疫活性的影响并探讨其作用机制。方法:体外培养人外周血单个核细胞来源的NK和DC细胞,并使其与43℃水浴加热后的A375细胞共孵育24 h。应用CCK-8法测定加热和非加热组效靶比(NK∶DC∶A375)分别为1∶2∶1、3∶6∶1、6∶12∶1时NK/DC细胞的杀伤率;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上述各效靶比组NK细胞培养液中γ-干扰素(γ-INF)的释放情况。结果:在每个效靶比,与非加热组比较,加热组NK/DC的杀伤率均明显提高(P<0.05),且其杀伤率随NK/DC细胞的浓度升高而升高(<0.05)。在加热组和非加热组,含有DC较不含DC组杀伤率均明显提高(P<0.05)。加热组NK细胞γ-INF释放均较非加热组明显增加(P<0.05)。结论:经加热处理后的黑色素瘤细胞A375能够刺激NK细胞分泌更多的γ-INF,明显提高NK细胞的杀伤活性,且DC在其中起着重要作用。

高三尖杉酯碱对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及机制研究

目的探究高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对人黑色素瘤A375增殖的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测HHT对A375细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察染色质凝集情况;细胞克隆形成实验检测HHT对A375细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测HHT对A375细胞凋亡和周期影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-PARP、CyclinB1和CDK1蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,随着药物的剂量(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μmol·L^-1)和作用时间(24、48、72 h)增加,HHT对A375细胞的抑制作用逐渐增强;Hoechst 33258染色和FCM结果显示,HHT可使A375细胞染色质呈凋亡形态改变,促进细胞凋亡,将A375的细胞周期阻滞于G2/M期;克隆形成实验显示,HTT可以抑制A375细胞的克隆形成能力;Western blot结果表明HHT可下调CyclinB1、CDK1和Bcl-2蛋白水平,上调Bax,Cleaved-caspase 3和Cleaved-PARP蛋白表达水平。结论HHT使A375细胞阻滞于G2/M期,抑制A375细胞增殖;HHT可激活线粒体凋亡信号通路,诱导黑色素瘤A375细胞凋亡。

异甘草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡研究

目的研究异甘草素诱导人黑色素瘤(A375)细胞凋亡及其初步机制。方法采用硫氰酸盐B(SRB)法测定异甘草素对A375细胞生长的抑制效应,AO/EB和Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞技术检测A375细胞凋亡率;荧光染料二乙酸-2’,7’-二氯荧光素(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化。5,5',6,6'-四氯-1,1',3,3'-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)测定线粒体膜电势的变化,利用试剂盒检测异甘草素处理后的A375细胞内ATP和培养液中的乳酸、葡萄糖含量。结果异甘草素能抑制A375细胞的增殖,并呈浓度依赖性;在荧光显微镜下发现,异甘草素处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态;细胞凋亡率随异甘草素浓度的增加而升高;异甘草素处理后的细胞内活性氧有明显上升趋势,细胞线粒体膜电位明显下降;异甘草素作用后胞内ATP含量下降(P<0.05或P<0.01),培养液中的乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P<0.05或P<0.01)。结论异甘草素能够抑制A375细胞的恶性增殖,最终诱导细胞凋亡。推测异甘草素通过活性氧升高,引起线粒体膜电势下降,从而影响A375细胞的糖酵解途径而导致细胞凋亡。

臭椿酮诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其机制研究

为研究臭椿酮(Ailanthone,AIL)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用及作用机制,以人黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用MTT法测定AIL对人黑色素瘤A375细胞生长增殖的抑制作用。用倒置相差显微镜观察AIL对A375细胞形态的影响,用荧光倒置显微镜观察Hoechst33258染色后AIL对A375细胞核的影响,用AnnexinV-FITC/PI双染法检测AIL诱导A375细胞凋亡的作用,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的活性,Westernblot检测p-PI3Kβ(Ser1070),PI3Kβ,p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表达水平的变化,接着用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步验证AIL对PI3K/Akt信号通路及细胞凋亡的影响。实验结果表明,AIL能够明显抑制A375细胞增殖,使A375细胞数目变少、附着力和透光性减弱,AIL能够诱导A375细胞凋亡,使其细胞核染色质发生固缩并呈现高亮,且使A375细胞早期及晚期凋亡率均增加,AIL作用后能够使caspase-3和caspase-9活性增加,AIL能够抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而使PI3K/Akt信号通路失活。较AIL单独作用,AIL和LY294002共同作用后对PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增强且诱导凋亡作用增加,进一步说明AIL通过失活PI3K/Akt信号通路来诱导A375细胞凋亡。

无花果果实及乳浆对人黑色素瘤A375细胞的抑制作用及其作用机制研究

目的考察无花果实及乳浆不同极性部位的体外抗黑色素瘤活性,并探讨其作用机制。方法采用溶剂提取法制得无花果提取物,系统溶剂萃取法得乳浆不同极性部位和醇沉纯化部位供试品;采用MTT法、划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞仪凋亡检测考察供试品对人恶性黑色素瘤细胞A375的增殖、迁移、侵袭和凋亡影响;构建A375细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC的共培养体系,通过侵袭实验、成管实验体外模拟肿瘤细胞对内皮血管形成;ELISA法测定相关细胞因子水平。结果无花果提取物和乳浆乙酸乙酯部位抑制肿瘤细胞A375的迁移和侵袭(P<0.05,P<0.01,P<0.001),降低A375细胞的超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)含量(P<0.001),提高一氧化氮(NO)含量(P<0.05,P<0.01,P<0.001);乳浆醇沉部位抑制A375细胞迁移和侵袭(P<0.01,P<0.001),对A375细胞的直接抑杀和促凋亡效果较好;共培养后HUVEC细胞侵袭能力提升,血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮素1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOs)分泌增多(P<0.001),且供试品(200~400μg·mL;)给药后可明显逆转(P<0.05,P<0.001)。结论无花果提取物及乳浆乙酸乙酯、醇沉部位具有抑制A375细胞增殖、迁移和侵袭作用,从能量代谢方面抑制黑色素瘤生长,并可能通过eNOs/VEGF/ET-1途径抑制肿瘤的新生血管形成。

新狼毒素A诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的机制研究

为探讨新狼毒素A抑制人黑色素瘤A375细胞增殖及诱导凋亡的作用。本实验采用噻唑蓝(MTT)法检测新狼毒素A对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响,Hoechst33258法观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,Westernblot检测凋亡相关蛋白表达。结果显示新狼毒素A以时间剂量依赖性的方式显著抑制A375细胞的增殖;不同浓度新狼毒素A(0、15、30、45μmol/L)作用于A375细胞48h后细胞出现显著凋亡特征,新狼毒素A增加A375细胞的凋亡率且降低了线粒体膜电位,上调Bax、caspase-3和细胞色素C(CytochromeC)蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。以上结果说明新狼毒素A抑制A375细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体途径的凋亡有关。

去甲斑蝥素对人黑色素瘤A375细胞周期、活性氧自由基及细胞凋亡的影响

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对人黑色素瘤A375细胞周期、ROS自由基及细胞凋亡的影响及其机制。方法培养人A375黑素瘤细胞,分别采用10,20,40μmol/L NCTD预处理,培养48 h后,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞周期的影响,采用免疫印迹法检测NCTD对人A375黑素瘤细胞蛋白Cyclin D1和P21表达的影响,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞ROS及凋亡水平的影响。结果10,20,40μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于对照组,S期和G2期细胞比例低于对照组,20,40μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于10μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于10μmol/L NCTD组,40μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于20μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于20μmol/L NCTD组(P<0.05)。40μmol/L NCTD组处理人A375黑色素瘤细胞48 h后,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A和CDK2低于对照组,P21蛋白高于对照组(P<0.05)。10,20,40μmo/L NCTD组细胞内ROS水平高于对照组,20,40μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于10μmol/L NCTD组,40μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于20μmol/L NCTD组(P<0.05)。10,20,40μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于对照组,20,40μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于10μmol/L NCTD组,40μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于20μmol/L NCTD组(P<0.05)。NAC组细胞凋亡率低于对照组,NCTD组和NAC+NCTD组细胞凋亡率高于对照组,NAC+NCTD组细胞凋亡率低于NCTD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NCTD通过阻滞细胞G1周期、减少S期抑制人A375黑色素瘤细胞的增殖,通过诱导ROS水平升高诱导细胞凋亡。

敲减NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375细胞的增殖

NADPH氧化酶参与细胞活性氧族(ROS)的生成过程,而ROS与肿瘤细胞增殖密切相关.为了阐明NADPH氧化酶影响黑色素瘤A375细胞增殖的分子机制,本文首先应用荧光定量PCR和Western印迹证实NOX4为人黑色素瘤A375细胞的NADPH氧化酶功能核心亚基;随后根据NOX4基因设计3条干扰序列和对照序列并连接到p Super-retro-puro载体,经鉴定后转化E.coli DH5α感受态细胞、筛选有效干扰序列并用于逆转录病毒包装,病毒液感染A375细胞并经嘌呤霉素筛选10d,构建了NOX4缺陷的A375稳转细胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表达分别下降了66.02%和77.35%,伴随NADPH氧化酶活性和ROS水平分别下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法检测显示,A375-NOX4Δ细胞的增殖能力比A375-WT细胞明显降低、倍增时间延长,增殖细胞数量下降了68.27%(P<0.01),呈现G1→S期阻滞;Western blot检测表明A375-NOX4Δ细胞的cyclin D1、CDK4分别下降了55.7%(P<0.01)和64.8%(P<0.01),而P53、P21分别增加了6.89倍(P<0.01)和3.27倍(P<0.01),STAT3、P-STAT3分别下降了51.80%(P<0.05)和82.58%(P<0.01);电泳迁移率变动分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ细胞的STAT3-DNA结合活性明显降低.上述结果提示,敲减A375细胞的NOX4表达可能通过减少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其结合DNA的活性下降,最终导致A375-NOX4Δ细胞增殖减少、呈现G1→S期阻滞,这为黑色素瘤发病机制研究提供了新思路及可能的药物作用靶点.

刺蒺藜及其配伍对人黑色素瘤A375细胞黑素代谢的影响

目的：探索刺蒺藜及不同配伍对人黑色素瘤A375细胞黑色素代谢的影响。方法：刺蒺藜不同浓度及其不同配伍组在不同的浓度范围（1.5~12 mg/m L）中作用A375细胞48h后,采用CCK-8法检测细胞的活性和采用Na OH裂解法测定黑色素含量。结果：对细胞活性的影响：刺蒺藜组、丹参组、刺蒺藜＋丹参组、刺蒺藜＋防风＋丹参＋菟丝子组对A375细胞活性有显著的抑制作用（P〈0.01）;防风组、菟丝子组、刺蒺藜＋防风组、刺蒺藜＋菟丝子组对A375细胞活性有双向调节作用,在相对低浓度组表现为促进作用,在相对高浓度表现为抑制作用（P〈0.01）;所有组都有随着浓度增加而对A375细胞活性抑制加强的趋势。对黑色素含量的影响：所有组对黑色素含量无明显作用（P〉0.05）。结论：刺蒺藜及其配伍对A375细胞活性的影响主要是抑制作用,而对黑色素含量变化的影响与对照组近似,无明显影响。

纳秒脉冲电场联合抗肿瘤药物对人黑色素瘤A375细胞活力的影响

纳秒脉冲电场(Nanosecond Pulsed Electric Fields,nsPEFs)是一种有望应用于临床肿瘤治疗的新兴方法。前期研究表明,nsPEFs可抑制人黑色素瘤细胞A375的细胞活性和迁移,但与抗肿瘤药物联用是否有协同作用有待研究。本文采用CCK-8法考察nsPEFs与抗肿瘤药物达卡巴嗪和顺铂联合作用对A375细胞活力的影响。结果发现,nsPEFs联合达卡巴嗪协同作用不显著,但与顺铂联合作用则具有强协同作用,且与nsPEFs的输入能量正相关。该研究结果可为nsPEFs联合抗肿瘤药物更好应用于临床提供实验依据。

2-氯脱氧腺苷(2-CDA)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的机制探讨

目的探索2-氯脱氧腺苷(2-CDA)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的机制。方法取对数生长期A375细胞,MTT比色法检测2-CDA对其体外增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞内蛋白水平的变化。结果 2-CDA对A375细胞增殖具有明显抑制作用,且随浓度增加及作用时间延长而逐渐增强,48h时的半数抑制浓度(IC50)为3.04μmol/L;Annexin V/PI双染并经流式细胞术检测显示2-CDA能够明显诱导细胞凋亡;Western blotting检测显示2-CDA能够显著下调Stat3的磷酸化水平,2-CDA作用后细胞凋亡信号蛋白caspase-3发生剪切而活化,导致其下游蛋白PARP发生剪切而诱导细胞凋亡。结论 2-CDA可通过抑制Stat3蛋白活性并激活Caspase-3而诱导A375细胞发生凋亡。

低氘水对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用及其机制探讨

目的观察低氘水(DDW)对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用,并探讨相关机制。方法A375细胞与人角质形成细胞HaCaT分别用氘体积分数为0.0025%、0.0050%、0.0100%的DDW和超纯水(氘体积分数0.0150%)配成的高糖DMEM培养基培养。采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测A375细胞和Ha⁃CaT细胞的增殖能力,采用划痕实验检测两种细胞迁移能力,DAPI染色观察两种细胞形态变化。采用流式细胞仪检测A375细胞凋亡和细胞周期分布情况,ATP酶测试盒检测A375细胞Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、总ATP酶活性,采用Westernblotting法检测A375细胞中的凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)及Caspase通路蛋白(Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-9、cleavedCaspase-9、PARP、cleavedPARP)。结果与超纯水处理相比,0.0100%、0.0050%、0.0025%氘体积分数的DDW处理的A375细胞增殖抑制率依次增高,克隆形成率和细胞迁移率依次降低(P均<0.05);DDW处理的A375细胞出现核染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象,细胞核中凋亡小体增多。DDW对HaCat细胞的增殖能力、集落形成能力、细胞迁移能力及细胞形态没有明显影响。与超纯水处理相比,0.0100%、0.0050%、0.0025%氘体积分数的DDW处理的A375细胞凋亡率及G_(0)/G_(1)期细胞比例依次增高,G_(2)/M期细胞比例依次降低(P均<0.05)。与超纯水处理相比,0.0100%、0.0050%、0.0025%氘体积分数的DDW处理的A375细胞Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、总ATP酶活性及Bcl-2、Caspase-9、PARP蛋白表达依次降低,Bax、cleaved Caspase-3/9、cleavedPARP蛋白表达依次增高(P均<0.05)。结论低氘水能选择性地抑制A375细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,而对人角质形成细胞无明显影响;低氘水的作用机制可能与抑制ATP酶活性、激活Caspase信号通路有关。