呫吨酮并吡啶衍生物XP-16对人鼻咽癌CNE细胞的体外抑制作用

运用MTT法、细胞形态学观察和细胞克隆实验观察一个新型的呫吨酮并吡啶衍生物(XP-16)对人鼻咽癌CNE细胞的体外抗肿瘤效应;运用Hoechest33258和PI双染、流式细胞仪检测、荧光光度法、RT-PCR等手段研究其可能的作用机制。结果表明,该化合物能剂量和时间依赖性地抑制CNE细胞增殖;XP-16作用于CNE细胞24 h后,CNE细胞出现染色质聚集、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,且随化合物剂量的增加,CNE细胞凋亡百分率逐渐增大;CNE细胞阻滞于G2-M和S期;并且引起CNE细胞线粒体膜电位降低、Bad和MT-1A的mRNA表达增加。XP-16具有诱导CNE细胞凋亡作用,其作用机制可能与其降低线粒体膜电位、上调MT-1A表达有关。

丹参酮Ⅱ_A诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡

目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人鼻咽癌CNE作用及其可能作用机制。方法:通过细胞形态学观察、生长曲线绘制、MTT检测以及克隆实验观察TanⅡA对CNE细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察TanⅡA对CNE细胞凋亡的影响;采用荧光分光光度计检测TanⅡA对CNE细胞细胞内钙及线粒体膜电位的影响;RT-PCR检测TanⅡA对CNE细胞Bad,MT-1A mRNA表达的影响。结果:TanⅡA能抑制CNE细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用CNE细胞24,48,72 h的IC50分别为45.7,24.8,3.3 mg.L-1。TanⅡA作用CNE细胞24 h后,CNE细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,CNE细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,CNE细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达上调。结论:TanⅡA具有抗CNE作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达上调有关。

粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究

目的:探讨粉防己碱(Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法:将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果:Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长(P<0.05)。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强(P<0.05)。结论:Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的:观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法:倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果:苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变:细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0/G1期比例明显增高,S期、G2/M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论:苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。

染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用及靶点预测

目的:研究染料木素对人鼻咽癌CNE1细胞生长的抑制作用并预测其可能的作用靶点。方法:采用CCK-8法检测0(空白对照)、12.5、25、50、100、150μmol/L染料木素分别作用24、48、72 h对CNE1细胞增殖的影响;分别采用流式细胞术检测0(空白对照)、15、30、60μmol/L染料木素作用24 h对CNE1细胞周期、凋亡的影响;采用划痕实验检测0(空白对照)、10、20、30μmol/L染料木素作用24 h对CNE1细胞迁移能力的影响。采用高通量测序法挖掘0(空白对照)、30μmol/L染料木素作用24 h后CNE1细胞中的差异基因,并通过实时荧光定量-聚合酶链式反应法(RT-qPCR)对上述细胞实验相关差异基因mRNA的表达情况进行验证。结果:与空白对照比较,12.5、25、50、100、150μmol/L染料木素对细胞的增殖均有显著的抑制作用(P<0.01),且呈浓度-时间-效应趋势;15、30μmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05或P<0.01),30、60μmol/L染料木素可使细胞周期阻滞于G2/M期并显著促进其凋亡(P<0.05或P<0.01);10、20、30μmol/L染料木素可显著抑制细胞的迁移能力(P<0.01)。高通量测序共挖掘出2271个差异基因(padj<0.05),其中1154个基因上调、1117个基因下调;结合细胞实验结果共筛选出p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIN D、PI3K、AKT等8个潜在靶点差异基因。经RT-qPCR法验证,其中p53、p21、STC2、FGF2、CDK6、CYCLIN D、AKT等7个潜在靶点差异基因mRNA的表达均显著下调(P<0.05),与转录组测序结果基本一致。结论:染料木素能有效抑制人鼻咽癌CNE1细胞的生长;其抗鼻咽癌机制可能与抑制突变型p53基因的表达,恢复野生型P53蛋白功能以及抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路的活性有关。

生长抑素受体亚型在人鼻咽癌细胞株CNE_2中表达

背景与目的:生长抑素受体(somatostatin receptor SSTR)在许多肿瘤组织均有表达,为生长抑素类似物如奥曲肽用于这些肿瘤的治疗提供了生物学基础,但对生长抑素受体在鼻咽癌中表达情况的研究甚少。本研究旨在了解生长抑素受体基因在鼻咽癌细胞中的表达情况,为生长抑素类似物用于鼻咽癌治疗的进一步研究提供试验基础。方法:采用RT-PCR法和SP免疫组化法联合检测体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE2的SSTRs表达,并对PCR mRNA产物测序以鉴定结果。结果:RT-PCR提示人鼻咽癌细胞株CNE2分别表达生长抑素受体亚型SSTR1、SSTR2、SSTR4;免疫组化结果:人鼻咽癌细胞株CNE2表达SSTR1、SSTR2A为强阳性(>60%),表达SSTR4为弱阳性、SSTR2介于两者之间、SSTR3和SSTR5则无表达。结论:我们的研究证实人鼻咽癌细胞株CNE2有多种生长抑素受体亚型基因表达,且以表达SSTR1、SSTR2较多。

新合成的紫草萘醌类衍生物TEISHNZ的细胞毒作用和诱导人鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨一种新的人工半合成紫草萘醌类衍生物（2，3，11-三乙巯基-6-异己萘茜，简称TEISHNZ）。在体外对8种人癌细胞的细胞毒作用及诱导人鼻咽癌细胞（CNE2）细胞凋亡的作用。方法应用噻唑蓝（MTT）比色法检测TEISHNZ对8种人癌细胞的增殖抑制作用，以半数抑制浓度（IC50）为指标进行评价。应用流式细胞术（FCM）检测TEISHNZ诱导CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果TEISHNZ在0．78～25μg／mL质量浓度下，对8种人癌细胞均有明显的增殖抑制作用；对CNE2细胞、人肺腺癌细胞（GLC-82）、人肝癌细胞（Bel-7402）、人白血病细胞（K562）、人宫颈癌细胞（HeLa）、人胃腺癌细胞（MGC-803）、人乳腺癌细胞（MDA453）和人口腔癌细胞（KB）的IC50分别为3．96、2．48、5．13、1．92、4．54、5．88、1．35和3．44μg／mL，IC50值均在6μg／mL以下。FCM检测结果显示，以TEISHNZ（1．56、3．12和6．25μg／mL）处理CNE2细胞48h后，在FCM的DNA直方图上可见亚二倍体（亚G1峰）；细胞凋亡率依次为3．9％、10．8％和28．1％，而对照组的细胞凋亡率为2．2％；TEISHNZ对CNE2细胞的诱导凋亡作用呈浓度依赖性；细胞周期分析显示CNE。细胞被阻滞于G2／M期。用6．25μg／mL TEISHNZ处理CNE2细胞12、24、36和48h后亦可见细胞凋亡，细胞凋亡率分别为4．5％、27．2％、48．2％和24．9％，而对照组的凋亡率为1．0％。CNE2细胞被TEISHNZ处理的前36h，其凋亡率随着作用时间的延长而增加，被阻于S和G2／M期；作用48h时，被阻于G2／M期。结论TEISHNZ对多种人癌细胞有明显的细胞毒作用，且能诱导CNE2细胞凋亡，并使细胞周期阻滞于S期和（或）G2／M期。

Genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的:研究genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT检测不同浓度genistein在不同时间对鼻咽癌细胞系CNE的生长抑制作用;透视电镜下观察鼻咽癌细胞演变过程、凋亡细胞及凋亡小体,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果:Genistein可明显抑制CNE细胞的增殖,并且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,随浓度的增加时间的延长抑制作用逐渐增强,尤以200μmol/L组最明显;Genistein诱导鼻咽癌细胞的早期凋亡率随浓度的增加而增强,200μmol/L时为49.9%;FCM分析发现genistein阻断CNE细胞生长于细胞周期的G2/M期;电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论:Genistein对鼻咽癌细胞系CNE的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2/M期,并且具有明显诱导CNE细胞凋亡的作用。

丁酸钠抑制人鼻咽癌上皮细胞CNE2中吲哚胺双加氧酶表达的体外研究

目的:研究丁酸钠(NaB)抑制人鼻咽癌上皮细胞CNE2中吲哚胺双加氧酶(IDO)表达的分子机制。方法:体外培养CNE2细胞,采用蛋白印迹法、免疫组化法检测不同浓度NaB对重组人干扰素γ(IFN-γ)诱导后CNE2细胞中IDO的表达及NaB作用不同时间对核转录因子STAT1磷酸化的影响;利用pSTAT1-GFP转染CNE2细胞,观察NaB对STAT1核内分布的影响;采用蛋白印迹法检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂CAY10398对IDO表达的影响;采用免疫沉淀法检测NaB对转染细胞的STAT1质粒的乙酰化作用。结果:随NaB或CAY10398浓度增加,CNE2细胞中IDO表达均减少;随NaB作用时间延长,IFN-γ诱导下的STAT1磷酸化水平降低;NaB使IFN-γ诱导的细胞核内STAT1绿色荧光蛋白减少;NaB能明显增强转染和未转染细胞中STAT1的乙酰化作用(P<0.001)。结论:NaB抑制CNE2细胞IDO表达的机制可能与其乙酰化STAT1、降低STAT1的磷酸化和核内转移有关。

DNP对人鼻咽癌细胞株CNE细胞增殖和迁移的影响

目的观察一氧化氮供体DNP对人鼻咽癌细胞株CNE细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法体外传代培养CNE细胞,按对数浓度差0.1的间距加入0.01～10μmol.L-1DNP,作用48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测DNP对CNE细胞增殖的影响;Transwell小室法测定细胞的迁移情况;硝酸酶法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量;RT-PCR检测CNE细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 DNP作用于CNE 48 h后,与空白组比较,CNE的增殖和迁移均受到不同程度的抑制(P<0.05),VEGF mRNA的表达下调,细胞培养液中的NO含量明显提高。结论 DNP能够抑制CNE的增殖和迁移,其机制可能与增加NO含量、抑制VEGF mRNA的表达有关。

异长春花碱对耐顺铂人鼻咽癌细胞多药耐药的逆转作用及其机制

目的:研究异长春花碱对耐顺铂(DDP)人鼻咽癌细胞(CNE2/DDP)多药耐药的逆转作用及其机制。方法:以对数生长期的CNE2/DDP细胞为对象,检测0.1、1、5、10、50、100μmol/L异长春花碱作用24 h后细胞的增殖抑制率,与空白对照组比较考察5、10μmol/L异长春花碱对细胞耐DDP的逆转倍数(RF)、细胞内罗丹明123的含量、多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)mRNA及其蛋白表达和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达、激活蛋白1(AP-1)活性。结果:异长春花碱与剂量呈正相关地抑制CNE2/DDP细胞的增殖;5、10μmol/L异长春花碱对细胞耐DDP的RF分别为2.81、8.38倍;与空白对照组比较,细胞中罗丹明123含量分别提高了2.16和2.79倍(P<0.05),MDR1、MRP1 mRNA及其蛋白,p-JNK蛋白和AP-1活性均明显降低(P<0.05)。结论:异长春花碱可逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性,降低细胞中MDR1、MRP1的表达,其机制可能与抑制JNK磷酸化、下调AP-1活性有关。