高良姜素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的研究

目的:研究高良姜素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响。方法:实验设置空白对照组和实验组(分别加入不同浓度的高良姜素处理CNE2细胞),采用CKK-8法检测CNE2细胞增殖的抑制效果,采用流式细胞仪检测CNE2细胞周期和凋亡的影响。结果:高良姜素能抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,而随其浓度增加CNE2细胞阻滞于G0/G1期,S期、G2/M期细胞减少,同时细胞凋亡率也随其浓度增高而增加,呈浓度依赖性。结论:高良姜素对人鼻咽癌CNE2细胞株有抑制增殖作用,对细胞周期过程产生阻滞作用,并可以诱导细胞凋亡。

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的:观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法:倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果:苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变:细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0/G1期比例明显增高,S期、G2/M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论:苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。

肝素增强佛波酯对人鼻咽癌CNE2细胞的作用 :上调c-jun ,p53 ,p21的表达(英文)

目的 :观察肝素联合佛波酯对人鼻咽癌细胞的增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制。方法 :用细胞记数法、流式细胞术观察肝素联合佛波酯对人鼻咽癌细胞的增殖及细胞周期的影响 ;而用TUNEL、琼脂糖凝胶电泳、Westernblot等方法观察肝素与佛波酯联合应用对人鼻咽癌细胞凋亡的作用。结果 :肝素与佛波酯联合应用后对鼻咽癌细胞的生长抑制及其凋亡具有显著增强的作用 ,同佛波酯单独应用于诱导细胞凋亡相比 ,低剂量的肝素与佛波酯联合应用后发现 :TUNEL阳性细胞明显增多 ;G1 期细胞阻止 ,S期细胞明显减少 ,凋亡率增加 ;DNA“梯形”变化更加明显 ;c-jun ,p53 ,p2 1基因表达明显升高 ,而c-fos在整个用药过程中没有改变。结论 :肝素增强佛波酯对人鼻咽癌细胞的抗增殖及促凋亡 ,这可能与c-jun ,p53 ,p2

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制

背景与目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用。本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制。方法:分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,50、100、200及400μmol/LDADS作用CNE2细胞48h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性(P<0.05)。形态学观察发现,DADS处理24h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变。流式细胞术分析显示,50、100、200和400μmol/LDADS作用24h,凋亡率分别为(10.8±1.3)%、(14.8±1.1)%、(21.7±2.0)%及(29.8±2.6)%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡(n=3,P<0.05)。200及400μmol/LDADS分别作用CNE2细胞24h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带。Western blot检测显示,50、100、200和400μmol/LDADS处理CNE2细胞24h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组(2.24±0.26)比较,差异有显著性(P<0.05);Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组(0.33±0.08)比较,差异有显著性(P<0.05);随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调。200、400μmol/LDADS处理CNE2细胞24h后,与对照组相比,Caspase3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase3的活化。结论:DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase3的活化有关。

肝素对叉孢素介导的人鼻咽癌CNE2细胞的增殖与凋亡的影响(英文)

目的 :观察肝素对叉孢素介导的人鼻咽癌细胞的增殖与凋亡的影响 ,以及探讨其可能的分子机制。方法 :应用了MTT法、荧光染色、TUNEL、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、RT -PCR及Westernblot等方法。结果 :肝素与叉孢素联合应用后对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡具有显著的影响。低剂量的肝素与叉孢素联合应用 :细胞生长抑制率显著高于叉孢素单独应用 ;细胞核浓缩 ,核碎裂等形态学变化更加明显 ;TUNEL阳性细胞明显增多 ;凋亡率增加 ;DNA“梯形”变化也清晰可见 ;c-myc ,bax基因的表达明显高于叉孢素单独应用 ,而bcl- 2在整个用药过程中没有改变。结论 :肝素与叉孢素对人鼻咽癌细胞在抗增殖及促凋亡方面有协同作用 ,这可能与c -myc ,bax的表达上调有关 .

二烯丙基二硫下调cyclin D1和CDK4的表达诱导人鼻咽癌CNE2细胞G_1期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测DADS对CNE2细胞增殖抑制作用;流式细胞术分析DADS对CNE2细胞周期分布的影响;运用RT-PCR和Western blot方法分析DADS作用CNE2细胞后,cyclin D1和CDK4的表达变化。结果 MTT结果显示,不同浓度DADS(90、140、240、400μmol·L-1)处理CNE2细胞48h后,生长抑制率分别为4.0%、13.8%、25.8%、51.2%;流式细胞术分析显示,DADS阻滞CNE2细胞于G1期,并呈浓度依赖性;RT-PCR和Western blot结果表明,细胞周期调控基因cyclinD1、CDK4表达下调。结论 DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用与其阻滞细胞G1期有关,并且可能是通过抑制cyclin D1、CDK4的表达使CNE2细胞阻滞于G1期。

二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用及分子机制。方法体外培养CNE2细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法、细胞形态学观察、流式细胞仪和Western blotting方法分析DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白p21WAF1的表达。结果MTT法显示,不同浓度DADS(90、140、240、400μmol/L)处理CNE2细胞48小时后,生长抑制率分别为3.3%、12.9%、28.3%、56.9%;细胞计数法表明,常规培养CNE2细胞群体倍增时间为24.5小时,DADS的浓度由90μmol/L增加到400μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.6小时延长到93.1小时;HE染色结果显示,不同浓度DADS处理CNE2细胞48小时后细胞异型性明显减少,核浆比例明显减少;流式细胞仪分析显示DADS呈浓度依赖性将CNE2细胞阻滞在G0/G1期;Western blotting分析表明,在细胞周期阻滞的同时有p21WAF1蛋白表达上调。结论DADS对CNE2细胞的抑制增殖作用与G0/G1期阻滞有关,其分子机制可能与调节p21WAF1表达有关。

山竹果皮中总氧杂蒽酮对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨山竹果皮中总氧杂蒽酮提取纯化物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法将人鼻咽癌CNE2细胞随机分成阴性对照组和不同浓度山竹果皮中总氧杂蒽酮提取纯化物组。阴性对照组不加药物,正常培养;总氧杂蒽酮提取纯化物组分别以200,400,600,800μmol·L-1总氧杂蒽酮作用24,48,72 h。采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度总氧杂蒽酮提取纯化物对CNE2细胞增殖的影响,Annexin-V/PI双重染色、碘化丙啶单染进行流式细胞术检测总氧杂蒽酮提取纯化物对CNE2细胞周期和凋亡的影响。Caspase-3试剂盒检测总氧杂蒽酮提取纯化物对CNE2细胞Caspase-3酶活化的影响。结果总氧杂蒽酮提取纯化物随着浓度增加,可显著抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖活性,浓度为371.536 7μmol·L-1时可诱导人鼻咽癌CNE2细胞出现明显早期凋亡,并且随着药物作用时间的增加(24,48,72 h),凋亡早期癌细胞的比例显著上升(分别为0.03%,10.54%,26.47%)(P<0.05);总氧杂蒽酮提取纯化物使CNE2细胞G1期细胞比例大幅升高,同时S期细胞比例明显下降;对Caspase-3具有激活作用,Caspase-3酶的活性与药物浓度成正比。结论山竹果皮中总氧杂蒽酮提取纯化物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖有显著抑制作用和促凋亡作用,其作用机制可能与抑制鼻咽癌细胞增殖活性、抑制细胞进入S期和激活Caspase-3有关。

菊花活性成分Parthenolide对人鼻咽癌CNE2细胞线粒体功能和半胱天冬酶活性的影响(英文)

背景:鼻咽癌是我国南方重点防治的恶性肿瘤之一,探讨天然草本菊花活性成分在NPC化学预防的作用,对建立现代康复体系具有重要意义。目的:研究菊花活性成分倍半萜烯内酯(SLs)对人鼻咽癌细胞中线粒体功能和半胱天冬酶活化途径的影响。设计:完全随机对照分组设计。地点和对象:由中山大学公共卫生学院预防医学系完成,对象为低分化CNE2细胞株。干预:对parthenolide(PN)进行剂量-反应和时间效应作用观察,采用噻唑蓝(MTT)颜色反应检测细胞线粒体功能,底物荧光光谱法测定细胞内caspase-9和-3活性,蛋白免疫印迹法检测线粒体内细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段;并应用特异性抑制剂进行细胞内cas-pase途径阻断实验。主要观察指标:细胞线粒体功能、细胞内caspase-9和caspase-3活性、线粒体细胞色素C的释放和caspase-3酶原的降解。结果:PN(1～100μmol/L)作用12h和24h后,MTT颜色反应抑制率随剂量显著增高,呈明显剂量依赖性(Pearson'sr=0.7322,0.7703,P<0.05),IC50分别为252.94μmol/L和49.63μmol/L;但caspase-9和-3活性未见升高,未见细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段形成。PN与caspase抑制剂联合作用后,caspase-9和-3活性明显低于对照和单独PN作用(t=9.146,8.280,27.325,27.450,P<0.05)。

尼美舒利诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡作用

目的观察尼美舒利(NIM)诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡作用。方法 0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8 mmol·L-1NIM作用于体外培养的CNE2细胞株,光学显微镜观察细胞形态和数量变化,透射电子显微镜观察细胞形态和结构变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞悬液吸光度值,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布和凋亡率,蛋白免疫印迹反应(Western Blot)检测细胞环氧化酶2(COX-2)蛋白表达情况。结果不同浓度NIM作用3 d后,CNE2细胞皱缩,数量减少,与药物浓度呈正相关;透射电镜下,细胞形态结构随NIM浓度增加而出现不同程度破坏和死亡征象;相同作用时间下,NIM浓度越高,吸光度值越低;FCM结果显示,NIM各剂量组均在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰(凋亡峰),随着NIM浓度增高,G0/G1期细胞所占比例逐渐下降,G2/M期细胞比例升高,凋亡率逐渐增高;Western Blot结果显示,随着NIM浓度增加,COX-2蛋白表达量逐渐减少。上述结果均与NIM浓度相关,经统计学处理,与对照组和相邻前一浓度组比较,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NIM能诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,该作用与抑制COX-2有关。

二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用及可能机制。方法体外培养人鼻咽癌CNE2,采用MTT比色实验、流式细胞术和免疫细胞化学的方法分析DADS对CNE2细胞增殖的抑制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达。结果MTT法显示,不同浓度(30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L)DADS处理CNE2细胞48 h后,CNE2细胞的生长有明显的抑制作用,其增殖抑制率分别为6.59%、14.06%、26.50%和62.37%,呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)。流式细胞仪分析结果显示,DADS明显地将CNE2细胞阻滞在G1期。免疫细胞化学分析表明,在G1期阻滞同时有p21WAF1蛋白表达上调,Cyclin-E、C-myc蛋白表达下降。结论DADS对人鼻咽癌CNE2细胞的抑制增殖作用与G1期阻滞有关,其机制可能与上调p21WAF1蛋白表达,下调Cyclin-E、C-myc蛋白表达有关。

茶黄素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究茶黄素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:采用不同浓度茶黄素处理人鼻咽癌CNE2细胞;使用CCK-8法检测CNE2细胞在24、48、72 h的增殖抑制情况并计算细胞抑制率;细胞平板克隆形成实验观察CNE2细胞的克隆形成能力;细胞划痕实验检测CNE2细胞的迁移情况;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测CNE2细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测相关基因的表达水平。结果:CCK-8检测结果显示随着茶黄素药物浓度的升高及作用时间的延长,药物对CNE2细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用呈时间及浓度依赖性;细胞平板克隆实验显示茶黄素能显著降低CNE2细胞的克隆形成能力;Hoechst33258染色显示茶黄素作用于CNE2细胞后出现核固缩、碎裂等凋亡现象;细胞流式术检测显示经茶黄素处理后CNE2细胞凋亡率升高;RT-PCR显示茶黄素能上调CNE2细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、P21 mRNA的表达。结论:茶黄素能抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈时间及浓度依赖性,其作用机制可能与调节细胞增殖和凋亡基因的表达有关。

苹果多糖抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨苹果多糖(AP)对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用水提-醇沉-酸降解的方法获得AP。培养CNE2细胞,采用(0.0、 0.25、 0.5、 1.0)mg/mL AP处理。CCK-8法观察AP对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测CNE2细胞KI-67抗原(ki67)的表达,Western blot法检测CNE2细胞凋亡相关蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-8、 c-caspase-9、 BAX和Bcl2的蛋白水平。结果提取得到的AP相对分子质量(M_r)为5000~15 000;AP可显著抑制CEN2细胞的增殖、诱导其凋亡;AP处理后,CEN2细胞的c-caspase-3、 c-caspase-9和BAX蛋白水平增加、 Bcl2蛋白水平降低,具有一定的剂量依赖性。结论 AP可明显抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖、诱导其凋亡,可能通过线粒体和死亡受体途径发挥作用。

灵芝的化学成分及其对人鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒活性

目的:研究灵芝所含有的化学成分,并探究其对人的鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒活性。方法:(1)利用实验室硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱法将灵芝进行系统分离纯化,再由波谱解析以及化学方法等相关手段进行结构鉴定;(2)经MTT法检验人的鼻咽癌CNE2细胞被灵芝化学成分增殖抑制的作用,并筛选其中活性成分。结果:(1)本实验从灵芝里分离出6个三萜类的化合物和1个甾醇类的化合物,分别是ganodermanontriol、ergosterol peroxide、ganoderol B、ganodermanondiol、ganoderone A、lucialdehyde C以及lucialdehyde B。(2)其中浓度为5 ~ 80 μg·mL^(-1)的区间里,人鼻咽癌CNE2细胞生长受化合物1、3的抑制作用十分弱,而其他的化合物都显现出一定的细胞毒活性,并呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞生长。人鼻咽癌CNE2细胞受化合物2、4、5、6和7作用48 h的IC50值分别是(42.80±1.16)μg·mL^(-1)、(64.35±1.20)μg·mL^(-1)、(55.30±1.32)μg·mL^(-1)、(15.33±1.21)μg·mL^(-1)、(14.17±1.10)μg·mL^(-1)。结论:由灵芝分离出的三萜成分lucialdehyde C、lucialdehyde B对人鼻咽癌CNE2细胞生长具有较强的抑制作用,有希望成为灵芝治疗鼻咽癌的活性成分。

探讨姜黄素通过NF-κB对鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长抑制作用、诱导凋亡作用及其机制研究

目的:探讨姜黄素通过NF-κB对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响。方法:MTT法测定姜黄素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响,采用流式细胞仪测定姜黄素不同浓度下的CNE-2Z细胞凋亡情况,Western Blot测定NF-κB蛋白的表达。结果:姜黄素能影响CNE-2Z细胞的NF-κB蛋白表达,使NF-κB蛋白表达水平降低,说明姜黄素对CNE-2Z的增殖和转移有一定的影响。姜黄素对CNE-2Z的作用效果受作用时间和浓度影响,其对CNE-2Z细胞24 h的IC50数值为(43.514~45.435)μmol/L,48 h的IC50数值为(8.366~13.11)μmol/L,72 h的IC50数值为(5.658~8.469)μmol/L。结论:姜黄素能够通过NF-κB蛋白的表达,来抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖与侵袭。姜黄素浓度越高,作用时间越长,CNE-2Z细胞增殖抑制效果越好。

青天葵总黄酮对人鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠皮下肿瘤的抑制作用

目的:研究青天葵总黄酮(TFNF)对BALB/c裸鼠人鼻咽癌细胞皮下种植模型中TGF-β1/Erk/MAPK通路的调控作用。方法:BALB/c裸鼠皮下接种CNE-2细胞(1.0×107细胞/ml)建立鼻咽癌荷瘤模型,苏木精-伊红染色(HE)行病理判断,免疫组化法(IHC)观察细胞周期调节蛋白-67(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。免疫印迹法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞外调节蛋白激酶(Erk)、p-Erk、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-MAPK的蛋白表达水平。试剂盒法评估肾脏、肝脏、脾脏中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平。结果:与模型组比较,高剂量TFNF显著抑制荷瘤小鼠肿瘤体积与质量,显著降低Ki67(55.19%)、PCNA(46.65%)表达水平,提高肾脏、肝脏、脾脏中SOD水平至3.88、2.98、3.71U/mgprot,降低肾脏、肝脏、脾脏的MDA水平至2.19、1.05、2.85nmol/mgprot。TFNF可降低肿瘤组织中TGF-β1(47.36%)、p-Erk/Erk(81.13%)、p-MAPK/MAPK(19.80%)的蛋白表达水平。结论:TFNF可调控TGF-β1/Erk/MAPK通路抑制肿瘤生长,并减轻荷瘤裸鼠主要脏器的氧化损伤发生。

BDH2抑制MIF影响鼻咽癌对巨噬细胞的招募

目的:研究3-羟基丁酸脱氢酶2(BDH2)和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在鼻咽癌(NPC)中的表达特征及其对肿瘤免疫微环境中巨噬细胞浸润的影响。方法:使用BDH2过表达质粒转染5-8F细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测BDH2的转录水平。使用GEO数据库和蛋白免疫印迹法(western blotting)验证BDH2和MIF的表达差异。通过酶联免疫吸附法和比色法分别检测细胞内MIF和乙酰乙酸的表达。通过免疫组化分析BDH2和MIF在NPC和正常鼻咽上皮组织中的表达水平,使用连续切片染色和相关性分析评估MIF表达与M1、M2型巨噬细胞浸润的关系。结果:过表达BDH2显著增加了5-8F细胞内乙酰乙酸含量(P<0.01),且MIF表达下调。GEO数据库分析和免疫组化结果表明NPC中BDH2的表达显著下调(P<0.0001),MIF的表达显著上调(P<0.01)。在连续切片分析中,高表达MIF的NPC组织内M1巨噬细胞浸润减少(P<0.0001)。结论:NPC中BDH2-MIF轴通过抑制M1巨噬细胞的浸润调控免疫微环境,可能是NPC潜在的治疗靶点。

IFIT3对鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭转移及EMT的影响

目的探讨干扰素诱导的具有四肽重复序列3(interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 3,IFIT3)在鼻咽癌CNE-2R细胞中的表达及其对细胞侵袭、转移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。方法采用RT-qPCR和Western blot检测IFIT3在鼻咽癌细胞CNE-2R和正常鼻咽上皮细胞NP69中的表达水平。鼻咽癌CNE-2R细胞分别感染IFIT3 shRNA的3个序列LV1、LV2、LV3,并设立阴性对照组(NC组);利用RT-qPCR和Western blot检测上皮表型E-cadherin及间质表型N-cadherin和Vimentin的表达,采用划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果IFIT3在鼻咽癌CNE-2R细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较NP69细胞显著上调(均P<0.001)。IFIT3在LV1组、LV2组和LV3组中的mRNA和蛋白表达水平均低于NC组(均P<0.001),且以LV2组和LV3组的表达水平最低。与NC组相比,LV2组和LV3组的细胞迁移率显著下降,迁移和侵袭细胞数显著减少,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(均P<0.001)。结论IFIT3在鼻咽癌CNE-2R细胞中表达上调,沉默IFIT3后CNE-2R细胞的侵袭、转移能力以及EMT显著被抑制。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

茶多酚对人鼻咽癌细胞株CNE_2细胞DNA损伤和细胞周期的影响

目的 观察茶多酚（ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ， ＴＰ） 对人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 的损伤作用和细胞周期的影响。方法 用琼脂糖凝胶电泳方法测定ＴＰ对细胞ＤＮＡ的断裂作用；用流式细胞术（ＦＣＭ） 观察ＴＰ对ＣＮＥ２ 细胞周期的变化及其诱导凋亡。结果 ＴＰ可引起ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 断裂、其断裂程度随剂量的增加和作用时间的延长而增强。ＴＰ不同浓度和不同作用时间可干扰ＣＮＥ２ 细胞在周期中的进程，使Ｇ１ 期细胞明显增多，Ｓ期细胞减少，细胞分裂增殖指数（ＰＩ）亦随之降低。同时，ＴＰ可诱导ＣＮＥ２ 细胞凋亡，其凋亡率随ＴＰ浓度的增加和作用时间的延长在逐渐增加。结论 ＴＰ１９９８１２０４ 收稿，１９９９０７３１ 修回＊ 国家自然科学基金资助课题，Ｎｏ ３９３７０８００作者简介：谢冰芬，女，副研究员，硕士生导师，研究方向为肿瘤药理可引起人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞的ＤＮＡ 断裂，使细胞停滞于Ｇ１ 期，阻止Ｇ１ 期细胞进入Ｓ期；同时亦可诱导细胞凋亡。