放疗诱导鼻咽癌细胞株CNE1热休克蛋白高表达

目的鼻咽癌是一种以放射治疗为主的头颈肿瘤,但部分鼻咽癌对放疗耐受。为了解鼻咽癌放疗耐受机制,本实验拟初步探讨人高分化鼻咽癌细胞株CNE1放疗后的蛋白质改变。方法利用固相pH梯度二维凝胶电泳,建立CNE1放疗前后总蛋白质2DE图谱,利用MALDI TOF MS及数据库搜索初步分析和鉴定部分放疗前后差异蛋白质点。结果高分子量酸性蛋白质在CNE1放疗后20min高表达,其中大多为热休克蛋白质HSPs(heatshockproteins,HSPs)。结论放射能诱导CNE1的热休克蛋白高表达,它们可能与鼻咽癌放疗耐受有关。

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其作用机制的实验研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)诱导人鼻咽癌细胞株凋亡作用及其相关机制。方法采用流式细胞术、电镜、TUNEL方法检测As2O3诱导CNE1细胞凋亡作用,免疫组织化学法检测As2O3对CNE1细胞p53、bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果经As2O3处理的CNE1细胞发生凋亡,表现为FCM可检测到“亚二倍体峰”,形态学上可见核固缩,染色质边集,凋亡小体形成等改变;TUNEL法可检测到细胞内呈棕色颗粒的凋亡细胞,随着药物浓度升高,凋亡细胞发生率逐渐增多,As2O3目浓度为0.5mg/L、1.0mg/L和2.0mg/L作用48h后,CNE1细胞的凋亡指数分别为2.66±0.64、8.15±0.96和11.59±0.68,显著高于非药物处理组(0.43±0.43,P<0.05)。经As2O3处理的CNE1细胞内p53和bax蛋白表达较对照组明显增加,与凋亡指数呈正相关关系(r=0.554,P=0.011;r=0.891,P=0.000…);p53和bax蛋白表达也呈正相关关系(r=0.626,P=0.003)。结论As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE1细胞凋亡,其机制可能与上调p53、bax基因表达有关。

转染hEndostatin基因对CNE2细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:肿瘤的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡,有效地抑制肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨转染人内皮抑素基因hEndostatin对人鼻咽癌细胞株CNE2裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导法,分别将pBlast-hIL-hEndostatin、pBlast-hEndostatin和pBlast-MCS质粒导入人鼻咽癌细胞株CNE2,MTT法在体外检测转导细胞表达的hEndostatin的活性,并在体内实验中观察转导的CNE2细胞在裸鼠上的致瘤性的差异。结果:转染pBlast-hIL-hEndostatin的CNE2细胞的上清能显著抑制血管内皮细胞ECV304的生长,其在裸鼠体内形成的瘤组织重量和体积均显著低于对照组(P<0.01),生长速度明显慢于对照组细胞。结论:转染hEndostatin基因能有效抑制CNE2细胞在裸鼠体内的生长。

P-gp糖蛋白及其编码的基因在受照射鼻咽癌细胞株中的表达

目的模拟临床放射方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞分次照射，检测照射前、后CNE细胞肿瘤多药耐药蛋白P-gp及其编码的基因MDR1的表达和功能。方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞进行体外培养，待细胞进入指数生长期后模拟临床放疗方法进行X射线分割照射，2Gy／（d·f^-1），连续5d，总剂量10Gy。于照射前、照射后4、8、13、17和21d分别收取标本进行检测。利用RT-PCR、免疫细胞化学检测照射前、后人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1及P-gp的表达；MTT法检测其耐药指数（RI）的变化，评价P-gp的功能。结果人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1基因照射前呈弱表达，照后4d过度表达，8d到21d表达逐渐降低，与照射前比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；其编码的蛋白产物P-gp照射前、照射后4和8d呈弱表达，13至21d表达增高，P-gp迟于MDR1基因高表达。MTT法检测耐药指数结果显示：照射前、照射后4和8d RI值均为1，13、17和21d RI分别增高为8、10和11．2，RI值变化的情况与P-gp的变化情况相一致。结论人鼻咽鳞癌CNE细胞照射前MDR1及P-gp呈弱表达，有原始的低度耐药性；照射后MDR1及功能性P-gp高表达并且持续一段时间。

近致死量照射CNE1后存活克隆生物学性状初步分析

目的放疗后残存癌细胞重新克隆是鼻咽癌放疗复发的主要原因,本实验旨在分析照射残存癌细胞的生物学特征。方法MTT法测定6MV-X射线照射人鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE1的近致死剂量,用近致死量照射获得残存癌细胞存活克隆,然后用流式细胞仪检测存活克隆与亲本细胞株的细胞周期分布,应用二维电泳和质谱技术分析两者的蛋白质表达改变。结果用15Gy近致死量照射CNE1得到了照射存活克隆,并命名为CNE1-15GyR。CNE1-15GyR与亲本细胞株相比:G1/G0期比例增高而G2/M期比例降低;有98个蛋白质表达差异点,其中76个蛋白质斑点上调,22个蛋白质斑点下调;对其中上调的20个蛋白质斑点进行了质谱鉴定,发现细胞间叶来源的中间丝蛋白Vimentin在存活克隆CNE1-15GyR中表达增高。结论照射筛选的存活克隆CNE1-15GyR与亲本细胞株CNE1相比生物学性状发生了改变,细胞间叶来源的中间丝波形蛋白Vimentin在CNE1-15GyR克隆中表达增高,可能与G/G期比例增高有关。