人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平的定量测定

目的:建立实时荧光定量PCR(RFQPCR)检测人B细胞激活因子受体TACImRNA含量的方法,初步探讨健康献血员外周血单个核细胞(PBMC)中TACImRNA表达水平。方法:在TACI基因高保守区设计特异性的引物和荧光探针,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中TACImRNA准确含量,并以TACImRNA和β2MmRNA含量的比值作为评价TACI表达水平的指标。结果:本法检测TACImRNA含量的线性范围为109～101pg/ml,批内和批间重复性测定的CV分别为2.97%～9.32%和5.86%～10.29%。40例健康献血员样本的PBMC中35例(87.5%)检出有TACImRNA表达,范围为0.02～2.11。结论:成功建立RFQPCR检测TACImRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性,为进一步探讨TACImRNA表达水平与自身免疫性疾病发病机制之间的关系奠定了基础。

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的：建立实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体（BAFF-R）含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中BAFF-RmRNA表达的检测价值。方法：在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录（RT-PCR）扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-RmRNA含量，并以BAFF-RmRNA和132MmRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果：RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^∧9～10^∧1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％（25／30）有BAFF-RmRNA表达，范围为0．14-1．03。结论：RFQ-PCR检测BAFF-mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。

人B细胞激活因子受体-BAFF-R基因mRNA实时荧光定量PCR标准品的构建

目的构建实时荧光定量PCR(RFQ,-PCR的标准品以定量检测人B细胞激活因子受体。BAFF-R基因mRNA的表达。方法在BAFF-R基因高保守区设计了特异性的引物和荧光探针,用RT-PCR法从人外周血单个核细胞的总mR-NA中逆转录扩增BAJFF-R的cDNA,将纯化的BAFF-R cDNA与PGEM-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,然后提取重组质粒DNA,用限制性核酸内切酶EcoR I进行酶切鉴定并测序分析,最后对质粒标推进行实时荧光定量PCR检测。纯化质粒并检测260nm吸光度,确定原被的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。结果酶切鉴定、PCR扩增及测序分析均证实TNF-αcDNAn重组到PGEM-T载体上。结论成功克隆了BAFF-R实时荧光PCR定量标准。

人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平定量标准品的构建

目的建立一种简便快速TACI基因表达水平定量标准品的制备方法。方法PCR扩增目的片段,与T载体连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行测序证实,质粒用核酸分析仪准确定量,进行10倍系列稀释,作为标准品。结果:标准品建立的标准曲线有较大的线性范围,批内和批间重复性也较好,且可长期稳定保存。结论:使用质粒标准品对样本中TACI基因表达水平测定是一种可行的办法。

基于核因子κB受体活化因子配体信号通路激活破骨细胞治疗骨结核的研究进展

骨结核是一种严重危害人体健康的骨科感染性疾病,其病灶组织破坏的最大特点是骨质的吸收及破坏,其中破骨细胞是骨吸收的主要细胞。破骨细胞是由造血干细胞分化而来的多核细胞,通常是由核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)与核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)调控产生。结核分枝杆菌可以通过RANKL信号通路激活破骨细胞生成转录因子,以增强破骨细胞对骨质的吸收。笔者通过综述RANKL信号通路的结构及破骨细胞的研究进展,以及它们在骨结核临床治疗中可能发挥的潜在作用,为该领域的研究提供新的思路。

单核细胞Toll样受体和核因子-κB水平与2型糖尿病患者自主神经病变的相关性

目的探讨单核细胞中Toll样受体(TLR)、核因子-κB(NF-κB)表达水平与2型糖尿病(T2DM)患者自主神经病变的相关性。方法选择2021年4月至2022年12月濮阳市人民医院收治的112例T2DM患者为观察组,另选择同期在本院进行体检的50例健康志愿者为对照组。采用反转录聚合酶链反应检测2组受试者血浆单核细胞中TLR2、TLR4、NF-κB表达水平。根据是否并发有自主神经病变将观察组患者分为自主神经病变组(n=46)和无自主神经病变组(n=66),比较2组患者的临床资料,将差异有统计学意义的指标进一步行多因素logistic回归来分析T2DM患者发生自主神经病变的危险因素;采用Spearman相关分析TLR2、TLR4、NF-κB表达水平与T2DM患者发生自主神经病变的相关性。结果观察组患者单核细胞中TLR2、TLR4、NF-κB水平显著高于对照组(P<0.05)。单因素分析结果显示,自主神经病变组与无自主神经病变组患者的年龄、单核细胞/高密度脂蛋白比值(MHR)及胱抑素C、TLR2、TLR4、NF-κB水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,MHR、TLR2、TLR4、NF-κB是T2DM患者发生自主神经病变的危险因素(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,TLR2、TLR4、NF-κB水平与T2DM患者发生自主神经病变呈正相关(r=0.825、0.822、0.819,P<0.05)。结论TLR2、TLR4、NF-κB在T2DM患者中表达上调,TLR2、TLR4、NF-κB表达水平与T2DM患者自主神经病变有关。

血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

B细胞激活因子及其靶向药物与炎症性肠病的研究进展

B细胞激活因子(B-cell activating factor,BAFF)作为B细胞的关键调节因子,参与多种自身免疫性疾病。炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组病因尚不明确的慢性、反复发作的肠道炎症性疾病,近年来全球发病率呈上升趋势。多种因素引起的异常免疫反应与IBD发病密切相关,B细胞异常活化及自身抗体产生增加在溃疡性结肠炎的发病中已得到证实,而BAFF是否参与IBD发病机制尚不明确。该文就目前关于BAFF在IBD发病机制中的潜在作用以及在IBD中针对BAFF的靶向治疗研究进行综述,旨在为IBD靶向治疗提供思路。

生腺布液汤对干燥综合征NOD小鼠B细胞活化因子及B细胞活化因子受体表达的影响

目的:观察生腺布液汤对干燥综合征(SS)NOD模型小鼠颌下腺及血清中B细胞活化因子(BAFF)及B细胞活化因子受体(BAFFR)的影响,探索生腺布液汤治疗SS的作用机制。方法:将24只8周龄雌性NOD小鼠随机分为模型组、硫酸羟氯喹组及生腺布液汤组,每组8只,另取8只同周龄雌性BALB/c小鼠设为正常对照组。给药组分别予生腺布液汤1.75 g/ml灌胃及硫酸羟氯喹溶液0.0026 g/ml灌胃,模型组及正常组予等量蒸馏水,连续8周。实验期间记录小鼠的一般情况及每日饮水量;HE染色观察各组小鼠颌下腺组织病理变化;免疫组化法检测颌下腺组织BAFF、BAFFR表达;ELISA法检测血清BAFF含量。结果:与模型组相比,生腺布液汤组和硫酸羟氯喹组小鼠饮水量下降(均P<0.05),血清BAFF及颌下腺组织BAFF、BAFFR表达降低(均P<0.05),颌下腺组织中淋巴细胞浸润减少,未见明显浸润灶等组织结构破坏。结论:生腺布液汤能够改善干燥综合征NOD小鼠口干症状,减轻颌下腺淋巴细胞浸润程度,其作用机制可能与降低颌下腺及血清BAFF、BAFFR表达相关。

B淋巴细胞刺激因子及其受体在狼疮性肾炎中的研究现状

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)最常见的并发症,同时也是引起患者死亡的重要原因之一。B淋巴细胞刺激因子(B-cell activating factor,BAFF)在B细胞生长、发育和分化中具有重要的免疫调节作用,BAFF过度表达与SLE、类风湿性关节炎、干燥综合征等自身免疫性疾病的发生发展密切相关;BAFF会导致自身抗体产生和免疫复合物在肾脏沉积,参与LN的发病过程。近年来针对血清BAFF在LN临床诊断、病情评估及相关治疗方面显示出可喜的应用前景,现就BAFF在LN中的相关研究现状做一综述。

B细胞淋巴瘤因子-3对乳腺癌雌激素受体α信号通路及细胞增殖的影响

目的探讨B细胞淋巴瘤因子-3(Bcl-3)对乳腺癌雌激素受体α(ERα)信号通路以及细胞增殖的影响。方法取对数生长期MCF-7细胞,随机分为siControl组和siBcl-3#1组,分别滴加ControlsiRNA和siBcl-3#1siRNA,应用细胞转染试剂Lipofectamine TM 2000转染5 h。取稳定转染48 h后的siControl组和siBcl-3#1组MCF-7细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测MCF-7细胞中Bcl-3、乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)、PDZ结构域蛋白1(PDZK1)和ERα靶基因三叶因子1(TFF1)mRNA的表达,Western blot法检测MCF-7细胞中Bcl-3、ERα蛋白表达,细胞计数试剂盒-8实验检测MCF-7细胞增殖能力。取HEK293T细胞,随机分为Input组(即阳性对照组)、IP组(即免疫共沉淀组)和IgG组(即阴性对照组),共转染Bcl-3和ERα质粒48 h后,用100μL免疫共沉淀(Co-IP)细胞裂解液冰上裂解细胞后,分离上清液;Input组取90μL上清液,加入30μL 4×Loading buffer;IP组取450μL上清液,加入40μL Protein A/G和绿色荧光蛋白抗体0.5μL;IgG组取450μL上清液,加入0.5μL IgG、30μL Protein A/G琼脂糖磁珠;采用Co-IP实验检测细胞中Bcl-3和ERα结合效果。取对数生长期的MCF-7细胞,采用免疫荧光共定位实验检测Bcl-3和ERα是否存在共定位现象。结果si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3、GREB1、TFF1和PDZK1 mRNA相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3蛋白和ERα蛋白相对表达量显著低于siControl组(P<0.05)。培养0、24 h时,si-Bcl-3#1组与siControl组MCF-7细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,si-Bcl-3#1组MCF-7细胞增殖能力显著低于siControl组(P<0.05)。Co-IP实验结果显示,Bcl-3和ERα存在相互作用。免疫荧光共定位实验结果显示,Bcl-3和ERα存在共定位现象。结论Bcl-3在乳腺癌细胞中呈高表达,其能够提高乳腺癌ERα信号通路的转导活性,促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖。

miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体影响牙槽骨成骨细胞增殖及凋亡

背景:miR-338-3p能够抑制破骨细胞分化,下调核因子κB受体活化因子配体水平能够促进骨形成。然而miR-338-3p是否通过调控核因子κB受体活化因子配体表达影响牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡尚不清楚。目的:探究miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:分离人牙槽骨成骨细胞,对其进行细胞转染及Wnt-C59(Wnt/β-catenin通路抑制剂)处理,分为转染对照组、miR-338-3p组、miR-338-3p+对照组、miR-338-3p+核因子κB受体活化因子配体组和miR-338-3p+Wnt-C59组。双荧光素酶实验验证miR-338-3p对核因子κB受体活化因子配体的调控作用;CCK-8、EdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平;RT-qPCR检测细胞miR-338-3p、核因子κB受体活化因子配体、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3βmRNA表达水平;Western Blot检测细胞核因子κB受体活化因子配体、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3β蛋白表达水平。结果与结论:①miR-338-3p靶向调控核因子κB受体活化因子配体;②过表达miR-338-3p后,细胞存活率、EdU阳性细胞率、S期细胞比例升高,细胞凋亡率降低,miR-338-3p、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Wnt-3a、β-catenin mRNA和蛋白水平升高,Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、核因子κB受体活化因子配体、糖原合酶激酶3βmRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);③过表达核因子κB受体活化因子配体或Wnt-C59处理能够减弱过表达miR-338-3p对细胞增殖、凋亡的影响(均P<0.05);④结果表明,miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体表达可促进牙槽骨成骨细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

血清糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对表皮生长因子受体扩增伴随突变的非小细胞肺癌预后的预测作用

目的评估游离的糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB)对表皮生长因子受体(EGFR)扩增伴随突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的耐药和预后的预测价值。方法选取2018年3月至2019年9月在唐山市人民医院接受治疗的55例EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者作为观察组,患者均应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)作为一线治疗方案;随机选取同期体检中心67例健康人群血液样本作为对照组。比较2组游离GPNMB表达水平;采用t检验或χ2检验分析GPNMB表达和患者临床病理特征的相关性;结合临床疗效,评估其作为耐药标志物的价值。随访患者的无进展生存时间(PFS),并采用多因素Cox回归分析影响EGFR扩增伴随突变NSCLC患者生存的独立危险因素。结果与对照组相比,观察组游离GPNMB表达水平显著升高。观察组游离GPNMB水平和EGFR-TKI的临床疗效显著相关(P=0.016),GPNMB高表达患者的耐药程度更强,PFS也更短(P=0.032)。游离GPNMB高水平(HR=4.029,95%CI:1.942~8.358,P<0.001)是影响患者生存的独立危险因素。结论EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者游离GPNMB表达水平显著上调;且其高表达与患者耐药程度的增强及不良预后显著相关,是影响患者生存的独立危险因素。

积雪草酸调控白细胞介素-6/信号转导子和转录激活子3/核转录因子-κB通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨积雪草酸调控白细胞介素(IL)-6/信号转导子和转录激活子3(STAT3)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发来制备哮喘小鼠模型,随机分为模型组、积雪草酸低剂量组(54 mg/kg)、积雪草酸高剂量组(108 mg/kg)、积雪草酸高剂量(108 mg/kg)+Colivelin(IL-6/STAT3/NF-κB激活剂,2 mg/kg)组,每组各10只。另选10只小鼠在致敏和激发阶段给予等剂量生理盐水设为对照组,用积雪草酸和Colivelin分组处理各组小鼠后检测其肺组织病理形态,肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数,外周血Treg/Th17,BALF和血清中Treg、Th17细胞分泌因子水平,肺组织IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生明显病理损伤,外周血Treg细胞占比和Treg/Th17,BALF和血清IL-10、IL-35水平降低(P<0.05)。肺部炎症评分,BALF中白细胞计数与嗜酸粒细胞计数,外周血Th17细胞占比,BALF和血清IL-17、IL-6水平,肺组织IL-6蛋白表达与p-STAT3/STAT3、p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。低、高剂量积雪草酸可逆转哮喘模型小鼠上述病理变化,且高剂量积雪草酸作用更强。Colivelin可减弱积雪草酸对哮喘模型小鼠上述病理变化的作用。结论:积雪草酸可通过减弱IL-6表达与STAT3、NF-κB的磷酸化,抑制哮喘小鼠炎症细胞及炎症因子产生,从而减轻气道炎症及肺组织损伤,改善肺功能。

清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体-α的调节作用研究

目的:探讨清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α的调节作用。方法:取HepG2细胞株,采用油酸构建NAFLD细胞模型。将细胞分为正常对照组(无油酸建模+无药物处理)、模型对照组(有油酸建模+无药物处理)和清肝降脂汤组(有油酸建模+有药物处理)。采用CCK-8实验检测细胞活性。采用油红O染色定性定量检测清肝降脂汤对细胞内脂质的影响,定量计算脂质含量的抑制率。同时,测定细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)含量;并采用聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测脂肪代谢标志物PPAR-α和成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的表达水平。结果:与正常对照组相比,模型对照组的HepG2细胞活性显著增高,脂质含量显著增高,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著增高,而PPAR-α和FGF21表达水平显著降低(均P<0.05);而与模型对照组相比,清肝降脂汤组的HepG2细胞活性显著降低,脂质含量显著降低,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著降低,而PPAR-α和FGF21表达水平显著增高(均P<0.05)。结论:清肝降脂汤有助于降低HepG2细胞活性、脂质含量以及MDA、SOD、TG、TC和FFA含量,并促进PPAR-α和FGF21表达,进而调节脂质代谢,抑制NAFLD发展进程。

核因子κB受体活化因子信号转导机制与破骨细胞的活化

背景:破骨细胞是目前已知的唯一一种骨吸收细胞,其生命活动对骨骼的正常发育和骨骼损伤修复至关重要。在绝大多数骨病中,破骨细胞均显示出异常增殖分化和骨吸收活性增加,而核因子κB受体活化因子信号是调控破骨细胞生命过程的关键信号通路。目的:总结对破骨细胞核因子κB受体活化因子信号下游靶点及DNA转录因子的最新研究进展,为相关疾病的研究和治疗提供依据。方法:文献检索数据库包括中国知网、万方、维普数据库、PubMed、Embase及Web of Science数据库,中文检索词为“破骨细胞,破骨前体细胞,骨质疏松症,骨代谢,发病机制,表观遗传学,信号通路,信号传导,转录因子,组织工程”,英文检索词为“osteoclasts,osteoclast precursor cells,osteoporosis,bone metabolism,pathogenesis,epigenetics,signaling pathway,signal transduction,transcription factors,tissue engineering”,时间设置为2017-2021年,根据纳入和排除标准共筛选52篇文献。结果与结论:核因子κB受体活化因子的特殊结构决定了其信号传导需要与肿瘤坏死因子受体激活因子6结合来募集多种蛋白、活性酶以及细胞因子,形成具有内在酶活性的核因子κB受体活化因子复合物;该复合物通过激活核因子κB、丝裂原活化蛋白激酶等信号通路的传导,最终调控破骨细胞分化、增殖、骨吸收等生命过程。

抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。

慢性阻塞性肺疾病患者血清HMGB1、TLR4、sST2及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57例)与稳定组(43例);另选择健康体检者48例作为对照组。运用酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1、TLR4、sST2水平及血清白细胞介素(IL)-6、IL-33和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;运用肺功能仪测定第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)和FEV1占预计值百分比(FEV1%)。比较3组血清HMGB1、TLR4、sST2水平,细胞因子水平和肺功能变化;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度相关性;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与肺功能相关性;采用多因素Logistic回归分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与慢阻肺关系。结果 急性加重组和稳定组血清HMGB1、TLR4、sST2水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组血清IL-6、IL-33和TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组FEV1/FVC和FEV1%显著低于对照组(P<0.05);且急性加重组显著低于稳定组(P<0.001);经Pearson分析,血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与病情严重程度呈线性正相关(P<0.001);血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与FEV1/FVC和FEV1%呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α为慢阻肺影响因素。结论 慢阻肺患者血清HMGB1、TLR4、sST2水平升高,细胞因子IL-6、IL-33和TNF-α水平升高,且血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度呈正相关而与肺功能呈负相关。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

右美托咪定对癫痫大鼠海马神经元细胞凋亡与Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

目的:探讨右美托咪定对癫痫大鼠海马神经元细胞凋亡和Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:选择45只健康SD大鼠随机分为A组、B组和C组,各15只。适应饲养1周后给予C组大鼠腹腔注射20μg/kg右美托咪定,给予A组和B组大鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,均连续腹腔注射7 d。随后B组和C组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制作大鼠癫痫模型,A组大鼠不做处理。造模成功1周后进行Morris水迷宫测试。处死大鼠取脑组织,采用TUNEL技术检测海马组织神经元凋亡比例,采用酶联免疫吸附法检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平,采用Western blot技术检测海马组织中NF-κB、磷酸化NF-κB(pNF-κB)、离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、TLR-4相对表达水平。结果:C组各时间点逃避潜伏期显著长于A组,但显著短于B组(均P<0.05);C组大鼠平台穿越次数显著少于A组,多于B组(均P<0.05)。B组和C组大鼠海马组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平均显著高于A组,C组大鼠各指标显著低于B组(均P<0.05)。C组大鼠海马神经元凋亡比例显著高于A组,但显著低于B组(均P<0.05)。C组大鼠海马组织pNF-κB、Iba-1和TLR-4蛋白相对表达水平显著高于A组,但显著低于B组(均P<0.05)。结论:右美托咪定不仅可以通过激活TLR-4/NF-κB信号通路抑制癫痫大鼠海马神经元的炎性反应,还可以通过激活TLR-4/NF-κB信号通路下调炎症因子进而抑制癫痫大鼠海马神经元细胞的凋亡,从而改善神经功能,发挥神经保护作用。