人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。

编码人B7-2胞外区cDNA的克隆、表达及生物活性鉴定

B7 2分子是共刺激信号系统B7/CD2 8/CTLA 4中的重要成员之一 ,为了更深入地探讨B7 2分子在调控T细胞增殖、分化及相关信号传导过程中的作用 ,本研究通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增编码人B7 2分子胞外区的cDNA ,测序后定向插入多个原核表达载体并诱导目的蛋白表达 ,用Western印迹和MTT鉴定生物活性。结果表明 :通过pGEX 4T 2载体实现了在宿主菌BL 2 1 (DE3) codenplus RIL中较高水平的表达 ,蛋白表达量为 2 0 %。经Western印迹和MTT鉴定 ,所表达及初步纯化的B7 2胞外区重组蛋白能与抗人B7 2单抗发生特异性结合 ;在抗人CD3单抗的协同下 ,B7 2胞外区重组蛋白能有效地促进外周血单核细胞的增殖。结论 :B7 2胞外区重组蛋白的获得为进一步研究B7

Tn5细胞中单链抗体基因抗人重组质粒分子的表达分析

目的研究Tn5细胞中单抗抗人重组质粒（B7-2）基因的表达及其活性。方法基于具备信号肽单抗抗人B7-2构建,构建系统Bac-to-Bac并含单抗抗人B7-2杆状重组病毒AcBacmid单抗B7-2,对Tn5细胞采用不同感染复数（MOI）实施感染,进行24、48、72h不同时点细胞蛋白活性的分泌表达,并分析人外周血中单个核细胞受Raji刺激呈增殖表达,予以单抗抑制的效果。结果应用不同MOI对Tn5细胞感染,达72h后进行细胞收集,予以聚丙烯酰氨凝胶电泳（PAGE-SDS）分析,其MOI为1-10表达目的蛋白的量,确定最佳MOI为5;MTT法下自动酶标仪波长570nm位置吸光度,其吸光值的大小同细胞PBMC增殖可呈正相关;各组吸光值显示细胞Raji刺激外周血单个核细胞（PBMC）呈增殖表达,单抗抗人B7-2可以抑制Raji细胞刺激PBMC出现的增殖效应。结论单抗B7-2抗原抗体相结合的活性,以及对PBMC产生的抑制效应均存在,但未见单抗B7-2效应明显表达,有待进行更进一步的试验研究。