人BMP2及VEGF双基因共表达腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

目的构建人骨形态发生蛋白2(BM P 2)与血管内皮生长因子(VEGF)双基因腺病毒穿梭质粒。方法对pCU-CAGG S-hVEGF 165的目的基因亚克隆并引入新的酶切位点,定向连入腺病毒穿梭载体pShu ttle-CM V,将质粒pcDNA 3.1-BM P 2及pIRES酶切后,将BM P 2和IRES片段定向连入pShu ttle-CM V-hVEGF 165,构建可同时表达两个目的基因重组质粒pShu ttle-CM V-hBM P 2-IRES-hVEGF 165,进行酶切分析及序列测定。结果酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确。结论成功构建了BM P 2及VEGF双基因腺病毒穿梭质粒;为联合基因治疗骨缺损的研究奠定了基础。

人骨形成蛋白2A与小鼠成骨细胞表面特异性结合的研究

作者证实在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）Ｃ端肽段具有骨诱导活性，再利用噬菌体呈现载体克隆并表达了ｈＢＭＰ２ＡｃＤＮＡ３’端５６７个核苷酸，表面呈现有人ＢＭＰ２ＡＣ端肽段的噬菌体与小鼠成骨细胞系（ＭＣ３Ｔ３）能够特异地结合，用抗Ｍ１３噬菌体抗体进行ＥＬＩＳＡ实验呈阳性反应，同时用３ＨＴｄＲ参入重组ＢＭＰ２Ａ噬菌体时放射性计数比对照组高近１０倍，推测小鼠成骨细胞表面存在有人ＢＭＰ２Ａ受体。

复合珊瑚羟基磷灰石人工骨的研制和临床应用

目的 自行研制复合人工骨并评价其临床应用价值。方法 将天然海珊瑚碳酸钙在特定条件下经过“热液交换反应”先制成一种珊瑚羟基磷灰石 (CorallingHydroxyAptite,CHA)人工骨。再将此CHA人工骨与重组人BMP2 (rhBMP2 )和 2 %几丁糖复合 ,制备成rhBMP2 /CHA复合人工骨。将此新型复合人工骨分别植入 2 0只SD大白鼠体内 ,观察其生物相容性和成骨能力。并应用临床治疗骨缺损和椎间融合共 30例 ,观察术后局部伤口情况 ,全身反应和骨愈合情况。结果 随访观察平均 14个月 ,无全身性异常反应 ,仅 1例伤口有渗液 ,3周内伤口愈合 ,其余无不良反应 ,伤口均在 2周内一期愈合。骨愈合情况 :骨囊肿和胫骨干骺端骨折骨缺损植骨后 2个月愈合 ;脊柱椎间融合术后 3个月融合 ;骨不连术后 4～ 6个月愈合 ,无并发症发生。人工骨在观察期内未能完全降解。结论 自行研制的rhBMP2 /CHA复合人工骨生物相容性好 ,无毒性 ,成骨诱导作用优于单纯CHA和异体脱钙骨 ,临床应用满意 ,是一种比较理想的骨移植替代物。