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人Bcl-2蛋白的基因克隆、表达及初步活性分析
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作者 胡美茹 张学敏 +2 位作者 靳宝锋 兰雨 沈倍奋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期595-598,共4页
目的 :以特定形式对高度疏水性的人Bcl 2 (hBcl 2 )蛋白进行可溶性表达 ,获得非疏水性hBcl 2蛋白并具备生物学结合活性 ,为进一步研究hBcl 2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法 :用PCR方法对hBcl 2基因... 目的 :以特定形式对高度疏水性的人Bcl 2 (hBcl 2 )蛋白进行可溶性表达 ,获得非疏水性hBcl 2蛋白并具备生物学结合活性 ,为进一步研究hBcl 2三维结构并在此基础上研发特异性小分子药物提供充足的蛋白样品。方法 :用PCR方法对hBcl 2基因进行克隆重组 ,插入原核表达载体pET2 8a(+)中。用WesternBlot和MALDI TOF生物质谱鉴定 ,采用荧光极化方法进行活性测定。结果 :重组hBcl 2在E .Coli中实现了高效、可溶性的融合表达 ,重组蛋白经纯化至电泳纯 ,具备了与Bcl 2家族Bak蛋白BH3功能域特异结合的能力 ,表明原核表达的重组hBcl 2具有较好的结合活性。结论 :成功地对重组hBcl 2蛋白进行了可溶性表达和活性测定。 展开更多
关键词 人bcl-2蛋白 基因克隆 表达 活性分析
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从重组人Bcl-2质粒中制备pBluescript Ⅱ KS(-)载体
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作者 刘新光 梁念慈 《广东医学院学报》 1998年第1期4-6,共3页
目的:从重组人Bcl-2质粒中制备对基因重组和DNA测序等有用的pBluescriptⅡKS(-)载体。方法:先将重组人Bc1-2质粒转化DH5α菌株,小规模制备此质粒DNA,然后从低熔点琼脂糖凝胶中回收其中用Eco... 目的:从重组人Bcl-2质粒中制备对基因重组和DNA测序等有用的pBluescriptⅡKS(-)载体。方法:先将重组人Bc1-2质粒转化DH5α菌株,小规模制备此质粒DNA,然后从低熔点琼脂糖凝胶中回收其中用EcoRⅠ酶切的线性pBluescriptⅡKS(-)载体,用T4DNA连接酶催化连接并再次转化DH5α细菌,并用限制酶切鉴定,最后进行冻存和大量制备及纯化。结果:限制酶切分析证明两次转化的细菌分别是含重组人Bcl-2质粒和pBluescriptⅡKS(-)载体的工程菌。实验还大量制备了这两种质粒或载体DNA,并用聚乙二醇沉淀法进行了纯化。结论:利用分子生物学技术成功地从重组人Bcl-2质粒制备出pBluescriptⅡKS(-)载体。 展开更多
关键词 pBluescript 载体 DNA 质粒 重组人bcl-2
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乳腺浸润性导管癌组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化及意义 被引量:6
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作者 张印春 张丽娜 +3 位作者 齐立强 顾林 付丽 范宇 《山东医药》 CAS 2012年第2期60-61,共2页
目的观察乳腺癌浸润性导管癌(IDC)组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测85例IDC及其癌旁组织中的Bag-1、Bcl-2、Bax。结果 DC组织中Bag-1、Bcl-2、Bax阳性表达率分别为92.9%(79/85)、78.8%(67/85)... 目的观察乳腺癌浸润性导管癌(IDC)组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测85例IDC及其癌旁组织中的Bag-1、Bcl-2、Bax。结果 DC组织中Bag-1、Bcl-2、Bax阳性表达率分别为92.9%(79/85)、78.8%(67/85)、74.1%(63/85),癌旁组织中分别为58.8%(50/85)、58.8%(50/85)、67.1%(57/85)。IDC组织中Bag-1、Bcl-2阳性表达率与癌旁组织比较,P均<0.05。Bag-1表达与IDC肿瘤直径有关(P<0.05)。IDC组织中,Bag-1、Bcl-2表达呈正相关(r=0.512,P<0.05)。结论 IDC组织中Bag-1、Bcl-2高表达,二者在乳腺癌的发生发展中发挥作用。 展开更多
关键词 B细胞淋巴瘤/白血病-2 bcl-2相关抗凋亡蛋白-1 人bcl-2相关X蛋白 乳腺浸润性导管癌 乳腺导管内癌 乳腺肿瘤
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肝癌患者血清中miR-106、miR181含量检测及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系研究 被引量:5
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作者 马立兴 邵先玉 付明燕 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期49-52,共4页
目的研究肝癌患者血清中miR-106、miR181含量及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系。方法将2011年1月~2014年1月在我院确诊并接受手术治疗的150例肝癌患者纳入研究的观察组,同期在我院体检的150例健康者纳入研究的对照组。采用real-time PC... 目的研究肝癌患者血清中miR-106、miR181含量及其与肝癌组织中Bax、Bcl-2的关系。方法将2011年1月~2014年1月在我院确诊并接受手术治疗的150例肝癌患者纳入研究的观察组,同期在我院体检的150例健康者纳入研究的对照组。采用real-time PCR的方法检测血清中miR-106、miR181含量,采用Western-blot的方法检测肝癌组织中Bax、Bcl-2的含量。结果观察组血清中miRNA-181b的相对含量低于对照组、miR-106的含量高于对照组;肝癌组织中Bcl-2的相对含量高于癌旁正常组织、Bax的含量低于癌旁正常组织;miR-106与Bcl-2含量呈正相关、与Bax含量呈负相关;miR-181与Bcl-2含量呈负相关、与Bax含量呈正相关。结论肝癌患者血清中miR-106、miR181含量显著异常,且与凋亡相关分子Bcl-2、Bax的含量相关,miR-106、miR181可能是调控肝癌细胞增殖和凋亡的潜在分子机制。 展开更多
关键词 肝癌 微小RNA B细胞淋巴瘤基因2 人bcl-2相关X蛋白
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Expression of Bcl-2 inhibited Fas-mediated apoptosis in human hepatocellular carcinoma BEL-7404 cells 被引量:29
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作者 CHANGYUNCHAO YONGHUAXU 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2000年第3期233-242,共10页
Apoptosis plays an important role in embryonic development, tissue remodeling, immune regulation and tumor regression. Two groups of molecules (Bcl-2 family and "Death factor" family) are involved in regulat... Apoptosis plays an important role in embryonic development, tissue remodeling, immune regulation and tumor regression. Two groups of molecules (Bcl-2 family and "Death factor" family) are involved in regulating apoptosis. In order to know about the effect of Bcl-2 on apoptosis induced by Fas, a typical member of "Death factor" family, the transfection experiments with expression vectors pcDNA3-fl and pcDNA3-bcl-2 were performed in BEL-7404 cells, a human hepatocellular carcinoma cell line which expresses endogenous Fas, but not FasL and Bcl-2. The data showed that the expression of FasL in pcDNA3-fl transfected hepatoma cells obviously induced the apoptosis of the cells. However, the overexpression of Bcl-2 in pcDNA3-bcl-2 transfected 7404/b-16 cells counteracted pcDNA3-fl transient transfection mediated apoptosis. Further study by cotransfection experiments indicated that Bid but not Bax (both were pro-apoptotic proteins of Bcl-2 family) blocked the inhibitory effect of Bcl-2 on Fas-mediated apoptosis. These results suggested that Fas-mediated apoptosis in human hepatoma cells is possibly regulated by Bcl-2 family proteins via mitochondria pathway. 展开更多
关键词 Apoptosis FASL bcl-2 BID BAX human hepa- tocellular carcinoma cells.
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Exogenous phosphatidylethanolamine induces apoptosis of human hepatoma HepG2 cells via the bcl-2/bax pathway 被引量:10
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作者 Yu Yao Chen Huang +7 位作者 Zong-Fang Li Ai-Ying Wang Li-Ying Liu Xiao-Ge Zhao Yu Luo Lei Ni Wang-Gang Zhang Tu-Sheng Song 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2009年第14期1751-1758,共8页
AIM: To investigate the signaling pathways implicated in phosphatidylethanolamine (PE)-induced apoptosis of human hepatoma HepG2 cells. METHODS: Inhibitory effects of PE on human hepatoma HepG2 cells were detected by ... AIM: To investigate the signaling pathways implicated in phosphatidylethanolamine (PE)-induced apoptosis of human hepatoma HepG2 cells. METHODS: Inhibitory effects of PE on human hepatoma HepG2 cells were detected by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Cell cycle, apoptosis and mitochondrial transmembrane potential (ΔΨm) were analyzed by flow cytometry. Immunocytochemical assay and Western blotting were used to examine Bcl-2, Bax and caspase-3 protein levels in HepG2 cells treated with PE. RESULTS: PE inhibited the growth of HepG2 cells in a doseand timedependent manner. It did notaffect the cell cycle, but induced apoptosis. PE significantly decreased ΔΨm at 0.25, 0.5 and 1 mmol/L, respectively, suggesting that PE induces cell apoptosis by decreasing the mitochondrial transmembrane potential. The Bcl-2 expression level induced by different concentrations of PE was lower than that in control groups. However, the Bax expression level induced by PE was higher than that in the control group. Meanwhile, PE increased the caspase-3 expression in a doseand time-dependent manner. CONCLUSION: Exogenous PE induces apoptosis of human hepatoma HepG2 cells via the bcl-2/bax pathway. 展开更多
关键词 APOPTOSIS bcl-2 Bax Caspase-3 PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE Human hepatoma HepG2 cell
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体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠 被引量:8
7
作者 赵君 刘彬 +6 位作者 任文陟 张守峰 宇丽 李元平 乔贵林 扈荣良 殷震 《实验生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期197-201,共5页
将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情... 将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。 展开更多
关键词 精原干细胞 转染 转基因小鼠 人bcl-2 CDNA 小鼠乳清酸蛋白 乳腺组织 表达
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乳腺癌发生发展相关蛋白研究进展 被引量:1
8
作者 张振涛 刘兆华 杜东梅 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第33期101-102,共2页
乳腺癌发生发展是一个复杂的病理过程,国内外诸多研究显示其可能与肿瘤细胞的多种相关基因产物表达水平及活性变化有关。本文结合国内外最新研究发现,将与乳腺癌发生发展相关的人Bcl-2相关X蛋白、Livin、人生存素、第二个线粒体衍生的... 乳腺癌发生发展是一个复杂的病理过程,国内外诸多研究显示其可能与肿瘤细胞的多种相关基因产物表达水平及活性变化有关。本文结合国内外最新研究发现,将与乳腺癌发生发展相关的人Bcl-2相关X蛋白、Livin、人生存素、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂的研究进展情况做一综述。 展开更多
关键词 乳腺癌 人bcl-2相关蛋白 人生存素 LIVIN基因
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热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨 被引量:1
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作者 黄波 王晓东 郎贤平 《山东医药》 CAS 2012年第18期1-3,共3页
目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL... 目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL顺铂的培养液4μg/孔,D组先经过水浴处理后加入顺铂。继续培养72 h后,采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax。结果 NCI-H446细胞凋亡率A组为4.25%±0.56%、B组为8.12%±0.64%、C组为10.02%±0.82%、D组为12.12%±0.49%,B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。NCI-H446细胞中Bcl-2、Bax相对表达量A组分别为0.89±0.002 8、0.18±0.001 8,B组分别为0.61±0.004 2、0.32±0.002 0,C组分别为0.30±0.003 6、0.48±0.001 4,D组分别为0.21±0.001 7、0.64±0.002 5。B、C、D组与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。结论热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,其机制与降低细胞中Bcl-2表达、升高Bax表达有关。 展开更多
关键词 热能疗法 顺铂 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤细胞因子2 人bcl-2相关X蛋白 小细胞肺癌 肺肿瘤
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Effects of mild-warming moxibustion on Bcl-2 and PKC expressions of peripheral blood in elderly people 被引量:3
10
作者 施茵 崔云华 +7 位作者 吴焕淦 张卫 赵琛 刘慧荣 国兰琴 吴蓓玲 余爱珍 张英英 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 SCIE CAS CSCD 2012年第1期45-51,共7页
OBJECTIVE:To explore the anti-aging effects of mild-warming moxibustion on Bcl-2 and PKC expression in peripheral blood and general symptoms in elderly people.METHODS:A total of 61 elderly people and 30 non-elderly pe... OBJECTIVE:To explore the anti-aging effects of mild-warming moxibustion on Bcl-2 and PKC expression in peripheral blood and general symptoms in elderly people.METHODS:A total of 61 elderly people and 30 non-elderly people were enrolled.The total effective rate of mild-warming moxibustion was assessed by symptom scores,and Bcl-2 and PKC expression in peripheral blood was detected by flow cytometry.RESULTS:The total effective rate in the mild-warming moxibustion group was significantly higher than in the blank control group(P<0.01).Bcl-2 and PKC expression rates in peripheral blood in the blank control group were lower than in the normal control group(P<0.01),but higher after mild-warming moxibustion(P<0.01).CONCLUSION:The anti-aging effects of mild-warm-ing moxibustion may be due to increased Bcl-2 and PKC expression in peripheral blood in aged people. 展开更多
关键词 Mild-warming moxibustion Elderly bcl-2 PKC Clinical study
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